本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法。

背景技術(shù)：

藥食同源植物赤蒼藤(Erythropalum scandens BL.)又名螞蟥藤、龍香藤、細(xì)綠藤等，為鐵青樹科赤蒼藤屬木質(zhì)藤本植物，主要分布于我國廣西、廣東、云南、貴州等地，常見于低山丘陵或山區(qū)溪邊、山谷、密林或疏林、林緣或灌叢中。赤蒼藤具有清熱利濕、祛風(fēng)活血的功效，在廣西民間常用于肝炎、腫瘤、尿道炎、急性腎炎等疾病的治療。此外，赤蒼藤屬于野菜中葉菜類的一種，具有鮮嫩、清醇、芳香等獨特滋味，富含胡蘿卜素，維生素以及鐵、鋅、銅、錳等礦物質(zhì)，廣西民間有采摘赤蒼藤當(dāng)茶飲用的習(xí)慣。同時，赤蒼藤花排成腋生的二歧聚傘花序，花冠白色，花萼筒頂端有宿存的波狀裂齒，成熟時淡紅褐色，干后為黃褐色。葉紙質(zhì)至厚紙質(zhì)，卵形，葉上面綠色，背面粉綠色，結(jié)成下垂的果實，成熟時藍(lán)紫色，是極具觀賞價值的觀葉、觀果景觀樹種。

由于野生赤蒼藤生長境地的特殊性，難以采摘，無法滿足市場需求，因此大面積栽培勢在必行。鑒于目前國內(nèi)對赤蒼藤的人工繁育未取得突破性進(jìn)展，有必要建立赤蒼藤的組織培養(yǎng)快繁體系，本發(fā)明選擇赤蒼藤帶節(jié)莖段為外植體，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及移栽等步驟，實現(xiàn)了藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁。本發(fā)明具成本低、工藝簡單、周期短等特點，可直接用于赤蒼藤種苗的工廠化生產(chǎn)，對于赤蒼藤的遺傳改良和種質(zhì)資源保護(hù)具有重要的現(xiàn)實意義。

目前，國內(nèi)外尚未有赤蒼藤組織培養(yǎng)技術(shù)的報道，也未有赤蒼藤組培快繁專利的申請。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法，本發(fā)明選擇赤蒼藤帶節(jié)莖段為外植體，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及移栽等步驟，實現(xiàn)了藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法，包括依次進(jìn)行的如下步驟：獲取赤蒼藤的外植體、外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)、不定芽的繼代培養(yǎng)、不定芽的生根培養(yǎng)、試管苗移栽；

所述的外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括：MS培養(yǎng)基、4.0～6.0mg/L 6-BA、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L瓊脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，所述的外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)的方法為：將赤蒼藤的外植體經(jīng)清洗消毒處理后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于25～28℃進(jìn)行全暗培養(yǎng)25～30天即可誘導(dǎo)形成不定芽。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，不定芽的繼代培養(yǎng)所用的繼代培養(yǎng)基包括：MS培養(yǎng)基、2.0～3.0mg/L 6-BA、0.2～0.5mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L瓊脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，所述的不定芽的繼代培養(yǎng)的方法具體為：將經(jīng)過外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的不定芽切成長約1～2cm的莖段并接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～30天即可實現(xiàn)不定芽的繼代。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，不定芽的生根培養(yǎng)所用的生根培養(yǎng)基包括：1/2MS、0.5～1.0mg/L IBA、2.0～4.0mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L瓊脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，所述的不定芽的生根培養(yǎng)的方法為：將經(jīng)過不定芽的繼代培養(yǎng)得到的長約1.5～2.0cm的不定芽從基部切取并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～30天即能實現(xiàn)試管苗的生根。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，所述的試管苗移栽的方法具體為：將經(jīng)過不定芽的生根培養(yǎng)得到的生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗1～3天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、樹皮混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，所述的外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)、不定芽的繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為25～28℃，光照強度為2000～2500lx，光照時間為10～12小時/天。

在上述的民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁方法中，獲取赤蒼藤的外植體的具體方法為：在野外選取生長健壯、無明顯病害的赤蒼藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進(jìn)行保水保濕處理。

有益效果：

本發(fā)明利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)實現(xiàn)了民間藥食同源植物赤蒼藤的組培快繁，本發(fā)明具成本低、工藝簡單、周期短等特點，其成活率達(dá)到了91％以上，可直接用于赤蒼藤種苗的工廠化生產(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。

實施例一

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的赤蒼藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進(jìn)行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗過夜，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒10秒鐘，無菌水沖洗3次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒10分鐘，無菌水沖洗3次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于25℃進(jìn)行全暗培養(yǎng)25天即可誘導(dǎo)形成不定芽，誘導(dǎo)率為79.5％，污染率低于15％。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+6.0mg/L6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+3.5g/L瓊脂+0.5g/L活性炭，pH為5.4。

(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)誘導(dǎo)得到的不定芽切成長約1～2cm的莖段并接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天即可實現(xiàn)不定芽的繼代，增殖系數(shù)達(dá)到5倍。所述的繼代培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+3.5g/L瓊脂+0.1g/L活性炭，pH為5.4。

(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)繼代得到的長約1.5～2.0cm的不定芽從基部切取并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為86.8％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+1.0mg/L IBA+4.0mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂+0.1g/L活性炭，pH為5.4。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗1天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、樹皮混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天后成活率為95.2％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為25℃，光照強度為2000lx，光照時間為10小時/天。

實施例二

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的赤蒼藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進(jìn)行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗過夜，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒23秒鐘，無菌水沖洗4次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒15分鐘，無菌水沖洗4次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于27℃進(jìn)行全暗培養(yǎng)28天即可誘導(dǎo)形成不定芽，誘導(dǎo)率為81.3％,污染率低于10％。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+5.0mg/L6-BA+7.5mg/L NAA+25g/L蔗糖+3.7g/L瓊脂+0.8g/L活性炭，pH為5.6。

(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)誘導(dǎo)得到的不定芽切成長約1～2cm的莖段并接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)28天即可實現(xiàn)不定芽的繼代，增殖系數(shù)達(dá)到4.2倍。所述的繼代培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+2.5mg/L 6-BA+0.35mg/L NAA+25g/L蔗糖+3.7g/L瓊脂+0.3g/L活性炭，pH為5.7。

(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)繼代得到的長約1.5～2.0cm的不定芽從基部切取并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)28天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為88.5％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.75mg/L IBA+3.0mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.5g/L瓊脂+0.3g/L活性炭，pH為5.7。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗2天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、樹皮混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天后成活率為91.5％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為26℃，光照強度為2300～lx，光照時間為11小時/天。

實施例三

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的赤蒼藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進(jìn)行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗過夜，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒15秒鐘，無菌水沖洗5次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水沖洗5次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于28℃進(jìn)行全暗培養(yǎng)30天即可誘導(dǎo)形成不定芽，誘導(dǎo)率為80.9％，污染率低于8％。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+4.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+4.0g/L瓊脂+1.0g/L活性炭，pH為5.8。

(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)誘導(dǎo)得到的不定芽切成長約1～2cm的莖段并接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天即可實現(xiàn)不定芽的繼代，增殖系數(shù)達(dá)到3倍。所述的繼代培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+4.0g/L瓊脂+0.5g/L活性炭，pH為5.8。

(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)繼代得到的長約1.5～2.0cm的不定芽從基部切取并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為86.4％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.5mg/L IBA+2.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+4.0g/L瓊脂+0.3g/L活性炭，pH為5.7。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗3天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、樹皮混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天成活率為94.7％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為28℃，光照強度為2500lx，光照時間為12小時/天。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。