本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種“藍(lán)菜1號”的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

甘藍(lán)型油菜是十字花科蕓薹族蕓薹屬植物，在我國長江中下游流域大量種植，是我國重要的油料作物。菘藍(lán)屬于十字花科菘藍(lán)族菘藍(lán)屬，作為一種傳統(tǒng)中草藥植物在中國北方和中部各地廣泛栽培，以根和葉入藥，其根稱板藍(lán)根，葉稱大青葉。通過葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體融合，獲得了甘藍(lán)型油菜與菘藍(lán)的體細(xì)胞雜種植株，雜種植株繼續(xù)與甘藍(lán)型油菜回交，經(jīng)過系統(tǒng)篩選獲得農(nóng)作物新品種“藍(lán)菜1號(京品鑒菜2014032)”。“藍(lán)菜1號”為含有兩條外源菘藍(lán)d染色體的菘藍(lán)-甘藍(lán)型油菜二體異附加系，既具有甘藍(lán)型油菜的品質(zhì)，又具有菘藍(lán)的生物活性。

組織培養(yǎng)是利用植物體分離出來的組織器官，在無菌條件下，接種在含有各種營養(yǎng)物質(zhì)及植物激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得再生的完整植株的過程。利用組織培養(yǎng)技術(shù)能夠快速大量的得到健康無菌的植株，并具有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的是提供一種藍(lán)菜1號的組織培養(yǎng)方法。

本發(fā)明所提供的藍(lán)菜1號的組織培養(yǎng)方法，具體可包括如下步驟：將藍(lán)菜1號的莖段接種到組織培養(yǎng)基中，進(jìn)行培養(yǎng)，得到藍(lán)菜1號完整植株；

所述組織培養(yǎng)基是在1/2MS固體培養(yǎng)基中加入IBA和NAA后得到的培養(yǎng)基；

所述IBA在所述組織培養(yǎng)基中的終濃度為0.2mg/L；

所述NAA在所述組織培養(yǎng)基中的終濃度為0.2-0.4mg/L。

在本發(fā)明中，所述NAA在所述組織培養(yǎng)基中的終濃度具體為0.2mg/L。

在所述方法中，所述莖段上至少含有一個葉片。

在所述方法中，所述莖段為無菌苗的莖段。

在本發(fā)明中，所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的碳源可為蔗糖；所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的凝膠劑可為瓊脂。具體的，所述蔗糖在所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的終濃度為15g/L；所述瓊脂在所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的終濃度為7g/L。

在所述方法中，進(jìn)行所述培養(yǎng)的溫度具體為25℃，空氣相對濕度為70％-80％，光照強(qiáng)度為2000Lx，光照時(shí)間為12h/天。

另外，將藍(lán)菜1號的莖段接種到組織培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，1周后有新生的幼根分化，20-30天后形成完整植株。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于藍(lán)菜1號組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

本發(fā)明所提供的用于藍(lán)菜1號組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基是在1/2MS固體培養(yǎng)基中加入IBA和NAA后得到的培養(yǎng)基；

所述IBA在所述培養(yǎng)基中的終濃度為0.2mg/L；

所述NAA在所述培養(yǎng)基中的終濃度為0.2-0.4mg/L。

在本發(fā)明中，所述NAA在所述組織培養(yǎng)基中的終濃度具體為0.2mg/L。

在本發(fā)明中，所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的碳源可為蔗糖；所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的凝膠劑可為瓊脂。具體的，所述蔗糖在所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的終濃度為15g/L；所述瓊脂在所述1/2MS固體培養(yǎng)基中的終濃度為7g/L。

所述培養(yǎng)基在以莖段作為外植體進(jìn)行藍(lán)菜1號組培中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

在所述應(yīng)用中，所述莖段上至少含有一個葉片。

在所述應(yīng)用中，所述莖段為無菌苗的莖段。

在以上本發(fā)明所提供的藍(lán)菜1號的組織培養(yǎng)方法，以及本發(fā)明所提供的用于藍(lán)菜1號組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，所述1/2MS固體培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下：硝酸鉀950mg/L，硝酸銨825mg/L，磷酸二氫鉀85mg/L，硫酸鎂185mg/L，氯化鈣220mg/L，碘化鉀0.415mg/L，硼酸3.1mg/L，硫酸錳11.15mg/L，硫酸鋅4.3mg/L，鉬酸鈉0.125mg/L，硫酸銅0.0125mg/L，氯化鈷0.0125mg/L，乙二胺四乙酸二鈉18.625mg/L，硫酸亞鐵13.925mg/L，肌醇50mg/L，甘氨酸1mg/L，鹽酸硫胺素0.05mg/L，鹽酸吡哆醇0.25mg/L，煙酸0.25mg/L，蔗糖15g/L，瓊脂糖7g/L；pH為6.0。

本發(fā)明所提供的“藍(lán)菜1號”的組織培養(yǎng)方法所能夠有效誘導(dǎo)“藍(lán)菜1號”的莖段分化生根，從而最終形成完整的植株。本發(fā)明的發(fā)明能夠快速大量的得到健康無菌的“藍(lán)菜1號”植株，具有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

附圖說明

圖1為培養(yǎng)1周后根開始萌發(fā)。

圖2為培養(yǎng)2周后“藍(lán)菜1號”有大量根系形成。

圖3為“藍(lán)菜1號”形成完整植株。

圖4為大量培育的“藍(lán)菜1號”。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中的“藍(lán)菜1號”記載于文獻(xiàn)《藍(lán)菜1號特征特性及標(biāo)準(zhǔn)化栽培技術(shù)》(發(fā)表在中國現(xiàn)代中藥)中，公眾可從中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所獲得。

下述實(shí)施例中的1/2MS固體培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下：硝酸鉀950mg/L，硝酸銨825mg/L，磷酸二氫鉀85mg/L，硫酸鎂185mg/L，氯化鈣220mg/L，碘化鉀0.415mg/L，硼酸3.1mg/L，硫酸錳11.15mg/L，硫酸鋅4.3mg/L，鉬酸鈉0.125mg/L，硫酸銅0.0125mg/L，氯化鈷0.0125mg/L，乙二胺四乙酸二鈉18.625mg/L，硫酸亞鐵13.925mg/L，肌醇50mg/L，甘氨酸1mg/L，鹽酸硫胺素0.05mg/L，鹽酸吡哆醇0.25mg/L，煙酸0.25mg/L，蔗糖15g/L，瓊脂糖7g/L；pH為6.0。

實(shí)施例1、“藍(lán)菜1號”的組織培養(yǎng)方法

一、外植體的選擇

選取“藍(lán)菜1號”無菌苗的莖段，莖段長度為3-5cm，莖段中至少含有一個葉片，以保證植株的光合作用。

二、“藍(lán)菜1號”的組織培養(yǎng)

以1/2MS固體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別向培養(yǎng)基中加入不同濃度的IBA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)。激素濃度配比如表1所示。培養(yǎng)基經(jīng)121℃高溫高壓滅菌20分鐘后，在超凈臺內(nèi)分裝到培養(yǎng)瓶中。

表1各培養(yǎng)基中激素濃度配比

將步驟一選取的“藍(lán)菜1號”無菌苗的莖段插入到已經(jīng)凝固的培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基中接種1莖段，于下述條件進(jìn)行組培：溫度25℃，空氣相對濕度70％-80％，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間12h/天。分別在培養(yǎng)后7、10、14d時(shí)觀察“藍(lán)菜1號”的生根情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

結(jié)果如表2和圖1-4所示(圖1為培養(yǎng)1周后根開始萌發(fā)；圖2為培養(yǎng)2周后“藍(lán)菜1號”有大量根系形成；圖3為“藍(lán)菜1號”形成完整植株；圖4為大量培育的“藍(lán)菜1號”)，由表2可見：

1、IBA誘導(dǎo)生根快，濃度為0.2-0.5mg/L時(shí)，7d時(shí)生根率可達(dá)67-93％。10d時(shí)平均每株生根12條。14d時(shí)生根率達(dá)93-100％，根長達(dá)13cm。但是IBA誘導(dǎo)的根細(xì)長，不粗壯。

2、0.2-0.5mg/L NAA處理植株時(shí)，7d生根率只有13-38％。10d時(shí)平均每株生根15條-19條，根短粗，根多。14d時(shí)生根率達(dá)80-100％。根長達(dá)1.5-3.5cm。

3、1.0mg/L IBA處理植株7d時(shí)，生根率為13％，而1.0mg/L NAA處理植株7d時(shí)并沒有生根。

4、0.2mg/L IBA+0.4mg/L NAA處理植株，生根效果好。0.4mg/L IBA+0.2mg/LNAA處理植株，莖段基部先膨大形成白色愈傷組織，10d時(shí)每株平均生根6條，根長小于0.5cm。0.2mg/L IBA+0.2mg/L NAA處理植株，7d后莖段基部同樣先形成白色愈傷組織，10d后形成密集而粗壯的短根，14d后根長達(dá)3cm左右。

5、向培養(yǎng)基中加入2,4-D后，莖段基部形成愈傷組織后不再分化形成根。

表2各培養(yǎng)基培養(yǎng)后7、10、14d時(shí)觀察“藍(lán)菜1號”的生根情況

注：表2中組別與表1的組別對應(yīng)。

以上結(jié)果表明：低濃度的IBA(0.2mg/L)和NAA(0.2mg/L)均可以誘導(dǎo)莖段生根，但是IBA誘導(dǎo)的根細(xì)長，不粗壯，而NAA誘導(dǎo)的根短粗，根多。因此同時(shí)在培養(yǎng)基中加入IBA和NAA可快速誘導(dǎo)成根，而且根較粗較多。考慮到“藍(lán)菜1號”大量組培的經(jīng)濟(jì)效益，所以最終采用0.2mg/L IBA+0.2mg/L NAA的激素配比進(jìn)行“藍(lán)菜1號”的組織培養(yǎng)。