本發(fā)明涉及反-2-十二稀醇作為黒肩綠盲蝽引誘劑的應用。

背景技術：

黑肩綠盲蝽是水稻田間重要的天敵昆蟲，主要以飛虱和葉蟬為生，最喜飛虱，在田間取食褐飛虱卵比率達30％-70％(Zhou，1986)，一天能取食7.5-10.2頭褐飛虱(Reyes，1975)。有研究報告，在飛虱密度較高的小區(qū)黑肩綠盲蝽表現(xiàn)出聚集反應，但其對褐飛虱的捕食率與飛虱密度無關，而在蝽：虱數(shù)量比達到1:1，1:8，20:1時，蝽可以在沒有化學農(nóng)藥的條件下，控制飛虱蟲口密度(Tanangsnakool，1975)。黑肩綠盲蝽對化學農(nóng)藥敏感，吡蚜酮等化學農(nóng)藥影響其覓食能力和對水稻害蟲的控制力度(Zhang et al.,2015)。并且暫時沒有找到對黑肩綠盲蝽安全的化學農(nóng)藥和施藥方式。因此有研究學者針對黑肩綠盲蝽引誘劑展開了研究，主要進行了水稻揮發(fā)物的提取和找尋有引誘作用的化合物單體(Cheng，2001)，但并沒有找到能夠運用到田間的引誘方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)狀，旨在提供一種能夠運用在田間，加強對天敵的調(diào)控作用，從而控制水稻害蟲蟲口密度的反-2-十二稀醇作為黒肩綠盲蝽引誘劑的應用。

本發(fā)明目的的實現(xiàn)方式為，反-2-十二稀醇作為黒肩綠盲蝽引誘劑的應用，反-2-十二稀醇在無水乙醇中溶解至1000ppm，用石蠟油或正己烷稀釋至濃度50ppm—5000ppm時，反-2-十二稀醇作為黒肩綠盲蝽引誘劑。

本發(fā)明通過Y型嗅覺儀測定反-2-十二稀醇對黑肩綠盲蝽成蟲的行為反應，確定反-2-十二稀醇在濃度為500ppm時，對雄蟲的引誘率達51.72％，對雌蟲的引誘率達44.83％；H型嗅覺儀測定黑肩綠盲蝽若蝽的行為反應，確定濃度50ppm時，對黒肩綠盲蝽若蝽所得引誘率達31.51％。網(wǎng)室試驗，確定濃度為500ppm時，對黒肩綠盲蝽的引誘率達55.64％。田間試驗，確定濃度為1000ppm時，對黒肩綠盲蝽若蝽的引誘率達41.98％，對黒肩綠盲蝽成蝽的引誘率達26.71％。

由本發(fā)明可確定反-2-十二稀醇能夠運用在田間引誘黒肩綠盲蝽，從而加強對天敵的調(diào)控作用，控制水稻害蟲蟲口密度。

附圖說明

圖1是本發(fā)明使用的H型嗅覺儀結(jié)構示意圖，

圖2是本發(fā)明所用Y型嗅覺儀結(jié)構示意圖，

圖3是本發(fā)明使用的Y型管結(jié)構示意圖，

圖4是網(wǎng)室試驗模式圖，

圖5是網(wǎng)室試驗誘芯懸掛模式圖，

圖6是網(wǎng)室試驗操作圖，

圖7是對黒肩綠盲蝽引誘效果測定田間實驗小區(qū)分布圖，

圖8是誘芯結(jié)構示意圖，

圖9是誘芯具體懸掛和查蟲位置圖，

圖10是對黒肩綠盲蝽若蝽的引誘活性圖，

圖11是對黒肩綠盲蝽兩性成蝽的引誘效果測試結(jié)果圖，

圖12是網(wǎng)室實驗對黒肩綠盲蝽引誘效果測定結(jié)果圖，

圖13、14是田間不同取樣時間黒肩綠盲蝽若蝽的蟲量變化圖，

圖15是田間不同取樣時間黒肩綠盲蝽成蝽的蟲量變化圖。

具體實施方式

為證實反-2-十二稀醇能用于引誘黒肩綠盲蝽，本申請人作了如下實驗。

采用圖1所示的H型嗅覺儀測定黑肩綠盲蝽若蝽對反-2-十二稀醇的行為反應。

H型管兩直臂長16cm，內(nèi)徑3cm，兩直臂離底端4.5cm處各有一內(nèi)徑為3cm的開口，側(cè)面開口處與H型管的橫臂相連。橫臂長18cm，內(nèi)徑3cm，在橫臂正中間有一個內(nèi)徑為3cm，高1cm的圓柱形開口，此為接蟲口。兩端開口處分別與兩直臂相連(見圖1)。

將待測反-2-十二稀醇用無水乙醇配制成10000ppm的母液，再用正己烷稀釋8倍、40倍、200倍、1000倍，濃度設置為1250ppm、250ppm、50ppm、10ppm。輕輕地將H型管橫放在桌面上，分別用毛細管吸取12μl的反-2-十二稀醇和正己烷(對照處理)，再謹慎地放入H型嗅覺儀的兩直臂中，然后用紗布塞住直臂頂端開口處。再將10頭饑餓半小時的黑肩綠盲蝽4齡若蟲從接蟲口處接入H型管內(nèi)，用封口膜小心的封住接蟲口。將其平放在溫度為28±1℃、濕度為90％左右的黑暗培養(yǎng)箱中，并用黑布完全包裹住H型嗅覺儀，以排除光線對黑肩綠盲蝽選擇行為的影響。每個H管接入10頭健壯的4齡黑肩綠盲蝽若蝽，共測試60頭。觀察記錄2h后黑肩綠盲蝽在H型管中的分布情況。若測試的黑肩綠盲蝽若蝽在距接蟲口左右1cm范圍內(nèi)，記為未作出選擇。若測試的黑肩綠盲蝽若蝽在A、B處和D處則記為對H型管右側(cè)氣味源有反應；反之，則記為黑肩綠盲蝽若蝽選擇H型管左側(cè)氣味源。并計算其引誘率。

引誘率(％)＝(處理蟲數(shù)-對照蟲數(shù))/(處理蟲數(shù)+對照蟲數(shù))×100。

數(shù)據(jù)分析：采用SPSS16.0的配對T檢驗分析處理組和對照組之間差異顯著性。

實驗結(jié)果如圖10所示。從圖中可見，在濃度為50ppm時，反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽若蝽的引誘效果達到最高。在濃度較低時，沒有引誘作用；而在濃度較高時，對黒肩綠盲蝽若蝽有顯著的驅(qū)避作用。

由結(jié)果分析可得，在濃度10ppm時，反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽若蝽的引誘率達9.09％(t＝1.442，P＝0.20)。在濃度為50ppm時，反-2-十二稀醇對黑肩綠盲蝽若蝽有極顯著的引誘作用，引誘率達31.51％(t＝3.53，P＝0.01)。在濃度為250ppm時，室內(nèi)環(huán)境下對黒肩綠盲蝽若蝽有極顯著的驅(qū)避作用，驅(qū)避率達49.09％(t＝6.71，P＝0.001)。在濃度為1250ppm時，具有極顯著的驅(qū)避作用，驅(qū)避率達42.17％(t＝6.94，P<0.001)。由此結(jié)果分析，反-2-十二稀醇在濃度為50ppm時，在室內(nèi)環(huán)境下對黒肩綠盲蝽若蝽有顯著的引誘作用，引誘率達到最高值。

故而繼續(xù)測定反-2-十二稀醇在濃度為50ppm時，對黒肩綠盲蝽在兩性成蝽的引誘作用。

采用圖2、3所示的Y型嗅覺儀測定反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽兩性成蟲的行為反應。

將待測反-2-十二稀醇用無水乙醇溶解至10000ppm，再用石蠟油稀釋至50ppm，作為味源，對照組使用石蠟油。

取初羽化的黑肩綠盲蝽成蟲，饑餓1h。在味源瓶中放入含有40μL的50ppm反-2-十二稀醇或純?nèi)軇┑V物油(CK)的濾紙，以250mL/min的速度通空氣20min后，從接蟲口處接入單只黑肩綠盲蝽成蝽。記錄測試的黑肩綠盲蝽成蝽進入兩選擇臂的時間和方向，每只測試的黑肩綠盲蝽成蝽觀測5分鐘，測試的黑肩綠盲蝽成蝽運動至超過任一支臂3cm，并在支臂3cm后的持續(xù)時間超過1min算有效選擇。如若5min內(nèi)一直未動則記為無反應試蟲，不計入數(shù)據(jù)。

數(shù)據(jù)使用spss16.0進行卡方檢驗。

試驗結(jié)果如圖11所示：在濃度為50ppm下，反-2-十二稀醇對兩性測試的黑肩綠盲蝽成蝽均有顯著的引誘效果，對雄蟲引誘率達51.72％，P雄＝0.004，x2＝8.315；對雌黑肩綠盲蝽成蝽引誘率達44.83％，P雌＝0.013，X2＝6.136。由此結(jié)果推測反-2-十二稀醇在室內(nèi)環(huán)境下對黒肩綠盲蝽成蝽具有顯著的引誘效果。

參照圖4、5、6，用反-2-十二稀醇引誘黑肩綠盲蝽的網(wǎng)室試驗。

選擇無大風晴天早上7：30-10:30和下午4:30-7:30在溫室外空地進行網(wǎng)室試驗。將6盆分蘗期的水稻苗(見圖3)放入1m*1m*0.8m的100目紗籠中，在中間空白區(qū)放入面包盒和紗布使紗籠底部高度一致。將反-2-十二稀醇在無水乙醇中溶解至10000ppm，用石蠟油稀釋至50ppm，158ppm，500ppm，1580ppm，5000ppm這5個濃度實驗。在1g羊毛脂中加入40μl特定濃度的反-2-十二稀醇，以石蠟油作為對照，均勻的涂抹在2.5*7cm的長方形濾紙片上，用別針固定在水稻苗莖稈上，固定部位距離地面10cm，中間一盆水稻苗放4片濾紙片，兩邊分別放置2片。在紗籠中央小心的放入50頭4-5齡黑肩綠盲蝽若蝽。在3小時后記錄各盆水稻苗上的黑肩綠盲蝽成蝽數(shù)，每一個紗籠中測試一個濃度，5個濃度同一天完成，重復三次。實驗結(jié)果見圖12。

數(shù)據(jù)結(jié)果運用spss16.0的卡方檢驗進行分析。

經(jīng)結(jié)果分析，反-2-十二稀醇在濃度為50ppm時，對黒肩綠盲蝽有極顯著的引誘作用，引誘率達22.22％，X2＝3.51，P＝0.019。在濃度為158ppm時，引誘率達51.81，X2＝10.10，P＝0.001。在濃度為500ppm時，反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽的引誘效果達到最佳，引誘率超過50％，達55.635，P<0.001，X2＝18.588。在濃度為1580ppm時，引誘率達42.41％，X2＝12.51，P<0.001。在濃度為5000ppm時，引誘率達38.93％，X2＝7.53，P＝0.006。

此實驗結(jié)果為田間試驗提供了具有可行性的施藥方法，以及反-2-十二稀醇在500ppm時引誘效果最佳，提供了田間試驗的濃度和質(zhì)量依據(jù)。

用反-2-十二稀醇引誘黑肩綠盲蝽的田間試驗。

在湖北省隨州市安居縣2016年8月27號至2016年10月1號完成反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽的引誘實驗。施藥前確認田間黒肩綠盲蝽主要為成蝽。釋放反-2-十二稀醇和對照石蠟油的田塊各重復4次，每個小區(qū)面積為64m²(8*8m)，各小區(qū)間設置寬為1m的保護行。小區(qū)分布如圖7所示。

在小區(qū)中間位置懸掛兩個如圖8所示的誘芯。誘芯準備：用石蠟油溶解反-2-十二稀醇至濃度1000ppm。用羊毛脂均勻的涂抹在600ml的礦泉水瓶底部內(nèi)壁處，并在此處開若干直徑為1cm的圓孔。為了防止雨水的沖刷并增加引誘劑的揮發(fā)效率，在礦泉水瓶上部準備3個“小窗”。將制備好的礦泉水瓶用80cm竹竿固定在水稻田中，使礦泉水瓶位于水稻莖桿處。每個小區(qū)中間放置兩個誘芯，兩個誘芯之間距離為4m(見圖9)。

在施藥后第2，4，8，16，32天在誘芯的東南西北四個方向采用盆拍法取樣，如圖9所示。每個方向取3兜水稻苗，調(diào)查黒肩綠盲蝽成蝽，若蝽和褐飛虱的數(shù)量。

用SPSS16.0進行One-way ANOVE分析施藥田和對照田黒肩綠盲蝽和褐飛虱百兜蟲量之間差異。

實驗結(jié)果如圖13、圖14所示，在第4天時，反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽成蝽有極顯著的引誘作用(P＝0.022)，在第8天時，反-2-十二稀醇的引誘作用達P＝0.051。在其他取樣的時間中，反-2-十二稀醇田塊中的黒肩綠盲蝽值均高于對照田塊，但由于黒肩綠盲蝽的生命期，在第8-16天時，黑肩綠盲蝽主要以黑肩綠盲蝽若蝽的形態(tài)存在。而在第32天時，由于已經(jīng)到達十月黒肩綠盲蝽羽化遷飛，蟲口基數(shù)降低，故而不具有顯著性差異。而黑肩綠盲蝽若蝽在各取樣時間，百兜蟲量均高于對照組，且有增加的趨勢，表明反式-石竹稀對黒肩綠盲蝽若蝽有引誘作用。在第16天時，反-2-十二稀醇對黒肩綠盲蝽若蝽有顯著的引誘作用P＝0.03。

實驗結(jié)果如圖15所示，在釋放反-2-十二稀醇的田塊中，黒肩綠盲蝽若蝽的32天總百兜蟲量與對照田塊有極顯著性差異(P＝0.008)，引誘率達41.98％。且黒肩綠盲蝽成蝽的32天總百兜蟲量也與對照田塊有顯著性差異(P＝0.011)，引誘率達26.71％。