本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)微生物益生菌劑，特別是指一種能夠預(yù)防大棚西瓜苗重茬根腐病的益生菌劑制備方法。

背景技術(shù)：

在大棚果蔬種植效益高，成為新時(shí)期經(jīng)濟(jì)效益較好的一個(gè)產(chǎn)業(yè)。但由于大棚土壤施用大量化肥、農(nóng)藥，使得土壤微生物菌群結(jié)構(gòu)失衡，土壤微生物系統(tǒng)受到嚴(yán)重破壞，再加上經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使重茬種植普遍盛行，更使得土壤生態(tài)系統(tǒng)難以自我修復(fù)。近些年，大棚蔬菜的種植中各種病害、蟲(chóng)害增加，尤其是根腐病等極易發(fā)生，都是土壤生態(tài)系統(tǒng)遭受破壞的典型癥狀。為了改變這種現(xiàn)狀，就必須從修復(fù)土壤生態(tài)系統(tǒng)入手，增加土壤中的有益菌群，從而抑制那些容易感染植株病害的細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)。采用外加多菌種聯(lián)合的技術(shù)方法，達(dá)到修復(fù)土壤生態(tài)系統(tǒng)，防止根腐病等重茬病，同時(shí)促進(jìn)根生長(zhǎng)，松土壯苗。復(fù)合益生菌劑還具有降解農(nóng)藥、化肥殘留污染的作用。菌劑經(jīng)發(fā)酵工程完成后有效活菌數(shù)(cfu)每毫升在100億以上即10×10⁸cfu/mL。通過(guò)復(fù)合微生物菌劑預(yù)防大棚西瓜重茬病益根生菌菌劑及其高密度、高活性的生產(chǎn)工藝還未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于開(kāi)發(fā)一種高密度、高活性、施用方法便捷的預(yù)防大棚西瓜重茬根腐病的益生菌菌劑制備方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案如下。

一種預(yù)防大棚西瓜重茬根腐病的復(fù)合益生菌劑制備的方法，所述方法包括以下制備步驟：

采用枯草芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）、地衣芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）、涇陽(yáng)鏈霉菌（Bacillus amyloliquefaciens）制備益生菌復(fù)合菌劑。其菌種配比及菌劑制備方法如下：

菌劑的配方。

本發(fā)明的菌劑的配方為：枯草芽孢桿菌20%～25%，地衣芽孢桿菌20%～25%，巨大芽孢桿菌20%～25%，解淀粉芽孢桿菌20%～25%，涇陽(yáng)鏈霉菌15%～20%。

菌劑的制備與使用方法。

（1）接種。

將上述菌種分別接種斜面，培養(yǎng)溫度30～37℃,培養(yǎng)時(shí)間2-4d，然后分別加入到無(wú)菌水中，振蕩30分鐘，待均勻后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，菌液中菌數(shù)含量分別達(dá)到10⁸個(gè)/mL。

（2）一級(jí)菌種液培養(yǎng)制備。

將上訴5種菌液分別放入裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，三角瓶放置在搖床內(nèi)，在30℃的條件下培養(yǎng)48～72小時(shí)，使每只三角瓶中菌數(shù)含量達(dá)到10⁸個(gè)/mL。

（3）二級(jí)菌液培養(yǎng)。

分別將5種菌種液接種到三角瓶培養(yǎng)基中，接種量1%，三角瓶放置在搖床內(nèi)，在30℃的條件下培養(yǎng)48～72小時(shí)，使菌數(shù)含量達(dá)到10⁹ cfu /mL以上。最后將五種菌劑按照上述菌種配比混合。即得益生菌復(fù)合菌劑。

作為優(yōu)選，上述菌種培養(yǎng)基為：枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌的培養(yǎng)基為蛋白胨 50g、牛肉膏 300g、NaCl 50g、瓊脂粉150g，蒸餾水 10L；涇陽(yáng)鏈霉菌的培養(yǎng)基為KNO₃ 10g、可溶性淀粉200g、K₂HPO₄ 5g、MgSO₄.7H₂O 5g、NaCl 5g、FeSO₄ 0.1g、瓊脂粉200g、蒸餾水10L。

（4）稀釋使用。

將益生菌復(fù)合菌劑稀釋100～500倍，蘸根、澆灌。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)及有益效果。

富含光合細(xì)菌、固氮菌、解磷菌、解鉀菌，可固定空氣中的氮，分解土壤中難溶性磷、鉀化合物，提高作物對(duì)土壤氮、磷、鉀養(yǎng)分的利用率；同時(shí)含有改良土壤結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)土壤酸堿性的有益微生物菌群，可促進(jìn)根系及根際有益微生物菌群的生長(zhǎng)，進(jìn)而增強(qiáng)作物抗逆性及抗病蟲(chóng)害能力。

具體實(shí)施方式

下面，結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)之中。

實(shí)施例1。

將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和涇陽(yáng)鏈霉菌分別單獨(dú)在營(yíng)養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)發(fā)酵密度達(dá)到10⁸ cfu/ml以上時(shí)，按照枯草芽孢桿菌20份，地衣芽孢桿菌20份，巨大芽孢桿菌25份，解淀粉芽孢桿菌25份，涇陽(yáng)鏈霉菌20份的比例進(jìn)行混合，配制成復(fù)合益生菌劑制。

實(shí)施例2。

將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和涇陽(yáng)鏈霉菌分別單獨(dú)在營(yíng)養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)發(fā)酵密度達(dá)到10⁸ cfu/ml以上時(shí)，按照枯草芽孢桿菌25份，地衣芽孢桿菌25份，巨大芽孢桿菌20份，解淀粉芽孢桿菌20份，涇陽(yáng)鏈霉菌15份的比例進(jìn)行混合，配制成復(fù)合益生菌劑制。

實(shí)施例3。

將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和涇陽(yáng)鏈霉菌分別單獨(dú)在營(yíng)養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)發(fā)酵密度達(dá)到10⁸ cfu/ml以上時(shí)，按照枯草芽孢桿菌25份，地衣芽孢桿菌20份，巨大芽孢桿菌25份，解淀粉芽孢桿菌20份，涇陽(yáng)鏈霉菌15份的比例進(jìn)行混合，配制成復(fù)合益生菌劑制。

應(yīng)用實(shí)例1。

在青島平度市明村鎮(zhèn)育苗大棚中，在1.5m×20m育苗床劃分4塊小區(qū)，各播種西瓜種子200顆，播種時(shí)開(kāi)始施例1制備的菌液0、2、4、6kg稀釋100倍后，分別在第1、第10、第15、第25和第30天平均噴灑施入，按常規(guī)要求進(jìn)行管理，在施菌液量1、2、4kg的條件下，30天后的收獲健康無(wú)西瓜苗比例分別較對(duì)照的高8.1％、9.6％和11.5％。

應(yīng)用實(shí)例2。

在青島平度市明村鎮(zhèn)育苗大棚中，在1.5m×20m育苗床劃分4塊小區(qū)，各播種西紅柿種子200顆，播種時(shí)開(kāi)始施例3制備的菌液0、2、4、6kg稀釋500倍后，分別在第1、第10、第15、第25和第30天平均噴灑施入，按常規(guī)要求進(jìn)行管理，在施菌液量1、2、4kg的條件下，30天后的收獲健康西瓜苗比例分別較對(duì)照的高7.5％、9.1％和10.7％。