一種生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物防治肥的制備領域，具體涉及一種生物防治抗紅景天根腐病及促 生的方法。
【背景技術】
[0002] 紅景天（學名：RhodiolaroseaL.)為多年生草本植物，高10-20厘米。根粗壯， 圓錐形，肉質，褐黃色，根頸部具多數(shù)須根，根莖短，粗狀，圓柱形，被多數(shù)覆瓦狀排列的鱗片 狀的葉，生長在海拔1800-2500米高寒無污染地帶，其生長環(huán)境惡劣，因而具有很強的生命 力和特殊的適應性。紅景天可作藥用，能夠補氣清肺，益智養(yǎng)心，是一味作用廣泛的中藥，亦 有美容效果，可作護膚品，也可食用。紅景天根腐病是紅景天病害中危害較為嚴重的一種， 病原菌是Fusariumoxysporum。
[0003] 植物病理真菌主要存在于土壤中，在植物生長中感染植物，引起植物病害、造成生 產損失。因此，要從生物防治的角度消除植物真菌病害，除了殺滅植株上的病理真菌，殺滅 或抑制土壤中的病理真菌也至關重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是實現(xiàn)這一目的 的有效途徑。在各種生物肥中，長久以來我國應用的都是無芽孢菌類。但是無芽孢菌抗逆 性低，對于干燥高溫的抵抗能力差，所以當制成液體或者吸附劑時穩(wěn)定性不高。生物肥發(fā)展 的新趨勢應是大力發(fā)展抗逆性高、能夠長期穩(wěn)定生存的芽孢桿菌。特別是芽孢桿菌能夠產 生多種抗真菌物質，對植物病原菌有顯著抑制作用，并且對人畜無害，也不會污染環(huán)境，將 在防治植物真菌病害中起重要作用。
[0004] 芽孢桿菌形態(tài)上呈直或者近直的桿狀，好氧或者兼性厭氧，革蘭氏陽性，在特定環(huán) 境條件下能產生抗逆性內生孢子。芽孢桿菌在植物中廣泛定殖，被認為是公認的食品級安 全微生物（generallyregardedassafety,GRAS)?？莶菅勘U菌是一種典型的芽孢桿菌， 產生抗菌蛋白、多肽類物質、脂類物質及beta葡聚糖酶等抗菌物質，特別是beta葡聚糖酶 等水解酶類與其抗植物病理真菌能力有密切關系，因為真菌細胞壁的組成是葡聚糖。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，通過將產beta葡聚 糖酶的枯草芽孢桿菌（CICC10339)融入紅景天天然菌群中，制成能夠通過生物防治途徑 有效抑制殺滅紅景天病理真菌的生物肥。
[0006] 一種生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，包括以下步驟：
[0007] 1)將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，制成密度IO9?10ltlCfuAiL的高密度 菌懸液；
[0008] 2)將紅景天健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌 懸液，堆肥結束后進行發(fā)酵，經發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅紅景天病理真菌的生物肥，將該 生物肥用在生物防治抗紅景天根腐病及促生上。
[0009] 本發(fā)明中，將紅景天健康枝條剪成小節(jié)堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康 紅景天植株本身天然菌群，此菌群與紅景天植株協(xié)同進化生長，形成了互益共生體系，對病 害真菌有一定生物防治作用。進一步地，將能夠產beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌（CICC 10339)加入堆肥中，顯著加強對紅景天病害真菌的生物防治作用?？莶菅挎邨U菌（CICC 10339)由于產beta葡聚糖酶，對紅景天植株纖維有良好分解作用，為堆肥發(fā)酵過程所必 須，故能夠充分融入到堆肥菌群中穩(wěn)定持久地增殖。如同乳酸菌對于動物的益生作用，抑制 殺滅植物病理真菌的微生物可以稱之為植物益生菌。本發(fā)明所制備生物肥中，枯草芽孢桿 菌（CICC10339)即是紅景天益生菌，對紅景天病理真菌有顯著生物防治作用。
[0010] 步驟1)中，枯草芽孢桿菌（CICC10339)采用現(xiàn)有技術，來自中國工業(yè)微生物菌 種保藏管理中心（CICC)，地址：北京市朝陽區(qū)酒仙橋中路24號院6號樓；保藏日期為2007 年，菌種保持編號為10339?？莶菅挎邨U菌（CICC10339)可以向中國工業(yè)微生物菌種保藏 管理中心購買。
[0011] 將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌（CICC10339)的出 發(fā)密度為IO6?IO7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1 %?5%，33°C?39°C振蕩培養(yǎng) 20?28h，至菌液密度為IO9?10 1(lcfu/mL的高密度菌懸液。
[0012] 進一步優(yōu)選，將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌（CICC 10339)的出發(fā)密度為IO6?10 7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%?3%，36°C? 37°C振蕩培養(yǎng)22?26h，至菌液密度為IO9?10ltlCfuAiL的高密度菌懸液。
[0013] 所述的液體培養(yǎng)基，以IL計，包括以下組分：
[0014]
【主權項】
1. 一種生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌CICC10339進行培養(yǎng)，制成密度109?10 1(lCfu/mL的高密度菌懸 液； 2) 將紅景天健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液， 堆肥結束后進行發(fā)酵，經發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅紅景天病理真菌的生物肥，將該生物 肥用在生物防治抗紅景天根腐病及促生上。
2. 根據權利要求1所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步驟 1)中，將枯草芽孢桿菌CICC10339進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC10339的出發(fā)密度 為106?10 7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1 %?5%，33°C?39°C振蕩培養(yǎng)20? 28h，至菌液密度為109?10 1(lCfu/mL的高密度菌懸液。
3. 根據權利要求2所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步驟 1) 中，將枯草芽孢桿菌CICC10339進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC10339的出發(fā)密度 為106?10 7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%?3%，36°C?37°C振蕩培養(yǎng)22? 26h，至菌液密度為109?10 1(lCfu/mL的高密度菌懸液。
4. 根據權利要求2或3所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，所 述的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分： 葡萄糖 11?17g; 牛肉膏 20?30g; 磷酸二氫鉀 1.5?3.5g; 花生餅粉 7?13g; 調節(jié)pH= 6. 5 ?7. 5。
5. 根據權利要求4所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，所述 的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分： 葡萄糖 14g; 牛肉膏 25g; 磷酸二氫鉀 2 45g， 花生餅粉 l〇p, 調節(jié)pH= 7. 0。
6. 根據權利要求1所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步驟 2) 中，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內部溫度達到30°C?34°C 時，噴施步驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內部溫度達到41°C?45°C時堆肥結 束。
7. 根據權利要求6所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步驟 2)中，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內部溫度達到32°C時，噴施 步驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內部溫度達到43°C時堆肥結束。
8. 根據權利要求1所述的生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步驟
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物防治抗紅景天根腐病及促生的方法，包括：將枯草芽孢桿菌制成密度109～1010cfu/mL的高密度菌懸液；將紅景天健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施枯草芽孢桿菌高密度菌懸液，經發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅紅景天根腐病病害菌的生物肥，將該生物肥用在生物防治抗紅景天根腐病及促生上。本發(fā)明中，產beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌是對紅景天起抗病促生作用的植物益生菌，將其加入堆肥中，顯著加強對紅景天根腐病病害菌的抑制殺滅作用，并顯著提高紅景天根鮮重。堆肥過程處理簡便，無廢水排放，投資少、能耗低、易操作，易于工業(yè)化大規(guī)模生產，具有良好的經濟效益和廣闊的應用前景。
【IPC分類】A01N63-00, A01P3-00, A01G1-00, A01G13-00, A01P21-00
【公開號】CN104604503
【申請?zhí)枴緾N201510058561
【發(fā)明人】吳淵, 胡慧雯, 徐薇薇, 阮暉, 梁瑩, 許麗珍, 吳孔華, 莫建平, 史金昕波, 繆丹, 俞雨, 吳盛彬, 徐騰洋
【申請人】浙江大學
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年2月4日