本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛的栽培方法，特別是一種多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法。

背景技術：

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效。

現(xiàn)代藥理學研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學成分較復雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯(lián)芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。多糖類成分是藥用石斛發(fā)揮免疫活性作用的重要物質基礎，鐵皮石斛多糖能顯著提高外周白細胞數(shù)，促進淋巴細胞產生移動抑制因子，可有效提高機體免疫力。2010版《藥典》首次收載了鐵皮石斛的質量標準，對多糖以及甘露糖進行含量測定。

隨著鐵皮石斛的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生鐵皮石斛已遠遠不能滿足人們的需求。人們已經(jīng)開始采用人工栽培鐵皮石斛，鐵皮石斛的栽培方法中，培養(yǎng)基是鐵皮石斛賴以生存的條件，不同的培養(yǎng)原料和配方可對鐵皮石斛的生長、產量和活性成分等產生重要的影響?，F(xiàn)有技術中鐵皮石斛用的培養(yǎng)基及現(xiàn)有栽培方法，，不利于產出的鐵皮石斛的品質保證。特別是不能保證鐵皮石斛中多糖的含量，使得最終得到的鐵皮石斛中多糖含量低。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的，是提供一種多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，本發(fā)明方法培養(yǎng)鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。

一種多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，包括苗床準備、幼苗繁育、幼苗移栽、澆水、除草追肥、溫濕度控制和病蟲害防治。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，具體包括以下步驟：

(1)苗床準備：選擇寬10-15m，高4-6m，長40-50m的大棚，在大棚1-1.5m的上方鋪設遮陽網(wǎng)，在大棚內離地面2.5-3.5m的上方鋪設保溫網(wǎng)；

(2)幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養(yǎng)基中，進行無菌繁殖培養(yǎng)，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，每個培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-45株幼苗；

(3)幼苗的移栽：移栽時間為4-6月，培養(yǎng)瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養(yǎng)基，再用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

(4)澆水：采用噴施方式，澆水次數(shù)為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；

(5)除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施葉面肥，每隔5-8天噴施一次，成活后每10-15天噴施一次葉面肥；

(6)溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

(7)病蟲害防治：每月用濃度為1-2‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)，兩年后即可采收。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，步驟(2)幼苗繁育中，所述的培養(yǎng)基主要由按重量份計算的檸檬酸1-10份、蛋白胨10-20份、馬鈴薯50-60份、香蕉50-60份、瓊脂20-30份、地骨皮5-15份、白薇5-15份、椿皮10-20份、琥珀10-20份和黃芩1-10份按下述方法制備：取地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，粉碎成細顆粒后，加8-12倍量水煎煮2-3h，收集煎煮液，得A品；將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；瓊脂在室溫下加3-5倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；F品加入E品中，混勻，得G品；G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻凝固后即得。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述培養(yǎng)基主要由按重量份計算的檸檬酸5份、蛋白胨15份、馬鈴薯55份、香蕉55份、瓊脂25份、地骨皮10份、白薇10份、椿皮15份、琥珀15份和黃芩5份按下述方法制備：取地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；F品加入E品中，混勻，得G品；G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，步驟(3)幼苗的移栽中，所述基質主要由按重量份計算的泥炭50-60份、樹皮渣30-40份、刨花顆粒30-50份和中藥渣30-40份混合而成。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述基質主要由按重量份計算的泥炭55份、樹皮渣35份、刨花顆粒40份和中藥渣35份混合而成。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的枸杞葉1-10份、苦楝皮1-6份、川楝子1-4份和南蛇藤1-12份按下述方法制備：取枸杞葉、苦楝皮、川楝子和南蛇藤，加8-12倍量水煎煮2-3h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

前述的多糖含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的枸杞葉5份、苦楝皮3份、川楝子2份和南蛇藤6份按下述方法制備：取枸杞葉、苦楝皮、川楝子和南蛇藤，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

申請人對本發(fā)明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：

實驗例1多糖含量考察.

1材料與方法

1.1材料

1.1.1鐵皮石斛1：按實施例1進行栽培后，采收得到鐵皮石斛1。

1.1.2鐵皮石斛2：栽培時，培養(yǎng)基中不含、地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，其余方法同實施例1進行栽培后，采收得到鐵皮石斛2。

1.2儀器和試劑

葡萄糖標準品[D一(+)一葡萄糖]：KAYON公司；甲醇(色譜純)：天津市科密歐化學試劑有限公司；其余試劑均為分析純；苯酚：上海凌峰化學試劑有限公司；硫酸：上海凌峰化學試劑有限公司。

2方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.1供試品溶液1的制備：

取本發(fā)明鐵皮石斛(鐵皮石斛1)樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000mL，加熱回流2小時，放冷，轉移至250mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，置15mL離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液1。

2.1.2供試品溶液2的制備

取鐵皮石斛2樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000mL，加熱回流2小時，放冷，轉移至250mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，置15mL離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量，加水制成99mg/L溶液，備用。

2.3標準曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m L置10m L具塞試管中，加水至1.0mL，精密加入5％苯酚溶液1mL(I臨用前現(xiàn)配制)，搖勻，再精密加入硫酸5m L，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，放入冰水浴中冷卻5分鐘，以相應的試劑為空白，在488nm波長處測定吸光度，以吸光度Y為縱坐標，濃度X(g/L)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為：Y＝11.772X-0.1492，r＝0.9995。結果表明多糖在0.02-0.10g/L范圍內線性關系良好。

2.4測定法

分別精密量取供試品溶液1和供試品溶液2各0.5mL，置10mL具塞試管中，加水至1mL，按“2.3”標準曲線的制備項下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1m L”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得。

2.5精密度試驗

精密吸取葡萄糖對照品溶液6份，每份0.6m L，按照“2.4”項下的方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為1.60％和1.62％，精密度良好。

2.6重復性試驗

按上述方法制備6份供試品溶液1和供試品溶液2，照按上述方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為2.70％和2.71％，重復性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗

分別取同一供試品溶液1和供試品溶液2，在室溫下放置，分別于10min、30min、1h、2h、4h、6h后按上述方法測定吸光度。測定結果，RSD分別為2.70％和2.73％，表明供試品溶液1和供試品溶液2均在6小時內穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗

稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛1粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/L)2mL，按上述方法制備供試品溶液1，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為94.9％，RSD為2.7％。

稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛2粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/L)2mL，按上述方法制備供試品溶液2，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為93.9％，RSD為2.6％。

2.9樣品測定

按上述供試品溶液1和供試品溶液2的制備方法和測定條件，測定6份鐵皮石斛1樣品和6份鐵皮石斛2樣品中多糖的含量，記錄結果，結果取平均值，結果見表1。

表1多糖含量測定結果

由表可知，本發(fā)明方法栽培得到的鐵皮石斛，最終采收的鐵皮石斛中多糖的含量較高。鐵皮石斛的品質好。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明方法培養(yǎng)鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。

具體實施方式

實施例1。

培養(yǎng)基配方：檸檬酸50kg、蛋白胨150kg、馬鈴薯550kg、香蕉550kg、瓊脂250kg、地骨皮100kg、白薇100kg、椿皮150kg、琥珀150kg和黃芩50kg。

培養(yǎng)基制作：

1、取地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

(1)苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網(wǎng)，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網(wǎng)；

(2)幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養(yǎng)基中，進行無菌繁殖培養(yǎng)，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，每個培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-45株幼苗；

(3)幼苗的移栽：移栽時間為4-6月，培養(yǎng)瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養(yǎng)基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

(4)澆水：采用噴施方式，澆水次數(shù)為1-3月份3天1次，3-6月份2天1次，6-9月份5天1次，9-12月份3天1次；

(5)除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施葉面肥，每隔6天噴施一次，成活后每12天噴施一次葉面肥；

(6)溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

(7)病蟲害防治：每月用濃度為1.5‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)，兩年后即可采收。

實施例2。

培養(yǎng)基配方：檸檬酸10kg、蛋白胨20kg、馬鈴薯60kg、香蕉60kg、瓊脂30kg、地骨皮15kg、白薇15kg、椿皮20kg、琥珀20kg和黃芩10kg。

培養(yǎng)基制作：

1、取地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

(1)苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網(wǎng)，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網(wǎng)；

(2)幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養(yǎng)基中，進行無菌繁殖培養(yǎng)，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，每個培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-45株幼苗；

(3)幼苗的移栽：移栽時間為4-6月，培養(yǎng)瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養(yǎng)基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

(4)澆水：采用噴施方式，澆水次數(shù)為1-3月份3天1次，3-6月份2天1次，6-9月份5天1次，9-12月份3天1次；

(5)除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施葉面肥，每隔6天噴施一次，成活后每12天噴施一次葉面肥；

(6)溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

(7)病蟲害防治：每月用濃度為1.5‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)，兩年后即可采收。

實施例3。

培養(yǎng)基配方：檸檬酸1kg、蛋白胨10kg、馬鈴薯50kg、香蕉50kg、瓊脂20kg、地骨皮5kg、白薇5kg、椿皮10kg、琥珀10kg和黃芩1kg。

培養(yǎng)基制作：

1、取地骨皮、白薇、椿皮、琥珀和黃芩，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；

2、將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；

3、將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；

4、B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；

5、香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；

6、瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；

7、F品加入E品中，混勻，得G品；

8、G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。

中藥渣制備：取枸杞葉50kg、苦楝皮30kg、川楝子20kg和南蛇藤60kg，加10倍量水煎煮2.5h，煎煮液過濾，取濾渣，干燥后粉碎成細顆粒，即得。

基質制備：取泥炭550kg、樹皮渣350kg、刨花顆粒400kg和中藥渣350kg混合而成。

鐵皮石斛的栽培方法：

(1)苗床準備：選擇寬12m，高5m，長45m的大棚，在大棚1.2m的上方鋪設遮陽網(wǎng)，在大棚內離地面3m的上方鋪設保溫網(wǎng)；

(2)幼苗繁育：選取鐵皮石斛花芽或葉芽，放入培養(yǎng)基中，進行無菌繁殖培養(yǎng)，幼苗生長到1-2cm，分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，每個培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-45株幼苗；

(3)幼苗的移栽：移栽時間為4-6月，培養(yǎng)瓶中的幼苗生長至5～8cm時取出，先用清水洗凈幼苗根部的培養(yǎng)基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，將基質均勻填到32穴穴盤中，放置于苗床上，澆水，選用幼苗3～5株組成一叢移植到一穴盤中，并將基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；

(4)澆水：采用噴施方式，澆水次數(shù)為1-3月份3天1次，3-6月份2天1次，6-9月份5天1次，9-12月份3天1次；

(5)除草追肥：定期對栽培基地進行除草打苔處理，移栽后10-15天開始噴施葉面肥，每隔6天噴施一次，成活后每12天噴施一次葉面肥；

(6)溫濕度控制：保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在60％-80％；

(7)病蟲害防治：每月用濃度為1.5‰的甲基托布津水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)，兩年后即可采收。