專利名稱：一種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多糖含量的測(cè)定方法，特別涉及一種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
油茶，俗稱苦茶、建茶、白花茶，因能從其籽中榨取不飽和脂肪酸含量高達(dá)93%的茶油而成為優(yōu)秀的食用植物油之一。同時(shí)，研究表明，油茶籽中還含有多糖、茶皂素、黃酮甙及咖啡堿等具有生物活性的有效成分，有很高的研究和應(yīng)用價(jià)值。植物水溶性多糖是從天然產(chǎn)物中分離出的天然有效成分，具有多種多樣的生物活性及藥理作用，主要包括增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖、抗衰老、增強(qiáng)骨髓造血機(jī)能、抗輻射、對(duì)肝腎等主要臟器的保護(hù)作用等，已在保健、疾病治療等領(lǐng)域廣泛使用。因 此，植物中的水溶性多糖的含量常用來作為評(píng)價(jià)一些藥用植物質(zhì)量的指標(biāo)之一，其含量的測(cè)定可以為天然生物資源的開發(fā)利用和研究提供有效參考數(shù)據(jù)，因此如何定量判斷油茶籽中茶多糖的含量是人們所關(guān)注的。目前油茶籽多糖含量的測(cè)定尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，有關(guān)油茶籽多糖含量的測(cè)定方法鮮有報(bào)道，植物水溶性多糖的測(cè)定都是沿用粗多糖的測(cè)定方法。硫酸-苯酚法是測(cè)定多糖含量的經(jīng)典方法，其原理為用水提取植物中的多糖類組分，在硫酸作用下，水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法于適當(dāng)波長(zhǎng)測(cè)定其多糖含量。在油茶籽多糖含量測(cè)定中，油茶籽多糖在濃硫酸作用下轉(zhuǎn)化為單糖，進(jìn)而可測(cè)定單糖含量。然而由于油茶籽中還含有茶油、茶皂素、黃酮類化合物等其他多種活性成分，因此加大了從油茶籽中有效提取純度較高的多糖的難度，并且影響了多糖含量測(cè)定的精確度。而油茶籽中多糖含量的定量測(cè)定成為多糖產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)以及質(zhì)量控制中的關(guān)鍵技術(shù)問題，因此鑒于現(xiàn)有方法的不足，找到一種如何能精確測(cè)定油茶籽中多糖含量的方法成為目前亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前油茶籽中多糖含量測(cè)定方法所存在的不足，提供一種精確定量測(cè)定油茶籽中多糖含量的方法，該方法具有可操作性強(qiáng)、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性高、在一般常規(guī)實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行測(cè)量的優(yōu)點(diǎn)，并為其他天然產(chǎn)物的多糖含量的精確測(cè)定提供了可靠參考依據(jù)。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)—種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，包括以下步驟(I)稱取烘干磨碎的待測(cè)油茶籽，用低極性溶劑對(duì)所述油茶籽進(jìn)行提取，得油茶籽I和低極性溶劑提取液；(2)用質(zhì)量百分含量為70 85%的乙醇溶液對(duì)油茶籽I進(jìn)行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；
(3)用水對(duì)油茶籽II進(jìn)行提取，得水提取液，將所得水提取液定容，作為多糖待測(cè)溶液；(4)采用硫酸-苯酚法測(cè)定上述待測(cè)溶液中多糖的含量，具體步驟如下吸取多糖樣品溶液，用蒸餾水稀釋，得多糖待測(cè)溶液，吸取2. Oml多糖待測(cè)溶液于試管中，加入5% 10%苯酚試劑I. 0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. 0ml，迅速搖勻，靜置后，置于沸水浴中加熱，取出后迅速冷卻，另以2ml蒸餾水做空白對(duì)照，按紫外分光光度法在490nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出待測(cè)液中多糖的質(zhì)量。本發(fā)明步驟(I)的目的是去除油茶籽中脂溶性成分，如茶油，步驟(2)的目的是去除油茶籽中可溶性甙類物質(zhì)，如油茶籽皂素、黃酮甙等化合物，由于油茶籽中一些可溶性甙類組分在硫酸作用下也會(huì)水解產(chǎn)生單糖，因此采用傳統(tǒng)方法測(cè)定多糖含量時(shí)，這些被水解的單糖也會(huì)被當(dāng)成多糖來定量，因此測(cè)定的多糖含量遠(yuǎn)高于實(shí)際值，從而影響定量測(cè)定的準(zhǔn)確性，所以本發(fā)明采用提取的方法先去除油茶籽中脂溶性物質(zhì)和可溶性甙類物質(zhì)，不僅能保證有效地提取純度較高的多糖，而且避免了這些物質(zhì)對(duì)多糖含量測(cè)定精確度的影響。優(yōu)選地，步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中的提取方法為索氏提取或多次浸提的方法。優(yōu)選地，所述低極性溶劑為石油醚、正戊烷、正己烷、環(huán)己烷中的一種或幾種混合。優(yōu)選地，在步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中，提取時(shí)間為2 6h。優(yōu)選地，步驟(I)中的提取溫度為60 80°C，步驟(2)中的提取溫度為80 100°C，步驟(3)中的提取溫度為100 120°C。優(yōu)選地，步驟(3)中水提取液的定容體積為100 250ml。優(yōu)選地，步驟(4)中多糖樣品溶液的吸取量為O. I 15ml。優(yōu)選地，步驟(4)中置于沸水浴中的加熱時(shí)間為12 18min。優(yōu)選地，在步驟(4)中，所述多糖樣品溶液用蒸餾水稀釋的體積倍數(shù)為10 1000。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的方法，具有可操作性強(qiáng)、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性高、在一般常規(guī)實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行測(cè)量的優(yōu)點(diǎn)，為其他天然產(chǎn)物的多糖含量的精確測(cè)定提供了可靠參考依據(jù)。另外，本發(fā)明為油茶籽多糖產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)以及質(zhì)量控制提供了有效的保證。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所使用的索氏提取或多次浸提的方法均按照本領(lǐng)域常規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作步驟進(jìn)行。下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例I一種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，包括以下步驟(I)準(zhǔn)確稱量油茶籽樣品5g，用雙層濾紙包好，置于索氏提取器中，在圓底燒瓶加入80ml石油醚，在溫度為70°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時(shí)，得油茶籽I和石油醚提取液，保留油茶籽I，棄去石油醚提取液；(2)向裝有上述油茶籽I的圓底燒瓶中加入70%乙醇80ml，在溫度為90°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時(shí)，得油茶籽II和乙醇提取液，棄去乙醇提取液，將所述油茶籽II取出，在避光通風(fēng)處自然晾干；(3)將步驟(2)中干燥后的油茶籽II用雙層濾紙包好，置于索氏提取器中，在圓底燒瓶加入80ml蒸餾水，在溫度為110°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時(shí)，待冷卻后移入250ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至 250ml，得到多糖樣品溶液。(4)采用硫酸-苯酚法測(cè)定上述待測(cè)溶液中多糖的含量4. I標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4. I. I苯酚溶液的配制稱取IOg苯酹,加水150ml充分溶解后轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，置于冰箱備用。4. I. 2葡萄糖儲(chǔ)備液的配制準(zhǔn)確稱取105°C干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖lOOmg，加適量水使之溶解，置于IOOml容量瓶中，加水定容至IOOml,均勻混合后置于冰箱備用。4. I. 3葡萄糖使用液的配制準(zhǔn)確吸取葡萄糖儲(chǔ)備液10ml，置于IOOml容量瓶中，用水稀釋至100ml，得到
O.lmg/ml的葡萄糖使用液。均勻混合后置于冰箱備用。4. I. 4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取葡萄糖使用液O. Iml,O. 2ml,O. 3ml,O. 4ml,O. 5ml,O. 6ml,0. 7ml,0. 8ml,分別置于IOml試管中，向每支試管中補(bǔ)加蒸餾水至2. 0ml，再分別向每支試管中加入所配置的苯酚試劑I. Oml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. Oml，搖勻，放置5min，置于沸水浴中加熱15min,取出，用冷水迅速冷卻至室溫；另以2. Oml蒸懼水重復(fù)上述操作,做空白對(duì)照。在Icm比色皿中按紫外分光光度法在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光光度值，如表I所示。表I葡萄糖濃度在490nm波長(zhǎng)處的吸光光度值
權(quán)利要求
1.一種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟(1)稱取烘干磨碎的待測(cè)油茶籽，用低極性溶劑對(duì)所述油茶籽進(jìn)行提取，得油茶籽I和低極性溶劑提取液；(2)用質(zhì)量百分含量為70 85%的乙醇溶液對(duì)油茶籽I進(jìn)行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；(3)用水對(duì)油茶籽II進(jìn)行提取，得水提取液，將所得水提取液定容，作為多糖樣品溶液；(4)采用硫酸-苯酚法測(cè)定上述待測(cè)溶液中多糖的含量，具體步驟如下吸取多糖樣品溶液，用蒸餾水稀釋，得多糖待測(cè)溶液，吸取2ml多糖待測(cè)溶液于試管中，加入5 10重量％的苯酚試劑I. 0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. 0ml，迅速搖勻，靜置后，置于沸水浴中加熱，取出后迅速冷卻，另以2ml蒸餾水做空白對(duì)照，按紫外分光光度法在490nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出待測(cè)液中多糖的質(zhì)量。
2.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中的提取方法為索氏提取或多次浸提的方法。
3.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述低極性溶劑為石油醚、正戊烷、正己烷、環(huán)己烷中的一種或幾種混合。
4.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，在步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中，提取時(shí)間為2 6h。
5.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟(I)中的提取溫度為60 80°C，步驟(2)中的提取溫度為80 100°C，步驟(3)中的提取溫度為100 120。。。
6.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟(3)中水提取液的定容體積為100 250ml。
7.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟(4)中多糖樣品溶液的吸取量為O. I 15ml。
8.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟(4)中置于沸水浴中的加熱時(shí)間為12 18min。
9.如權(quán)利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述多糖樣品溶液用蒸餾水稀釋的體積倍數(shù)為10 1000。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種油茶籽中多糖含量的測(cè)定方法，包括以下步驟，先依次用低極性溶劑和乙醇提取油茶籽，去除油茶籽中含有的脂溶性物質(zhì)和可溶性甙類物質(zhì)，再用水提取油茶籽中的多糖，而后采用硫酸-苯酚法測(cè)定油茶籽中多糖的含量。本發(fā)明的方法，具有可操作性強(qiáng)、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性高、在一般常規(guī)實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行測(cè)量的優(yōu)點(diǎn)，為多糖產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)以及質(zhì)量控制提供了有效的保證。
文檔編號(hào)G01N21/31GK102914508SQ20121040166
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者伊國(guó)群, 孟慶華 申請(qǐng)人:伊國(guó)群