1.一種大理裂腹魚腎臟細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征在于構(gòu)建方法包括如下步驟：
1)大理裂腹魚腎臟的獲取：先用10-20mg/L的高錳酸鉀浸泡消毒大理裂腹魚魚體10-20分鐘，再用80-100ppm的MS-222麻醉大理裂腹魚魚體；再以75％酒精擦拭魚體后，取其腎臟，加入PBS消毒液清洗大理裂腹魚魚體的腎臟組織；
2)原代培養(yǎng)：將步驟1)獲得的腎臟組織剪成組織小塊，并將其接種于25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，在18-20℃培養(yǎng)箱中倒置過(guò)夜，次日再加入原代培養(yǎng)液，在18-20℃培養(yǎng)箱中啟動(dòng)原代培養(yǎng)，每三天半量更換培養(yǎng)液，第10-12天細(xì)胞開始從組織塊中遷移，30-40天長(zhǎng)成細(xì)胞單層，則原代腎臟細(xì)胞；
3)傳代培養(yǎng)：原代腎臟細(xì)胞鋪滿瓶底80％后開始傳代，先吸出培養(yǎng)瓶中的原代培養(yǎng)液，以含0.1-0.2％的胰蛋白酶-EDTA的胰酶消化法傳代懸起細(xì)胞，加入傳代培養(yǎng)液1-2mL以中和胰酶反應(yīng)，首次傳代按1:1傳，此后按1:2進(jìn)行傳代，于18-20℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；每5-7天傳代一次，傳至第10代時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液換成基礎(chǔ)培養(yǎng)液，所述大理裂腹魚腎臟細(xì)胞系建立成功。
2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述PBS消毒液為含有濃度為100-300IU/mL的青霉素、濃度為100-300μg/mL的鏈霉素以及濃度為20-40μg/mL的兩性霉素B的混合溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液為含有濃度為6-10ng/mL的bFGF和占總體積的10-15％的胎牛血清的L-15或DMEM/F12培養(yǎng)液的混合溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述的原代培養(yǎng)液為含有濃度為6-10ng/mL的bFGF、占總體積的15-20％的胎牛血清、濃度為200-300IU/mL的青霉素、濃度為200-300μg/mL的鏈霉素以及濃度為20-40μg/mL的兩性霉素B的L-15或DMEM/F12培養(yǎng)液的混合溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述的傳代培養(yǎng)液為含有濃度為6-10ng/mL的bFGF、占總體積的15-20％的胎牛血清、濃度為100-200IU/mL的青霉素、濃度為100-200μg/mL的鏈霉素以及濃度為15-20μg/mL的兩性霉素B的L-15或DMEM/F12培養(yǎng)液的混合溶液。
6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述原代培養(yǎng)液、所述傳代培養(yǎng)液和所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液的pH值均為7.0-7.2。
7.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述原代培養(yǎng)液、所述傳代培養(yǎng)液和所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液的滲透壓均為280-300mOsm/L。
8.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法，其特征在于構(gòu)建方法還包括如下細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的步驟：
1)配制細(xì)胞凍存液：凍存液包括L-15或DMEM/F12培養(yǎng)液、胎牛血清和DMSO，按3：6：1的體積比混合，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2)細(xì)胞凍存：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，經(jīng)上述胰酶消化后，細(xì)胞懸液800-1200rpm離心6-10分鐘，棄掉上清液；向細(xì)胞沉淀中加入配制的細(xì)胞凍存液，重懸，使細(xì)胞的濃度約為1×106個(gè)/mL，將1mL細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至1.8mL凍存管中，將凍存管置于程序降溫盒中，-80℃放置24-48小時(shí)，然后放入液氮中長(zhǎng)期保存；
3)細(xì)胞復(fù)蘇：將上述凍存管從液氮中取出，放入30℃水浴鍋中快速搖晃至融化；然后在無(wú)菌操作臺(tái)中，將解凍細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，并加入等量基礎(chǔ)培養(yǎng)液，800-1000rpm離心6-8分鐘，除上清液；用基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，18-20℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，8-10天細(xì)胞即長(zhǎng)成單層。