本發(fā)明涉及組培
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：廣豆根又名山豆根，為豆科植物越南槐的根。具有清熱解毒，利咽消腫之功效，可用于治療咽痛，牙齦腫痛，肺熱咳嗽，濕熱黃疸，鼻咽癌，宮頸癌等癥，近代研究發(fā)現(xiàn)廣豆根所含的總堿及氧化苦參堿具有促進冠脈流量抑制腫瘤細胞和提高免疫力的功能。廣豆根主要分布在廣西，云南、貴州亦有產(chǎn)，但產(chǎn)量較小。主要來源于野生，經(jīng)過多年的采挖，野生資源逐年減少，有些產(chǎn)地己瀕臨枯竭或處于枯竭狀態(tài)，分布地域日趨縮小，上市量正在逐年減少，而近年來對廣豆根的開發(fā)和應(yīng)用卻在逐年增加，導(dǎo)致嚴重的供不應(yīng)求。自然狀態(tài)下，廣豆根主要依靠種子進行繁育，然而，往往種子還未成熟就已大部分脫落，造成繁殖系數(shù)低，另外，靠采取種子進行人工育苗顯然難度較大，所以提供一種能夠使廣豆根種子為種源，縮短育苗時間，保證出芽后芽的存活率、增加芽肉厚度、保證出芽后芽色油綠的培養(yǎng)方法迫在眉睫。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于，提供一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中對菠蘿渣的利用減少了傳統(tǒng)工藝中蔗糖等培養(yǎng)基原料用量，節(jié)省了培養(yǎng)基制備成本，另外，添加本發(fā)明的母液配方，在能夠快速促進壯苗生根，使得生根率達到99％以上，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達到20-25條。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)液與母液混合而成，它們的體積比為3-5:0.03-0.08；所述每升母液主要含有：10-15mg的惡霉靈、10-20mg的蕓苔素內(nèi)酯、10-50mg的α-萘乙酸鈉、10-50mg的嘧霉胺和20-50mg的胺鮮酯；所述每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液主要含有：30-46mg的菠蘿渣水解液、5-10mg的蔗糖、10-20mg的瓊脂、5-8mg的水解乳蛋白、2-8mg的ABT生根粉、1-4mg的玉米素、1-4mg的激動素、1-3mg的異戊烯氨基嘌呤和1-3mg的赤霉素。優(yōu)選地，所述每升母液主要含有：12mg的惡霉靈、15mg的蕓苔素內(nèi)酯、30mg的α-萘乙酸鈉、30mg的嘧霉胺和35mg的胺鮮酯；所述每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液主要含有：38mg的菠蘿渣水解液、7mg的蔗糖、15mg的瓊脂、6mg的水解乳蛋白、5mg的ABT生根粉、2mg的玉米素、2mg的激動素、2mg的異戊烯氨基嘌呤和1-3mg的赤霉素。優(yōu)選地，所述菠蘿渣水解液主要經(jīng)過如下處理得到：a.將菠蘿榨汁后得到的菠蘿渣進行干燥、粉碎，然后加入離子液體至菠蘿渣的質(zhì)量濃度為3％-8％，然后在90-120℃、80-120r/min的條件下，攪拌處理60-120min，得到菠蘿渣溶液，再加入菠蘿渣溶液4-8倍體積的水，在150-200r/min攪拌處理30-60min后，在3000-5000r/min下，離心10-20min，收集沉淀，將沉淀在40-60℃真空干燥3-5h，得到再生菠蘿渣；b.將步驟a所得再生菠蘿渣加適量水充分混勻，再加入纖維素酶進行酶解后即可得到菠蘿渣水解液；所述的酶解是在pH值為4.5-6.5，溫度為55-65℃的條件下，酶解時間為10-12h。優(yōu)選地，所述離子液體為胍鹽類離子液體、醇胺類離子液體、咪唑類離子液體、季銨鹽類離子液體、噻唑類離子液體、多元胺類離子液體、三氮唑類離子液體、吡咯啉類離子液體、噻唑啉類離子液體和苯并三氮唑類離子液體中的一種。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基的配置是將基礎(chǔ)培養(yǎng)液和母液按照各自的組份配置后，按照體積比為3-5:0.03-0.08混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH，濃縮后進行高壓滅菌后即可。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基的pH＝5.0-6.0。綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：1、本發(fā)明的一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基的配方上改進，添加一些能夠在廣豆根在生根壯苗期間所需的因子，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明的基礎(chǔ)培養(yǎng)液后添加本發(fā)明的母液配方，能夠提供生根的良好條件，促進苗健康茁壯，其中胺鮮酯能夠促進根系的發(fā)育，調(diào)節(jié)體內(nèi)養(yǎng)分的平衡；蕓苔素內(nèi)酯為生長調(diào)節(jié)劑，能調(diào)節(jié)生長、促進生根；在組培過程中往往會出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，一般兩個原因，細胞活性不足死亡和病菌感染死亡，惡霉靈和嘧霉胺的添加能夠有效的抑制病原真菌菌絲體的正常生長或直接殺死病菌，又能促進植物生長；本發(fā)明的母液配方能夠快速促進壯苗生根，生根率達到99％以上，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達到20-25條。2、本發(fā)明的廣豆根種子組織培養(yǎng)基中，基礎(chǔ)培養(yǎng)液添加有菠蘿渣，采用離子液體對其進行再生處理，然后用纖維素酶進行水解，菠蘿渣中主要含有纖維素、還原糖等成分，溶解后的纖維素溶液加水之后可使纖維素沉淀析出，實現(xiàn)纖維素的再生，再生過程可去除木質(zhì)素成分，降低對后續(xù)酶水解過程的抑制作用，同時再生過程可使纖維素分子中部分氫鍵斷裂，聚合度、結(jié)晶度降低，使纖維素的表面形態(tài)發(fā)生改變，表面積增大，進而與酶的接觸面積增大，對菠蘿渣的利用減少了傳統(tǒng)工藝中蔗糖等培養(yǎng)基原料用量，節(jié)省了培養(yǎng)基制備成本，同時能夠解決果汁生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的菠蘿渣引起的環(huán)境污染問題。3、本發(fā)明的培養(yǎng)基制備工藝簡單，易操作，具有極大的推廣意義?！揪唧w實施方式】下面的實施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不可以以任何方式限制本發(fā)明。實施例1一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基，由體積比為3:0.03的基礎(chǔ)培養(yǎng)液與母液混合而成，其中，每升母液主要含有：10mg的惡霉靈、10mg的蕓苔素內(nèi)酯、10mg的α-萘乙酸鈉、10mg的嘧霉胺和20mg的胺鮮酯；每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液主要含有：30mg的菠蘿渣水解液、5mg的蔗糖、10mg的瓊脂、5mg的水解乳蛋白、2mg的ABT生根粉、1mg的玉米素、1mg的激動素、1mg的異戊烯氨基嘌呤和1mg的赤霉素；培養(yǎng)基的配置是將基礎(chǔ)培養(yǎng)液和母液按照各自的組份配置后，按照體積比為3:0.03混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH，濃縮后進行高壓滅菌后即可，培養(yǎng)基的PH＝5.0?；A(chǔ)培養(yǎng)液中的菠蘿渣水解液主要經(jīng)過如下處理得到：a.將菠蘿渣進行干燥、粉碎，然后加入離子液體至菠蘿渣的質(zhì)量濃度為3％，然后在90℃、80r/min的條件下，攪拌處理60min，得到菠蘿渣溶液，再加入菠蘿渣溶液4倍體積的水，在150r/min攪拌處理30min后，在3000r/min下，離心10min，收集沉淀，將沉淀在40℃真空干燥3h，得到再生菠蘿渣；b.將步驟a所得再生菠蘿渣加適量水充分混勻，再加入纖維素酶進行酶解后即可得到菠蘿渣水解液；酶解是在pH值為4.5，溫度為55℃的條件下，酶解時間為10h；離子液體為胍鹽類離子液體。實施例2一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基，由體積比為4:0.05的基礎(chǔ)培養(yǎng)液與母液混合而成，其中，每升母液主要含有：12mg的惡霉靈、15mg的蕓苔素內(nèi)酯、30mg的α-萘乙酸鈉、35mg的嘧霉胺和30mg的胺鮮酯；每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液主要含有：38mg的菠蘿渣水解液、7mg的蔗糖、15mg的瓊脂、7mg的水解乳蛋白、5mg的ABT生根粉、2mg的玉米素、2mg的激動素、2mg的異戊烯氨基嘌呤和2mg的赤霉素；培養(yǎng)基的配置是將基礎(chǔ)培養(yǎng)液和母液按照各自的組份配置后，按照體積比為4:0.05混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH，濃縮后進行高壓滅菌后即可，培養(yǎng)基的PH＝5.5。基礎(chǔ)培養(yǎng)液中的菠蘿渣水解液主要經(jīng)過如下處理得到：a.將菠蘿渣進行干燥、粉碎，然后加入離子液體至菠蘿渣的質(zhì)量濃度為3％-8％，然后在105℃、100r/min的條件下，攪拌處理80min，得到菠蘿渣溶液，再加入菠蘿渣溶液4-8倍體積的水，在180r/min攪拌處理45min后，在4000r/min下，離心15min，收集沉淀，將沉淀在50℃真空干燥4h，得到再生菠蘿渣；b.將步驟a所得再生菠蘿渣加適量水充分混勻，再加入纖維素酶進行酶解后即可得到菠蘿渣水解液；水解是在pH值為5.5，溫度為60℃的條件下，酶解時間為11h；離子液體為咪唑類離子液體。實施例3一種廣豆根種子組織培養(yǎng)基，由體積比為5:0.08的基礎(chǔ)培養(yǎng)液與母液混合而成，其中，每升母液主要含有：15mg的惡霉靈、20mg的蕓苔素內(nèi)酯、50mg的α-萘乙酸鈉、50mg的嘧霉胺和50mg的胺鮮酯；每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液主要含有：46mg的菠蘿渣水解液、10mg的蔗糖、20mg的瓊脂、8mg的水解乳蛋白、8mg的ABT生根粉、4mg的玉米素、4mg的激動素、3mg的異戊烯氨基嘌呤和3mg的赤霉素；培養(yǎng)基的配置是將基礎(chǔ)培養(yǎng)液和母液按照各自的組份配置后，按照體積比為5:0.08混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH，濃縮后進行高壓滅菌后即可，培養(yǎng)基的PH＝6.0?；A(chǔ)培養(yǎng)液中的菠蘿渣水解液主要經(jīng)過如下處理得到：a.將菠蘿渣進行干燥、粉碎，然后加入離子液體至菠蘿渣的質(zhì)量濃度為8％，然后在120℃、120r/min的條件下，攪拌處理120min，得到菠蘿渣溶液，再加入菠蘿渣溶液4-8倍體積的水，在200r/min攪拌處理60min后，在5000r/min下，離心20min，收集沉淀，將沉淀在60℃真空干燥3-5h，得到再生菠蘿渣；b.將步驟a所得再生菠蘿渣加適量水充分混勻，再加入纖維素酶進行酶解后即可得到菠蘿渣水解液；酶解是在pH值為6.5，溫度為65℃的條件下，酶解時間為12h；離子液體為吡咯啉類離子液體。效果驗證為了進一步說明本發(fā)明廣豆根種子組織培養(yǎng)基的應(yīng)用價值，實施人選擇無病害，無殘缺，粒徑大小相近的廣豆根種子，經(jīng)過滅菌后，在無菌條件下分別接入以下2組中制備得到的培養(yǎng)基，每個處理接種10瓶，每瓶10粒，培養(yǎng)溫度(27±1)℃，光照強度2500-3000lx，光照時間12h/d。記錄出芽時間，芽生長情況，結(jié)果見表1；第一組：去掉母液，其他方式嚴格按照實施例2進行；第二組：嚴格按照實施例2進行。表1廣豆根種子的生長情況試驗組發(fā)芽率％出芽時間(h)芽顏色芽肉厚度(cm)第一組7570嫩黃-黃綠-黃綠0.09第二組10041嫩黃-嫩綠-綠色0.13由上表可知，通過采用本發(fā)明的的技術(shù)方案(實施例2)，的發(fā)芽率達到100％，平均出芽時間和芽色也優(yōu)于去掉母液的第一組，且芽厚度飽滿。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3