本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)與繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法。

背景技術(shù)：

玉林香蒜已經(jīng)有一千多年的栽培歷史。其個(gè)頭大、粒瓣結(jié)實(shí)、辛辣多汁、肉脆味香，莖皮顏色多為紫色，亦有白色。被列為廣西土特產(chǎn)品，銷路廣，出口價(jià)值高，經(jīng)濟(jì)效益好。產(chǎn)地集中在仁東、仁厚、福綿、大平山等地。

大蒜氣味辛溫，含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、鈣、鐵和維生素A、B、C等營養(yǎng)物質(zhì)，并具有較高的藥用價(jià)值，有"消炎、理胃、溫中、除邪痹毒氣"之功效。大蒜頭還是常用的調(diào)料，在煮瓜、菜、魚、肉時(shí)，放入幾瓣，芳香可口。

玉林香蒜是廣西名優(yōu)地方特色農(nóng)產(chǎn)品，因其具有品質(zhì)獨(dú)特、香味濃郁、辣味強(qiáng)烈、蒜油豐富、衣澤紫紅等優(yōu)點(diǎn)，在市場(chǎng)上深受歡迎。據(jù)有關(guān)部門檢測(cè)，玉林香蒜是目前我國大蒜品種中香味最濃、辣味最烈、蒜油最豐富的品種，又名玉林大蒜，極適宜加工蒜油、蒜蓉和調(diào)味食品。

大蒜是無性繁殖植物，由于大蒜不能進(jìn)行有性繁殖,通常是農(nóng)民種植戶常年自留種蒜，有限的自然變異并不能滿足遺傳改良的要求,通過傳統(tǒng)的方法很難準(zhǔn)確測(cè)定次生代謝組分含量和評(píng)價(jià)遺傳變異。玉林香蒜依靠鱗莖繁殖，使病毒通過蒜種逐年累積并代代相傳，導(dǎo)致品種種性嚴(yán)重退化，嚴(yán)重制約了玉林香蒜大規(guī)模生產(chǎn)和持續(xù)健康發(fā)展，限制了將玉林香蒜打造成地區(qū)特色產(chǎn)品的步伐。

目前很少關(guān)于針對(duì)玉林香蒜，利用大蒜莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)進(jìn)行繁殖的研究，雖然目前有關(guān)其他品種進(jìn)行組織培養(yǎng)的報(bào)道，但由于玉林香蒜品種與其他品種存在一定差別，組培效果差。缺少一種專門針對(duì)玉林香蒜的脫毒組培苗的培養(yǎng)方法和專用培養(yǎng)基。

公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對(duì)背景技術(shù)中的問題，提供一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，適合玉林香蒜利用氣生鱗莖的氣生鱗莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)繁殖，本發(fā)明方法具有氣生鱗莖尖萌動(dòng)早、長(zhǎng)勢(shì)快、成活率最高；組培出來的玉林香蒜苗莖粗壯，生命力頑強(qiáng)，適應(yīng)能力強(qiáng)的特點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期15-20天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.5cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在5-10℃環(huán)境下，備用；

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒1-3次，接著放入質(zhì)量濃度為0.07-0.15％的氯化汞溶液中浸泡12-18min后取出，再用無菌水沖洗3-6次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為0.1-1.5mm且?guī)?～3個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用；

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)9-14天，然后移入溫度為25±5℃，光照強(qiáng)度為2000-3000lx，每天光照時(shí)間9-12h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用；

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12-18天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。

優(yōu)化的，所述播種比常規(guī)大蒜播種提前10-15天。

更優(yōu)化的，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.03-0.2mg/L、茉莉酸0.04-0.1mg/L、根皮苷0.3-0.9mg/L、活性炭1.5-4g/L、番茄汁8-15g/L、復(fù)合維生素0.1-0.5mg/L。

進(jìn)一步優(yōu)化的，所述增殖培養(yǎng)基為以B5或MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.2-1.5mg/L、NAA 0.3-0.5mg/L。

更進(jìn)一步優(yōu)化的，所述氣生鱗莖尖直徑大小為0.5-1.0mm。

再更進(jìn)一步優(yōu)化的，所述氣生鱗莖尖帶1-3個(gè)葉原基。

再更進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟c遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度60-90％。

綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：

1.本發(fā)明在進(jìn)行組培前，先進(jìn)行將玉林香蒜進(jìn)行培育氣生鱗莖，然后再將氣生鱗莖進(jìn)行脫毒預(yù)處理，可以有效的提高大蒜種性，防止大蒜退化，從而更適合取樣進(jìn)行組織培養(yǎng)。選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣，播種期較一般生產(chǎn)田種植大蒜提前10-15天，適當(dāng)稀植，種植密度較普通種植減少20-30％，施足底肥和做好田間管理。當(dāng)蒜薹伸出葉鞘，總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，使?fàn)I養(yǎng)更多地集中到氣生鱗莖中。在大蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲蒜頭收獲期15～20天，待蒜薹變黃，氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)采收。通過提前種植、延遲收獲，可有效延長(zhǎng)氣生鱗莖中的營養(yǎng)積累，可提高組織過程中的成功率10％以上。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究證明，經(jīng)過本發(fā)明處理后的玉林香蒜組培苗，在選定的試驗(yàn)田按常規(guī)種植管理技術(shù)進(jìn)行對(duì)比試種試驗(yàn)。結(jié)果本發(fā)明處理后的蒜種種植后蒜苗畝產(chǎn)量達(dá)到3370公斤，未經(jīng)本發(fā)明處理的蒜種蒜苗畝產(chǎn)量2800公斤，畝增產(chǎn)570公斤，畝產(chǎn)量提高20.36％；本發(fā)明處理后的蒜種蒜頭畝產(chǎn)量達(dá)到840公斤，未經(jīng)本發(fā)明處理的蒜種蒜頭畝產(chǎn)量700公斤，畝增產(chǎn)140公斤，畝產(chǎn)量提高20％。

2.本發(fā)明中在進(jìn)行大蒜組織培養(yǎng)時(shí)，選擇氣生鱗莖尖直徑大小為0.5-1.0mm，氣生鱗莖尖帶1-3個(gè)葉原基且以1-2個(gè)為最佳。通過對(duì)比研究了外植體莖尖的大小、帶葉原基的多少、對(duì)芽誘導(dǎo)與增殖的影響效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，切取不同大小的莖尖在同等條件下培養(yǎng)，結(jié)果表明，以0.1mm不帶葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，大部分莖尖褐變成干枯死亡；以1.0mm帶有2-3個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，莖尖萌動(dòng)早、長(zhǎng)勢(shì)快、成活率最高；以0.5-1.0mm大小、帶1-2個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，較為適宜。

3.大蒜培苗培育過程中誘導(dǎo)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基對(duì)大蒜離體組織的分裂誘導(dǎo)、后期增殖的影響很大。本發(fā)明前期選擇MS培養(yǎng)基或B5培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可以具有維持離休植物細(xì)胞基本生命所需要的大部分營養(yǎng)成分，以此做為大蒜組培過程中的培養(yǎng)基是不夠的。本發(fā)明通過添加適合大蒜生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用的各種活性成分，補(bǔ)充基礎(chǔ)營養(yǎng)中大蒜組培所需營養(yǎng)成分，均衡營養(yǎng)；利用各物質(zhì)間相互作用，為大蒜的組織培養(yǎng)過程提供適宜的專用培養(yǎng)基。對(duì)比研究中發(fā)現(xiàn)，以B5為基本培養(yǎng)基最好，附加不同濃度6-BA、NAA和其他活性成分，能有效針對(duì)玉林香蒜植物特性制備，能夠有效提高大蒜出芽莖尖數(shù)和芽誘導(dǎo)率，組培苗根系發(fā)達(dá)。在后期增殖過程中，玉林香蒜所需要成分發(fā)生變化，如果繼續(xù)以誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)增殖不利于組培苗的進(jìn)一步生長(zhǎng)，故本發(fā)明針對(duì)玉林香蒜組培過程中特定階段調(diào)配了玉林香蒜專用的增殖培養(yǎng)基，以以B5或MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.2-1.5mg/L、NAA 0.3-0.5mg/L。經(jīng)本發(fā)明組培出來的玉林香蒜苗具有莖粗壯，生命力頑強(qiáng)，適應(yīng)能力強(qiáng)等特點(diǎn)。

4.本發(fā)明誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加了蕓苔素內(nèi)酯，具有用量少，可抑制生長(zhǎng)素氧化酶的活性，提高植物內(nèi)源生長(zhǎng)素的含量，從而顯著促進(jìn)大蒜的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。蕓苔素內(nèi)酯與培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)素如NAA及其他活性成分如茉莉酸等，活性相互之間具有促進(jìn)作用，共同促進(jìn)大蒜組織中組織或組培苗的生長(zhǎng)。本發(fā)明中還添加有茉莉酸可以有效促進(jìn)大蒜組織細(xì)胞的分裂、分化，與6-BA一起共同促進(jìn)大蒜組織細(xì)胞分裂。添加茉莉酸后可顯著促進(jìn)大蒜根系變多和生長(zhǎng)，能夠激發(fā)防御植物基因的表達(dá)，誘導(dǎo)植物的化學(xué)防御，使大蒜組培苗今后種植過程中適應(yīng)能力增強(qiáng)，移栽成活性高。

5.本發(fā)明誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加一定濃度的活性炭，可以有效減少大蒜組織和培養(yǎng)基變色，有效吸附培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)和培養(yǎng)基中雜質(zhì)，對(duì)組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物也可以起到吸附的作用，從面減少大蒜組培過程中的成活率。本發(fā)明中的根皮苷可以在培養(yǎng)基酸性環(huán)境下，可以有效的抑制培養(yǎng)基內(nèi)有害微生物的活動(dòng)，延長(zhǎng)培養(yǎng)基變質(zhì)，與活性炭共同作用，有效的保持培養(yǎng)基穩(wěn)定，處于適合大蒜生長(zhǎng)的環(huán)境狀態(tài)下。本發(fā)明培養(yǎng)基與基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比，變色時(shí)間可延遲培養(yǎng)基5-8天。

6.本發(fā)明組培方法過程純大部分在全自然采光組培車間，克服了傳統(tǒng)組培育苗必須使用日光燈作為植物生長(zhǎng)光源的問題，減少了日光燈具購置費(fèi)、電費(fèi)等生產(chǎn)成本，大蒜組培種苗植株健壯、適應(yīng)能力強(qiáng)、移栽成活率高，種苗質(zhì)量顯著提高。

【具體實(shí)施方式】

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，播種比常規(guī)大蒜播種提前10天，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期15天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.5cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在5-10℃環(huán)境下，備用。

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒1次，接著放入質(zhì)量濃度為0.07％的氯化汞溶液中浸泡12min后取出，再用無菌水沖洗3次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為0.1mm且?guī)?個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用。

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)9天，遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度為60％。然后移入溫度為25±1℃，光照強(qiáng)度為2000x，每天光照時(shí)間12h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用。

其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.03mg/L、茉莉酸0.04mg/L、根皮苷0.3mg/L、活性炭1.5g/L、番茄汁8g/L、復(fù)合維生素0.1mg/L。

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。其中，增殖培養(yǎng)基為以B5基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.2mg/L、NAA 0.3mg/L。

實(shí)施例2

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，播種比常規(guī)大蒜播種提前15天，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期20天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.4cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在6-10℃環(huán)境下，備用。

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒3次，接著放入質(zhì)量濃度為0.15％的氯化汞溶液中浸泡18min后取出，再用無菌水沖洗6次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為1.5mm且?guī)?個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用。

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)14天，遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度為90％。然后移入溫度為25±5℃，光照強(qiáng)度為3000lx，每天光照時(shí)間9h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用。

其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.2mg/L、茉莉酸0.1mg/L、根皮苷0.9mg/L、活性炭4g/L、番茄汁15g/L、復(fù)合維生素0.5mg/L。

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。其中，增殖培養(yǎng)基為以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.5mg/L、NAA 0.5mg/L。

實(shí)施例3

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，播種比常規(guī)大蒜播種提前11天，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期16天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.5cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在6-9℃環(huán)境下，備用。

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒1-3次，接著放入質(zhì)量濃度為0.11％的氯化汞溶液中浸泡15min后取出，再用無菌水沖洗5次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為0.7mm且?guī)?個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用。

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)12天，遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度為75％。然后移入溫度為25±2℃，光照強(qiáng)度為2500lx，每天光照時(shí)間11.5h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用。

其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.11mg/L、茉莉酸0.07mg/L、根皮苷0.6mg/L、活性炭2.7g/L、番茄汁11.5g/L、復(fù)合維生素0.3mg/L。

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)15天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。其中，增殖培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.35mg/L、NAA 0.4mg/L。

實(shí)施例4

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，播種比常規(guī)大蒜播種提前12天，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期17天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.3cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在5-10℃環(huán)境下，備用。

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒3次，接著放入質(zhì)量濃度為0.13％的氯化汞溶液中浸泡16min后取出，再用無菌水沖洗5次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為1.0mm且?guī)?個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用。

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)13天，遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度為85％。然后移入溫度為25±4℃，光照強(qiáng)度為2800lx，每天光照時(shí)間11h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用。

其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.17mg/L、茉莉酸0.08mg/L、根皮苷0.8mg/L、活性炭3.5g/L、番茄汁13g/L、復(fù)合維生素0.4mg/L。

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)16天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。其中，增殖培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.4mg/L、NAA 0.45mg/L。

實(shí)施例5

一種玉林香蒜的提純復(fù)壯方法，包括以下步驟：

a.選擇具有玉林香蒜典型遺傳特性的蒜瓣進(jìn)行播種，播種比常規(guī)大蒜播種提前13天，當(dāng)蒜薹伸出葉鞘、總苞彭大后，將總苞撕破并摘除小花，玉林香蒜生長(zhǎng)后期不采收蒜薹，延遲玉林香蒜收獲期18天，待所述蒜薹變黃、氣生鱗莖發(fā)育成熟時(shí)，采收直徑大于0.5cm的氣生鱗莖，最后將所述氣生鱗莖貯藏在5-8℃環(huán)境下，備用。

b.取步驟a中所述氣生鱗莖，先去外皮后用水沖洗干凈，再用酒精進(jìn)行表面清毒2次，接著放入質(zhì)量濃度為0.09％的氯化汞溶液中浸泡14min后取出，再用無菌水沖洗4次，最后將氣生鱗莖于超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝?nèi)ト赓|(zhì)鱗片，取出直徑大小為0.5mm且?guī)?個(gè)葉原基的氣生鱗莖尖，備用。

c.取步驟b中所述氣生鱗莖尖，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于遮光培養(yǎng)車間進(jìn)行暗培養(yǎng)11天，遮光培養(yǎng)車間的空氣濕度為70％。然后移入溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度為2300lx，每天光照時(shí)間10h的全自然采光組培車間中，繼續(xù)培養(yǎng)至氣生鱗莖尖長(zhǎng)出綠色幼芽，得無根組培芽，備用。

其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：蕓苔素內(nèi)酯0.06mg/L、茉莉酸0.05mg/L、根皮苷0.5mg/L、活性炭2.5g/L、番茄汁10g/L、復(fù)合維生素0.2mg/L。

d.取步驟c中所述無根組培芽移入至增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)14天，組培芽長(zhǎng)出細(xì)根后，即得大蒜脫毒組培苗。其中，增殖培養(yǎng)基為以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基計(jì)，添加以下質(zhì)量-體積濃度的活性成分：6-BA 1.3mg/L、NAA 0.35mg/L。

上述說明是針對(duì)本發(fā)明較佳可行實(shí)施例的詳細(xì)說明，但實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明的專利申請(qǐng)范圍，凡本發(fā)明所提示的技術(shù)精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應(yīng)屬于本發(fā)明所涵蓋專利范圍。