1.一種始興石斛種苗無(wú)性克隆快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步驟:
一、預(yù)處理、誘導(dǎo)培養(yǎng);
選取始興石斛株系,用水沖洗干凈,剪去葉片,在70%酒精中浸泡30秒,再用0.1%升汞溶液消毒5~10分鐘,無(wú)菌水沖洗4~5次,切取高1~2厘米帶節(jié)的莖段,接種到類原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基M1,45天后,莖段在培養(yǎng)基上有腋芽產(chǎn)生,莖段基部切口膨大形成顆粒突起;
二、形成類原球莖;
轉(zhuǎn)接至上述培養(yǎng)基M1上,再經(jīng)過(guò)50天培養(yǎng),形成類原球莖,誘導(dǎo)類原球莖階段的培養(yǎng)溫度為25±2℃,光照度1500~2000Lx,光照12小時(shí)/天;
三、類原球莖增殖;
將獲得的類原球莖繁殖材料轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基M2中,在該培養(yǎng)基上培養(yǎng)45天后,類原球莖增殖倍數(shù)可達(dá)到8倍以上;經(jīng)過(guò)3代類原球莖增殖培養(yǎng)可獲得足夠的繁殖材料進(jìn)行類原球莖分化培養(yǎng),類原球莖增殖階段的培養(yǎng)溫度為25±2℃,光照度1500~2000Lx,光照12小時(shí)/天;
四、分化培養(yǎng);
將獲得的類原球莖繁殖材料轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基M3中,45天后,類原球莖在培養(yǎng)基上分化形成高3~5厘米不定芽,類原球莖分化階段的培養(yǎng)溫度為27±2℃,光照度2000~3000Lx,光照12小時(shí)/天;
五、生根壯苗;
將高3~5厘米的不定芽,轉(zhuǎn)到生根壯苗培養(yǎng)基M4,培養(yǎng)60天時(shí),苗高可達(dá)到5~7厘米,根數(shù)3~5條,生根率為95%以上,生根壯苗階段的培養(yǎng)溫度為27±2℃,光照度2000~3000Lx,光照12小時(shí)/天;
六、移栽;
將生根培養(yǎng)50-70天的試管苗在強(qiáng)光照下煉苗7天后出瓶,移栽時(shí),從培養(yǎng)瓶中取出生根苗,洗凈附著的培養(yǎng)基后,用千分之一的高錳酸鉀溶液浸泡5分鐘,種植基質(zhì)采用已經(jīng)發(fā)酵好的闊葉林樹皮和木屑的混合基質(zhì),注意保持適宜濕度和溫度,置于陰涼通風(fēng)處栽培,成活率可達(dá)95%以上,25-35天成活后的植株產(chǎn)生新的根系,移入大棚進(jìn)行正常水、肥、藥管理。
2.如權(quán)利要求1所述一種始興石斛種苗無(wú)性克隆快速繁殖方法,其特征在于,所述類原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基M1的成分為:每升含花寶1號(hào)1~2g,蛋白胨0.5~2g,椰子汁50~100mL,肌醇80~120mg,甘氨酸1.5~2.5mg,鹽酸硫胺素0.05~0.2mg,鹽酸吡哆醇0.4~0.8mg,煙酸0.4~0.8mg,6-芐基嘌呤5.0~8.0毫克,萘乙酸0.2~2mg,蔗糖15~30g,瓊脂6~7g,pH 5.4-5.6。
3.如權(quán)利要求1所述一種始興石斛種苗無(wú)性克隆快速繁殖方法,其特征在于,所述增殖培養(yǎng)基M2的成分為:每升含花寶1號(hào)1~2g,蛋白胨0.5~2g,土豆泥40~80g,肌醇80~120mg,甘氨酸1.5~2.5mg,鹽酸硫胺素0.05~0.2mg,鹽酸吡哆醇0.4~0.8mg,煙酸0.4~0.8mg,6-芐基嘌呤2.0~5.0毫克,萘乙酸0.2~0.5mg,蔗糖15~30g,瓊脂6~7g,pH 5.4-5.6。
4.如權(quán)利要求1所述一種始興石斛種苗無(wú)性克隆快速繁殖方法,其特征在于,所述分化培養(yǎng)基M3的成分為:每升含花寶1號(hào)1~2g,蛋白胨0.5~2g,土豆泥40~80g,活性碳50~100mg,肌醇80~120mg,甘氨酸1.5~2.5mg,鹽酸硫胺素0.05~0.2mg,鹽酸吡哆醇0.4~0.8mg,煙酸0.4~0.8mg,6-芐基嘌呤3.0~6.0毫克,萘乙酸0.2~0.5mg,蔗糖15~30g,瓊脂6~7g,pH 5.4-5.6。
5.如權(quán)利要求1所述一種始興石斛種苗無(wú)性克隆快速繁殖方法,其特征在于,所述生根壯苗培養(yǎng)基M4的成分為:每升含花寶1號(hào)1~2g,蛋白胨0.5~2g,土豆泥40~80g,活性碳500~1000mg,肌醇80~120mg,甘氨酸1.5~2.5mg,鹽酸硫胺素0.05~0.2mg,鹽酸吡哆醇0.4~0.8mg,煙酸0.4~0.8mg,萘乙酸0.2~0.5mg,蔗糖15~30g,瓊脂6~7g,pH 5.4-5.6。