1.一種鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于包括以下步驟:
A、采用鴨茅成熟種子作為外植體,將鴨茅成熟種子清洗滅菌后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)26~30d得到愈傷組織,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基由N6培養(yǎng)基、Vb stock、30g/L的蔗糖、200mg/L的酸水解絡(luò)蛋白、500mg/L的脯氨酸、7.0mg/L的2,4-D、4.5g/L的瓊脂組成,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的PH=5.8;
B、將愈傷組織轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)5~9d,所述繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、30g/L的蔗糖、5.0mg/L的2,4-D、1.0mg/L的6-BA、1.0g/L的活性炭、4.5g/L的瓊脂組成,所述繼代培養(yǎng)基的PH=5.8;
C、將經(jīng)過步驟B處理的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)18~22d,所述分化培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、30g/L的蔗糖、0.2mg/L的NAA、0.5mg/L的GA、1.0mg/L的6-BA、4.5g/L的瓊脂組成,所述分化培養(yǎng)基的PH=5.8;
D、當(dāng)幼苗長至2~3cm時(shí),將其移栽。
2.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:在步驟A中,對鴨茅成熟種子清洗滅菌的處理方式如下所述:首先,將鴨茅成熟種子放入瓶中,并在瓶中添加無水乙醇浸泡1分鐘,接著鴨茅成熟種子取出用蒸餾水清洗干凈,然后在瓶中加入蒸餾水并將清洗干凈的鴨茅成熟種子放入瓶中,將瓶子置于4℃冰箱中進(jìn)行泡種處理,所述泡種的時(shí)間為24h,泡種結(jié)束后,將鴨茅成熟種子取出放入70%的乙醇溶液中浸泡1min,再取出放入1%的NaClO溶液中浸泡30min,最后將鴨茅成熟種子取出后用雙蒸水清洗3-5次,并將其置于滅菌濾紙,晾干多余水分。
3.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:在步驟A中,將鴨茅成熟種子清洗滅菌后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)12~16d后,減去鴨茅成熟種子上發(fā)出的新芽并更換新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12~16d后得到愈傷組織。
4.如權(quán)利要求3所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:在步驟A中,將鴨茅成熟種子清洗滅菌后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14d后,減去鴨茅成熟種子上發(fā)出的新芽并更換新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)14d后得到愈傷組織。
5.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中含有的N6培養(yǎng)基由KNO3、NH4SO4、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、FeSO4·7H2OZnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H2BO3、KI、甘氨酸、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素組成,各組分的含量如下所述:KNO3為2830mg/L,NH4SO4為463mg/L,CaCl2·2H2O為166mg/L,MgSO4·7H2O為,185mg/L,KH2PO4為400mg/L,MnSO4·4H2O為4.4mg/L,ZnSO4·7H2O為1.6mg/L,H3BO3為0.8mg/L,KI為1.6mg/L,甘氨酸為2.0mg/L,煙酸為0.5mg/L,鹽酸硫胺素為1.0mg/L,鹽酸吡哆醇為0.5mg/L。
6.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中含有的Vb stock由9.9mg/L的Vb1、9.5mg/L的Vb6、4.5mg/L的煙酸組成。
7.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:所述繼代培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基中含有的MS培養(yǎng)基由KNO3、NH4NO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2·2H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2-EDTA、FeSO4·4H2O、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、肌醇組成,各組分的含量如下所述:KNO3為1900mg/L,NH4NO3為1650mg/L,MgSO4·7H2O為370mg/L,KH2PO4為170mg/L,CaCl2·2H2O為440mg/L,MnSO4·4H2O為22.3mg/L,ZnSO4·7H2O為8.6mg/L,H3BO3為6.2mg/L,KI為0.83mg/L,NaMoO4·2H2O為0.25mg/L,CuSO4·5H2O為0.025mg/L,CoCl2·6H2O為0.025mg/L,Na2-EDTA為37.3mg/L,F(xiàn)eSO4·4H2O為27.8mg/L,甘氨酸為2.0mg/L,鹽酸硫胺素為0.1mg/L,鹽酸吡哆醇為0.5mg/L,煙酸為0.5mg/L,肌醇為100mg/L。
8.如權(quán)利要求1所述的鴨茅組織培養(yǎng)再生體系的建立方法,其特征在于:在步驟A中,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的環(huán)境溫度為25℃,且培養(yǎng)方式為暗培。