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動物精子稀釋液及其配制方法和利用該稀釋液冷凍、冷藏保存精子的方法與流程

文檔序號:11784649閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.動物精子稀釋液,其特征在于:由50mL-100mL丙三醇、10g-20g葡萄糖、10g-20g果糖、20g-30g三羥甲基氨基甲烷、10g-20g檸檬酸、0.1g-0.5g脫脂小麥蛋白粉、0.5g-1g脫脂豌豆蛋白粉、0.5g-1g脫脂花生蛋白粉、0.5g-1g脫脂大豆蛋白粉和180mL-190mL滅菌蒸餾水組成。

2.如權(quán)利要求1所述的動物精子稀釋液的制備方法,其特征在于:該方法按以下步驟進(jìn)行:

一、用分析天平稱20g-30g三羥甲基氨基甲烷,然后取180mL-190mL滅菌蒸餾水,在容量瓶中混合溶解,得混合物;

二、分別稱?。悍謩e稱取0.5g-1g脫脂大豆蛋白粉、0.5g-1g脫脂豌豆蛋白粉、0.5g-1g脫脂花生蛋白粉和0.1g-0.5g脫脂小麥蛋白粉溶于步驟一的混合物中,超聲波裂解大分子蛋白、細(xì)菌和病毒,獲得低分子蛋白或多肽混合的無菌溶液;放入0-8℃冷藏沉降24h-48h;

三、棄去步驟二中的沉淀物,得上清液;在分析天平上分別稱取10g-20g檸檬酸、10g-20g葡萄糖、10g-20g果糖和50mL-100mL丙三醇加入上述上清液中,超聲波混勻裂解細(xì)菌和病毒,放入4℃冷藏得到動物精子稀釋液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的動物精子稀釋液的制備方法,其特征在于:所述三羥甲基氨基甲烷的質(zhì)量為20g。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的動物精子稀釋液的制備方法,其特征在于:滅菌蒸餾水的體積為180mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的動物精子稀釋液的制備方法,其特征在于:步驟二超聲波裂解大分子蛋白、細(xì)菌和病毒,獲得低分子蛋白或多肽混合的無菌溶液;放入4℃冷藏沉降24h。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的動物精子稀釋液的制備方法,其特征在于:步驟三在分析天平上分別稱取10g檸檬酸、10g葡萄糖、10g果糖和50mL丙三醇。

7.利用權(quán)利要求1所述的動物精子稀釋液冷凍保存精子的方法按以下步驟進(jìn)行:

一、將采集到的動物精液放入保溫瓶內(nèi),溫度保持在20-35℃;

二、將步驟一中的動物精液用分光光度計(jì)測量密度,用動物精子稀釋液按精子數(shù)300-1000萬/mL稀釋,用0.25mL的凍精細(xì)管,用灌封機(jī)將稀釋好的精液灌裝到細(xì)管中并封口;

三、將步驟二中的細(xì)管精液放到降溫柜中,以0.1-0.5℃/min的速度降溫,降到0-4℃;

四、將步驟三中的細(xì)管精液靜置1h-2h;

五、將步驟四的細(xì)管精液放在液氮上方,距離液氮面高度1.0cm-2.0cm,溫度為零下100℃-120℃,熏蒸5min-15min,直接投到液氮里,在液氮里把細(xì)管凍精裝到紗布袋里備用。

8.利用權(quán)利要求1所述的動物精子稀釋液冷藏保存精子的方法按以下步驟進(jìn)行:

一、將采集到的動物精液放入保溫瓶內(nèi),溫度保持在20-35℃,帶到實(shí)驗(yàn)室;

二、將步驟一中的精液用分光光度計(jì)測量密度,用稀釋液按精子數(shù)300-1000萬/mL稀釋,用0.25mL的凍精細(xì)管,用灌封機(jī)將稀釋好的精液灌裝到凍精細(xì)管中并封口;

三、將步驟二中的細(xì)管精液放到降溫柜中,以0.1-0.5℃/min的速度降溫,降到0-4℃?zhèn)溆谩?/p>

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