一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法，具體操作步驟如下：1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分；2)外植體的選取及消毒；3)不定芽的誘導(dǎo)及增殖；4)生根培養(yǎng)；5)移栽。本發(fā)明有益的效果：本發(fā)明利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對睡蓮進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，能夠在短時間內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致的優(yōu)質(zhì)壯苗，克服了常規(guī)繁殖方法慢的缺點，同時對其規(guī)?；a(chǎn)和種質(zhì)資源保存都具有積極意義。
【專利說明】一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]睡蓮(Nymphaea tetragona Georgi)為睡蓮科睡蓮屬多年生水生草本植物，花葉俱美，花色豐富，開花期長，觀賞價值極高；睡蓮的根能吸收水中的鉛、汞、苯酚等有毒物質(zhì)，是難得的水體凈化植物；此外睡蓮還具有一定的藥用價值。然而睡蓮多依賴分株繁殖和播種繁殖，繁殖系數(shù)低、周期長，難以滿足市場的需要。因此，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行睡蓮的快速繁殖，可以在較短期內(nèi)獲得大量與母株遺傳性狀一致的種苗，這對于保存優(yōu)良種質(zhì)資源、繁殖名優(yōu)睡蓮品種具有重要的意義，同時對于實現(xiàn)其規(guī)?；a(chǎn)以滿足國內(nèi)外市場的需求也有切實的應(yīng)用價值。但是，在此之前還沒有關(guān)于睡蓮組織培養(yǎng)研宄的報道，更沒有成功的實例。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:該睡蓮組織培養(yǎng)的方法主要包括如下步驟:
[0005]I)、培養(yǎng)基的配制:
[0006](I)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ；
[0007](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ 1.0 ?3.0mg/L+NAA 0.05 ?0.5mg/L+ 活性炭0.2 ?0.5mg/L ； (3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA 2.0 ?4.0mg/L+NAA 0.1 ?0.5mg/L ；
[0008](4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA 0.05 ?0.2mg/L+IBA 0.05 ?0.2mg/L ；
[0009]2)外植體的選取與滅菌:將睡蓮根莖上的頂芽及側(cè)芽周緣修整光滑，清洗并消毒后備用;
[0010]3)不定芽的誘導(dǎo)及增殖:將步驟2)消毒處理后的芽體在無菌條件下接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基的固體層中，經(jīng)I?2個月后可直接誘導(dǎo)出不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上可進(jìn)一步得進(jìn)行增殖；
[0011]4)生根培養(yǎng):將步驟3)增殖芽叢在無菌條件下分割成單株后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15?25天后可生根；
[0012]5)移栽:將步驟4)生根睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗，然后移栽至泥水槽中栽培。
[0013]進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟I)中，所述的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分具體為:
[0014](I)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ；
[0015](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+ 活性炭 0.2mg/L ；
[0016](3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L ；
[0017](4)壯苗培養(yǎng)基固體層:MS+NAA 0.lmg/L+IBA 0.lmg/L。
[0018]進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟2)中，所述的消毒處理是挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側(cè)芽連同部分根莖組織切下，用鋒利的刀片將芽體周緣的葉片及毛絮切除并修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡中20?60min，然后再用自來水沖洗干凈，接著依次在體積比為70%的酒精、有效氯濃度為I %的次氯酸鈉溶液和0.1 %的升汞中分別浸泡0.5?Imin、4?8min和4?6min，最后用無菌水沖洗3?5次。
[0019]進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟3)中，所述消毒處理后的芽體直接接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基的固體層中誘導(dǎo)不定芽萌出，將誘導(dǎo)出的不定芽切下后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖擴(kuò)響糸ο
[0020]進(jìn)一步地，本發(fā)明在所述步驟5)中，所述的移栽是將生根后的睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗根部殘留培養(yǎng)基，然后移栽至裝有泥水的栽培槽中培養(yǎng)。
[0021]本發(fā)明的有益效果為:利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對睡蓮進(jìn)行了離體培養(yǎng)，能夠在較短時間內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致的優(yōu)質(zhì)壯苗，克服了常規(guī)繁殖方法慢的缺點，對其規(guī)模化生產(chǎn)和種質(zhì)資源保存都具有積極意義。

【具體實施方式】
[0022]下面通過【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，實施例將幫助更好地理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施例。
[0023]本發(fā)明提供了一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其步驟為:
[0024]I)、培養(yǎng)基的配制
[0025](I)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ；
[0026](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ 1.0 ?3.0mg/L+NAA 0.05 ?0.5mg/L+ 活性炭0.2 ?0.5mg/L ；
[0027](3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA 2.0 ?4.0mg/L+NAA 0.1 ?0.5mg/L ；
[0028](4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA 0.05 ?0.2mg/L+IBA 0.05 ?0.2mg/L ；
[0029]2)、外植體的選取與滅菌
[0030]挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側(cè)芽連同部分根莖組織切下，用鋒利的刀片將芽體周緣的葉片及毛絮切除并修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡20?60min，然后再用自來水沖洗干凈，接著依次在體積比為70%的酒精、有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液和0.1 %的升未中分別浸泡0.5?lmin、4?8min和4?6min，最后用無菌水沖洗3?5次；
[0031]3)、不定芽的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)
[0032]消毒處理后的芽體直接接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)I?2月后可誘導(dǎo)不定芽萌出，然后將誘導(dǎo)出的不定芽切下后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖擴(kuò)繁，增殖系數(shù)為2?3 ;培養(yǎng)溫度為23±2°C、光照強(qiáng)度為80?120 ymol.πΓ2.s—1、光照時間為8?12小時/天；
[0033]4)、生根培養(yǎng)
[0034]將增殖叢生芽在無菌條件下分割成單株后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15?25天后可生根0.5 cm左右；培養(yǎng)溫度為23±2°C、光照強(qiáng)度為40?80 μ mo I.m 2.s \光照時間為8?12小時/天；
[0035]5)、移栽
[0036]所述的移栽是將生根后的睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗根部殘留培養(yǎng)基，然后移栽至裝有泥水的栽培槽中培養(yǎng)；移栽成活率85%左右。
[0037]實施例
[0038]本發(fā)明提供了一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其步驟為:
[0039]I)、培養(yǎng)基的配制
[0040](I)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ；
[0041](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+ 活性炭 0.2mg/L ；
[0042](3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L ；
[0043](4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA 0.lmg/L+IBA 0.lmg/L ；
[0044]2)、外植體的選取與滅菌
[0045]挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側(cè)芽連同部分根莖組織切下，用鋒利的刀片將芽體周緣的葉片及毛絮切除并修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡60min，然后再用自來水沖洗干凈，接著依次在體積比為70%的酒精、有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液和0.1%的升未中分別浸泡lmin、5min和5min，最后用無菌水沖洗5次；
[0046]3)、不定芽的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)
[0047]消毒處理后的芽體直接接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)I?2月后可誘導(dǎo)不定芽萌出，然后將誘導(dǎo)出的不定芽切下后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖擴(kuò)繁，增殖系數(shù)為3左右；培養(yǎng)溫度為23±2°C、光照強(qiáng)度為40?80 μ mo I.m 2.s、光照時間為8?12小時/天；
[0048]4)、生根培養(yǎng)
[0049]將增殖叢生芽在無菌條件下分割成單株后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15?25天后可生根0.8 cm左右；培養(yǎng)溫度為23±2°C、光照強(qiáng)度為40?80 μ mo I.πΓ2.s'光照時間為12小時/天；
[0050]5)、移栽
[0051]所述的移栽是將生根后的睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗根部殘留培養(yǎng)基，然后移栽至裝有泥水的栽培槽中培養(yǎng)，移栽成活率可達(dá)90%。
[0052]最后需要說明的是，除本實施例外，本發(fā)明還可以有其它實施方式和變形，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實施例子。凡本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:該方法包括如下步驟: 1)、培養(yǎng)基的配制: (1)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ1.0?3.0mg/L+NAA 0.05?0.5mg/L+活性炭0.2?0.5mg/L ； (3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA2.0 ?4.0mg/L+NAA 0.1 ?0.5mg/L ； (4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA0.05 ?0.2mg/L+IBA 0.05 ?0.2mg/L ； 2)外植體的選取與消毒:將睡蓮根莖上的頂芽及側(cè)芽周緣修整光滑，清洗并消毒后備用； 3)不定芽的誘導(dǎo)及增殖:將步驟2)消毒處理后的芽在無菌條件下接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)I?2個月后可直接誘導(dǎo)出不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)一步進(jìn)行增殖； 4)生根培養(yǎng):將步驟3)增殖獲得的不定芽在無菌條件下切割后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15?25天后生根； 5)移栽:將步驟4)生根后睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗，然后移栽至泥水槽中栽培。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:在所述步驟I)中，所述的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分具體為: (1)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基，其上層均為無菌蒸餾水；下層為MS固體培養(yǎng)基，其中鹿糖20?30g/L，瓊脂5?9g/L，pH = 5.8 ； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+ 活性炭 0.2mg/L ； (3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L ； (4)壯苗培養(yǎng)基固體層:MS+NAA0.lmg/L+IBA 0.lmg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:在所述步驟2)中，所述的消毒處理是:挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側(cè)芽連同部分根莖組織切下，用鋒利的刀片將芽體周緣修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡中20?60min，然后再用自來水沖洗干凈，接著依次在體積比為70%的酒精、有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液和0.1%的升汞中分別浸泡0.5?lmin、4?8min和4?6min，最后用無菌水沖洗3?5次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:在所述步驟3)中，所述的不定芽的誘導(dǎo)和增殖為:將消毒處理后的芽體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基的固體層中誘導(dǎo)不定芽萌出，將誘導(dǎo)出的不定芽切下后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖。
【文檔編號】A01H4/00GK104488716SQ201410798205
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月19日
【發(fā)明者】王燕, 汪一婷, 呂永平, 牟豪杰, 陳志 , 陳劍平 申請人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院