一種杏鮑菇固體菌種液化工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】一種杏鮑菇固體菌種液化工藝，包括如下步驟：（1）液體培養(yǎng)；（2）固體培養(yǎng)；（3）粉碎；（4）稀釋?zhuān)吹?。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，接種簡(jiǎn)便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險(xiǎn)小，投資和運(yùn)行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。使用該方法制備的杏鮑菇液化菌種接種后，菌種的滲透力強(qiáng)，發(fā)菌快。而且，杏鮑菇液化菌種的栽培出菇時(shí)間大大縮短、出菇整齊、生長(zhǎng)速度快，產(chǎn)量明顯提高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】 一種杏鮑菇固體菌種液化工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種固體菌種液化工藝，尤其是涉及一種杏鮑菇固體菌種液化工藝。

【背景技術(shù)】
[0002]杏鮑菇，別名剌芹側(cè)耳，隸屬于真菌門(mén)中的擔(dān)子菌綱，是我國(guó)近年來(lái)開(kāi)發(fā)栽培成功的集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌新品種。杏鮑菇具有杏仁香味，不僅肉質(zhì)肥厚、口感鮮嫩、味道清香，而且營(yíng)養(yǎng)豐富。研究表明，杏鮑菇富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及鈣、鎂、銅等礦物質(zhì)。此外，杏鮑菇還具有降血脂、降膽固醇、促進(jìn)胃腸消化、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗癌、防止心血管病及美容等功效。杏鮑菇以其良好的口感和較長(zhǎng)的貨架期深受消費(fèi)者的青睞。
目前的杏鮑菇工廠化生產(chǎn)和菌種生產(chǎn)，主要還是采用傳統(tǒng)的三級(jí)固體菌種繁育工藝和人工接種法。但是由于菌種退化、錯(cuò)種等生產(chǎn)事故每年均有發(fā)生，杏鮑菇集約化、工廠化生產(chǎn)受到嚴(yán)重制約。而日本、韓國(guó)等食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)先進(jìn)國(guó)家，在菌種繁育領(lǐng)域已普遍采用液體菌種技術(shù)，特別是近兩年日本開(kāi)發(fā)成功了國(guó)際上最先進(jìn)的還原型液體菌種技術(shù)(又稱(chēng)第三代液體菌種)，并在我國(guó)多個(gè)省份的工廠化生產(chǎn)中進(jìn)行應(yīng)用，菌種由日方公司按時(shí)定量提供，在收取高額設(shè)備和工藝轉(zhuǎn)讓費(fèi)的同時(shí)，還按接種生產(chǎn)量收取推廣應(yīng)用費(fèi)，對(duì)我國(guó)和我省食用菌產(chǎn)業(yè)的持續(xù)、安全生產(chǎn)提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。此外，以往使用的發(fā)酵液體菌種由于含有糖分，培養(yǎng)基經(jīng)常會(huì)粘在噴嘴周?chē)?，容易造成污染，因此開(kāi)機(jī)接種半個(gè)小時(shí)左右就要停機(jī)，對(duì)噴嘴進(jìn)行清洗，影響了產(chǎn)率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種成本較低，菌菇產(chǎn)率高，工藝較簡(jiǎn)單的杏鮑菇固體菌種液化工藝。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是，一種杏鮑菇固體菌種液化工藝，包括如下步驟:
(1)液體培養(yǎng):將杏鮑菇菌種接種在液體培養(yǎng)基上，杏鮑菇菌種的接種量為相當(dāng)于液體培養(yǎng)基質(zhì)量的3-5% (裝瓶量?jī)?yōu)選250mL的培養(yǎng)瓶裝10mL),進(jìn)行液體培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23 —250C (優(yōu)選24°C )，初始pH 7-7.5，搖床轉(zhuǎn)速250 — 280r/min (優(yōu)選270r/min)，培養(yǎng)時(shí)間6-7d，得菌絲體；
所述液體培養(yǎng)基的配方:無(wú)菌水1000ml、馬鈴薯80 — 120克、紅糖12 — 18克、葡萄糖8-12克、麥麩38 - 42克、蛋白胨1.8 — 2.2克、磷酸二氫鉀1.8 — 2.2克、硫酸鎂0.8 —
2.2克、維生素BI 5 — 1mg，pH值自然；
液體培養(yǎng)基的優(yōu)選配方:無(wú)菌水1000ml、馬鈴薯100克、紅糖15克、葡萄糖10克、麥麩40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氫鉀2.0克、硫酸鎂1.0克、維生素BI 1mg, pH值自然；
(2)固體培養(yǎng):將步驟(I)所得菌絲體在麥粒培養(yǎng)基上進(jìn)行純培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-250C，培養(yǎng)20-22天，得菌絲體的菌塊； 所述麥粒培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比的原料制成:小麥96 - 98%，石膏I 一 2%，碳酸鈣1- 2% ;所述麥粒培養(yǎng)基優(yōu)選含水量50±lwt%，pH7.5 - 8.8 ；
所述麥粒培養(yǎng)基的制備方法:①稱(chēng)量小麥:用500毫升的菌種瓶時(shí)，每瓶用小麥干重0.18 - 0.22千克；用750毫升的菌種瓶時(shí)，每瓶用干小麥0.28 一 0.32千克；②漂洗:用清水將麥粒漂洗2 — 3遍，除去灰塵、麥糠等雜物，同時(shí)也減少培養(yǎng)基中雜菌的基數(shù)；③浸泡:在制種的前一天下午，用質(zhì)量濃度為0.8—1.2wt%的石灰水浸泡小麥，夏天一般浸泡10 —12小時(shí)，春秋冬季氣溫低時(shí)浸泡15 - 20小時(shí)；④煮沸:小麥撈出后在煮麥鍋內(nèi)煮沸，水沸騰后再煮18 - 22分鐘，當(dāng)麥粒達(dá)到“無(wú)白心，不開(kāi)花”的標(biāo)準(zhǔn)后及時(shí)撈出，浙干多余水分；煮麥時(shí)加水不可偏少(加水量?jī)?yōu)選為相當(dāng)于麥粒重量的110-120%)，麥粒成熟度是關(guān)系麥粒菌種制作成敗的關(guān)鍵；⑤晾曬:將麥粒攤開(kāi)，晾去表面水分，麥粒不沾手時(shí)及時(shí)收起；⑥加輔料:把石膏、碳酸鈣按比例加入，攪拌均勻；⑦裝瓶、加棉塞:麥粒裝至瓶肩即可，棉塞大小、松緊度要適宜；⑧滅菌:采用高壓鍋在0.14 - 0.16MPa (優(yōu)選0.15MPa)滅菌，滅菌過(guò)程參照母種的滅菌，不過(guò)，由于麥粒培養(yǎng)基中雜菌基數(shù)大，培養(yǎng)基體積大，熱不易穿透，控溫滅菌時(shí)間應(yīng)保持在2 — 2.5小時(shí)，才能保證滅菌徹底；滅菌是否徹底是影響制種成功率的關(guān)鍵；
⑨冷卻:滅菌結(jié)束后，自然冷卻，當(dāng)壓力回復(fù)到O時(shí)，打開(kāi)鍋蓋，利用鍋體余熱烘干棉塞，當(dāng)培養(yǎng)基溫度降低到45 - 50°C時(shí)取出，放到干凈的地方冷卻到常溫后才能接種；如果溫度很高時(shí)就取出培養(yǎng)基，瓶?jī)?nèi)麥粒上會(huì)有大量的冷凝水，對(duì)菌絲生長(zhǎng)不利；⑩將冷卻后的培養(yǎng)基移入接種室接種；
(3)粉碎:將步驟(2)所得菌絲體的菌塊采用菌塊粉碎機(jī)粉碎至40目篩以下；
粉碎優(yōu)選轉(zhuǎn)速< 2000r/min，優(yōu)選FFC — 2 3A型爪式粉碎機(jī)，卸下篩片效果不錯(cuò)，被粉碎的物料的溫升不會(huì)很高的，如效果不理想就再粉一次；
(4)稀釋:將粉碎后的菌塊經(jīng)無(wú)菌水稀釋?zhuān)詿o(wú)菌操縱取菌塊10g，放于800-1OOOmL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)，瓶?jī)?nèi)預(yù)置3-5個(gè)的玻璃珠，經(jīng)振蕩或研磨制成1: 80 — 100的均勻稀釋液，即得。
[0005]本發(fā)明所制備的液化菌種的接種培養(yǎng)工藝與液體菌種工藝相同。
[0006]液化菌種是把特殊加工的塊狀的菌絲打碎后，用無(wú)菌水稀釋而成的液體菌種。液化菌種不同于通常的發(fā)酵液體菌種，也不同于傳統(tǒng)的固體菌種。它是將利用微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)的菌絲塊進(jìn)行粉碎、稀釋后做成的菌種。有如下幾個(gè)特點(diǎn):一是使用方便，由專(zhuān)業(yè)企業(yè)生產(chǎn)濃縮菌種塊，菇廠只要把菌種稀釋攪拌即可使用，200克的菌絲塊可以接種5萬(wàn)瓶，生產(chǎn)2噸食用菌；二是可以任意選擇菌絲濃度，發(fā)菌快，培養(yǎng)與生育時(shí)間縮短。以杏鮑菇的生產(chǎn)效率為例，利用固體木屑種的生長(zhǎng)周期為55天，利用發(fā)酵液體菌種生長(zhǎng)周期為48天，而利用本發(fā)明制得的固體液化菌種生長(zhǎng)周期為42天；三是菇廠所需設(shè)備少，初期投資成本低，只需要接種機(jī)、接種罐、菌絲塊攪拌機(jī)及簡(jiǎn)易無(wú)菌箱，而且由于不需要液體發(fā)酵罐進(jìn)行深層培養(yǎng)，因此可以有效控制菌種來(lái)源的污染，能解決使用液體菌種污染率高的問(wèn)題；四是還原型液體菌種不含糖，黏度低，接種時(shí)噴射壓力低，不容易噴濺，降低污染率。
[0007]本發(fā)明制得之液化菌種屬還原型液體菌種，不含糖分，能避免培養(yǎng)基粘在噴嘴周?chē)?、造成污染這一問(wèn)題，不僅可以提高生產(chǎn)效率，而且能降低運(yùn)營(yíng)成本。本發(fā)明之液化菌種的制備方法也適用于其他菇種。
[0008]杏鮑菇液化菌種接種與常規(guī)固體菌種接種工藝相比，優(yōu)勢(shì)顯著:一是菌種用種量節(jié)省90% ;二是節(jié)約接種環(huán)節(jié)成本78.2% ;三是提高接種成品率20% ;四是能提高杏鮑菇品質(zhì)；五是發(fā)菌迅速，出菇比較整齊，固體接種工廠化要28天才能滿(mǎn)瓶，液化接種只要24天就能滿(mǎn)瓶；利用固體木屑種的生長(zhǎng)周期為55天，利用發(fā)酵液體菌種生長(zhǎng)周期為48天，而利用本發(fā)明制得的固體液化菌種生長(zhǎng)周期為42天，能大大縮短生長(zhǎng)周期，提高經(jīng)濟(jì)效益；三是從目前的產(chǎn)量來(lái)看，固體菌種接種平均每1100毫升的單瓶產(chǎn)量是150克，而液化菌種接種平均每1100毫升的單瓶產(chǎn)量可高達(dá)200克，總產(chǎn)提高34%。
[0009]本發(fā)明所用設(shè)備，與日本開(kāi)發(fā)出的還原型液體菌種技術(shù)所需的全套設(shè)備相比，企業(yè)應(yīng)用所耗費(fèi)用只占設(shè)備總值200余萬(wàn)元的十分之一，而結(jié)果卻有異曲同工之效。
[0010]本發(fā)明所得液化菌種菌絲含量高，菌種培養(yǎng)時(shí)間短(原來(lái)的固體菌種的菌種培養(yǎng)時(shí)間為28天，本發(fā)明液化菌種的菌種培養(yǎng)時(shí)間為24天)，設(shè)備投資少，成本低。
[0011]本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，接種簡(jiǎn)便，發(fā)菌快，出菇早，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，效率高，污染風(fēng)險(xiǎn)小，投資和運(yùn)行成本低，經(jīng)濟(jì)效益好。使用該方法制備的杏鮑菇液化菌種接種后，菌種的滲透力強(qiáng)，發(fā)菌快。而且，杏鮑菇液化菌種的栽培出菇時(shí)間大大縮短、出菇整齊、生長(zhǎng)速度快，產(chǎn)量明顯提聞。

【具體實(shí)施方式】
[0012]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0013]實(shí)施例1
本實(shí)施例包括以下步驟:
(1)液體培養(yǎng):將杏鮑菇菌種接種在液體培養(yǎng)基上，杏鮑菇菌種的接種量為相當(dāng)于液體培養(yǎng)基質(zhì)量的4% (裝瓶量為250mL的培養(yǎng)瓶裝10mL),進(jìn)行液體培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24°C，初始pH7-7.5，搖床轉(zhuǎn)速270r/min，培養(yǎng)時(shí)間6d，得菌絲體；
所述液體培養(yǎng)基的配方:無(wú)菌水1000ml、馬鈴薯100克、紅糖15克、葡萄糖10克、麥麩40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氫鉀2.0克、硫酸鎂1.0克、維生素BI 1mg, pH值自然；
(2)固體培養(yǎng):將步驟(I)所得菌絲體在麥粒培養(yǎng)基上進(jìn)行純培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24°C，培養(yǎng)22天，得菌絲體的菌塊；
所述麥粒培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比的原料制成:小麥98%，石膏1%，碳酸鈣1% ;含水量50±lwt%，ρΗ8.0 ；
所述麥粒培養(yǎng)基的制備方法:①稱(chēng)量小麥:用500毫升的菌種瓶，每瓶用小麥干重0.2千克；②漂洗:用清水將麥粒漂洗3遍，除去灰塵、麥糠等雜物，同時(shí)也減少培養(yǎng)基中雜菌的基數(shù)；③浸泡:在制種的前一天下午，用質(zhì)量濃度為1.0wt %的石灰水浸泡小麥，夏天浸泡12小時(shí)，春秋冬季氣溫低時(shí)浸泡20小時(shí)；④煮沸:小麥撈出后在煮麥鍋內(nèi)煮沸，水沸騰后再煮20分鐘，當(dāng)麥粒達(dá)到“無(wú)白心，不開(kāi)花”的標(biāo)準(zhǔn)后及時(shí)撈出，浙干多余水分；煮麥時(shí)加水量為相當(dāng)于麥粒重量的1.2倍；⑤晾曬:將麥粒攤開(kāi)，晾去表面水分，麥粒不沾手時(shí)及時(shí)收起；⑥加輔料:把石膏、碳酸鈣按比例加入，攪拌均勻；⑦裝瓶、加棉塞:麥粒裝至瓶肩即可，棉塞大小、松緊度要適宜；⑧滅菌:采用高壓鍋在0.15MPa滅菌，滅菌過(guò)程參照母種的滅菌(現(xiàn)有技術(shù))，由于麥粒培養(yǎng)基中雜菌基數(shù)大，培養(yǎng)基體積大，熱不易穿透，控溫滅菌時(shí)間2.5小時(shí)，保證滅菌徹底；⑨冷卻:滅菌結(jié)束后，自然冷卻，當(dāng)壓力回復(fù)到O時(shí)，打開(kāi)鍋蓋，利用鍋體余熱烘干棉塞，當(dāng)培養(yǎng)基溫度降低到50°C時(shí)取出，放到干凈的地方冷卻到常溫后才能接種；⑩將冷卻后的培養(yǎng)基移入接種室接種；
(3)粉碎:將步驟(2)所得菌絲體的菌塊采用FFC— 2 3A型爪式菌塊粉碎機(jī)粉碎至40目篩以下，粉碎轉(zhuǎn)速為1800r/min ；
(4)稀釋:將粉碎后的菌塊經(jīng)無(wú)菌水稀釋?zhuān)詿o(wú)菌操縱取菌塊10g，放于100mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)，瓶?jī)?nèi)預(yù)置5個(gè)玻璃珠，經(jīng)振蕩或研磨制成1: 100的均勻稀釋液，即得。
[0014]本實(shí)施例所制備的的液化菌種的接種培養(yǎng)工藝與液體菌種工藝相同。
[0015]本實(shí)施例中，200克的菌絲塊可以接種5萬(wàn)瓶，生產(chǎn)2噸食用菌；利用本發(fā)明制得的固體液化菌種24天就能滿(mǎn)瓶，生長(zhǎng)周期為42天，出菇比較整齊；杏鮑菇整齊，菇形好；固體菌種接種平均每1100毫升的單瓶產(chǎn)量是150克，而液化菌種接種平均每1100毫升的單瓶產(chǎn)量可高達(dá)200克，總產(chǎn)提高34%。
【權(quán)利要求】
1.一種杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，包括如下步驟: (1)液體培養(yǎng):將杏鮑菇菌種接種在液體培養(yǎng)基上，杏鮑菇菌種的接種量為相當(dāng)于液體培養(yǎng)基質(zhì)量的3-5%，進(jìn)行液體培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23 — 25°C，初始pH 7-7.5，搖床轉(zhuǎn)速250 —280r/min，培養(yǎng)時(shí)間6_7d，得菌絲體； 所述液體培養(yǎng)基的配方:無(wú)菌水1000ml、馬鈴薯80 — 120克、紅糖12 — 18克、葡萄糖8-12克、麥麩38 - 42克、蛋白胨1.8 — 2.2克、磷酸二氫鉀1.8 — 2.2克、硫酸鎂0.8 —2.2克、維生素BI 5 — 1mg，pH值自然； (2)固體培養(yǎng):將步驟(I)所得菌絲體在麥粒培養(yǎng)基上進(jìn)行純培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-250C，培養(yǎng)20-22天，得菌絲體的菌塊； 所述麥粒培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比的原料制成:小麥96 - 98%，石膏I 一 2%，碳酸鈣1- 2% ； 所述麥粒培養(yǎng)基的制備方法:①稱(chēng)量小麥:用500毫升的菌種瓶時(shí)，每瓶用小麥干重0.18 - 0.22千克；用750毫升的菌種瓶時(shí)，每瓶用干小麥0.28 一 0.32千克；②漂洗:用清水將麥粒漂洗2 — 3遍；③浸泡:在制種的前一天下午，用質(zhì)量濃度為0.8 — 1.2?〖％的石灰水浸泡小麥，夏天浸泡10 - 12小時(shí)，春秋冬季氣溫低時(shí)浸泡15 - 20小時(shí)；④煮沸:小麥撈出后在煮麥鍋內(nèi)煮沸，水沸騰后再煮18 - 22分鐘，當(dāng)麥粒達(dá)到“無(wú)白心，不開(kāi)花”的標(biāo)準(zhǔn)后及時(shí)撈出，浙干多余水分；⑤晾曬:將麥粒攤開(kāi)，晾去表面水分，麥粒不沾手時(shí)及時(shí)收起；⑥加輔料:把石膏、碳酸鈣按比例加入，攪拌均勻；⑦裝瓶、加棉塞:麥粒裝至瓶肩即可滅菌:采用高壓鍋在0.14 - 0.16MPa滅菌，控溫滅菌時(shí)間保持在2 — 2.5小時(shí)；⑨冷卻:滅菌結(jié)束后，自然冷卻，當(dāng)壓力回復(fù)到O時(shí)，打開(kāi)鍋蓋，利用鍋體余熱烘干棉塞，當(dāng)培養(yǎng)基溫度降低到45 - 50°C時(shí)取出，放到干凈的地方冷卻到常溫后才能接種；⑩將冷卻后的培養(yǎng)基移入接種室接種； (3)粉碎:將步驟(2)所得菌絲體的菌塊采用菌塊粉碎機(jī)粉碎至40目篩以下； (4)稀釋:將粉碎后的菌塊經(jīng)無(wú)菌水稀釋?zhuān)詿o(wú)菌操縱取菌塊10g，放于800-1OOOmL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)，瓶?jī)?nèi)預(yù)置3-5個(gè)的玻璃珠，經(jīng)振蕩或研磨制成1: 80 — 100的均勻稀釋液，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(I)中，液體培養(yǎng)時(shí)液體培養(yǎng)基的裝瓶量為250mL的培養(yǎng)瓶裝100mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(I)中，培養(yǎng)溫度為24 °C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(I)中，搖床轉(zhuǎn)速為270r/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(I)中，液體培養(yǎng)基的配方:無(wú)菌水1000ml、馬鈴薯100克、紅糖15克、葡萄糖10克、麥麩40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氫鉀2.0克、硫酸鎂1.0克、維生素BI 10mg，pH值自然。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(2)中，煮麥時(shí)加水量為相當(dāng)于麥粒重量的110-120%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(2)中，采用高壓鍋在0.15MPa滅菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(3)中，粉碎轉(zhuǎn)速< 2000r/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(3)中，粉碎選用FFC — 2 3A型爪式粉碎機(jī)，卸下篩片。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杏鮑菇固體菌種液化工藝，其特征在于，步驟(2)中，所述麥粒培養(yǎng)基含水量50±lwt%，pH7.5 — 8.8。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104272978SQ201410595946
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】夏志蘭, 陽(yáng)國(guó)秀, 沈凡超, 易恢滿(mǎn), 沈檢生 申請(qǐng)人:湖南省宇秀生物科技有限公司