一種以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法
【專利摘要】一種以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法，包括以下步驟：（1）篩選蟲草菌菌株；（2）準(zhǔn)備蚯蚓：收集活蚯蚓，用于培育蛹蟲草子實體，晾干作宿主；（3）制作菌懸液：將出發(fā)菌株接種于PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，并接種于一種液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，得到菌懸液；（4）接種：在無菌操作臺內(nèi)，吸取菌懸液注入宿主尾部或口器；（5）子座的培育：將接種蚯蚓放于無菌的玻璃瓶中，保護至其僵硬；然后將僵硬的蚯蚓置于自然光照的無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)，得到成熟子座；（6）收集保存蟲草：將成熟子座收集烘干，置陰涼干燥處密封保存。該方法所得蛹蟲草口感獨特，營養(yǎng)價值高，具有很好的保健功能，可以適合各年齡階段人群；同時顯著提高蚯蚓的附加值。
【專利說明】一種以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法，屬于藥用菌栽培技術(shù)領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草是我國的一種名貴中藥，由于它需要特殊的生長條件，生長期較長，因而 在自然界中的數(shù)量十分稀少，目前市場價格達(dá)到每千克4萬元左右。冬蟲夏草列為國家二 級保護物種，各地政府也出臺政策禁挖、限挖，但對冬蟲夏草的采挖并未得到遏制。蛹蟲草 是名貴的中藥材，是冬蟲夏草很好的替代品，具有很高的滋補保健價值和藥用價值，而且蛹 蟲草和冬蟲夏草在生物分類上同屬于子囊菌綱肉座菌目麥角菌科蟲草屬。
[0003] 冬蟲夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲而形成，但現(xiàn)如今大部分蛹蟲草都是利用大米 粉等廉價培養(yǎng)基培育，如中國專利文獻CN102428830A公開的《蛹蟲草人工栽培技術(shù)》， CN103044119A公開的《一種蛹蟲草培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用》，CN103503689A公開的《一 種利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養(yǎng)基》，CN103539498A公開的《一種蛹蟲草培養(yǎng)基及其 應(yīng)用》等，但是這些技術(shù)不能很好的模擬冬蟲夏草菌的實際生長環(huán)境，所得蟲草營養(yǎng)成份有 限。
[0004] 所以，很多學(xué)者嘗試采用黃粉蟲和雞蛋等培養(yǎng)基來培育蛹蟲草，所得的蛹蟲草和 冬蟲夏草藥化成分及藥理功能都非常相近。如CN102907256B公開的《一種柞蠶蛹蟲草盒式 培養(yǎng)方法》，包括蠶蛹清洗、消毒、接種、蟲草培養(yǎng)，菌種用PDA液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基高溫 滅菌接種后搖床23°C左右培養(yǎng)至培養(yǎng)液較粘稠并有菌球出現(xiàn)，培養(yǎng)好的液體菌種過濾至無 菌瓶內(nèi)，菌球用菌液體積〇. 5-1倍的無菌水沖洗2-3次，整個過程無菌操作。接種時用注射 器吸取菌液，從蠶蛹尾部數(shù)第二節(jié)處注射；接種后單層擺放于消過毒的培養(yǎng)室內(nèi)，接種處變 干結(jié)痂，轉(zhuǎn)移到滅過菌的塑料盒內(nèi)培養(yǎng)，至尾部僵化變硬、環(huán)節(jié)處有菌絲出現(xiàn)時擺放在有通 氣孔盒內(nèi)，保持溫、濕度，直至長出蛹蟲草，采收，烘干。該方法溫、濕度易控制、調(diào)節(jié)，能充分 光照，易采收，蟲草培養(yǎng)時間短、操作方便、出草整齊，成功率高達(dá)95%以上，蟲草商品性好。
[0005] 蚯蝴，中藥稱地龍，其味咸性寒，功能為清熱、鎮(zhèn)痙、止喘、利尿。主治高熱狂躁、 驚風(fēng)抽搐、頭痛目赤、喘息痰熱、中風(fēng)、半身不遂等病證。地龍?zhí)崛∫河辛己玫亩绕酱?的作用。蚯蚓灰與玫瑰油混合能治禿發(fā)。蚯蚓也具有很好的營養(yǎng)價值，據(jù)測定，蚯蚓的 蛋白質(zhì)含量約占干重的53. 5 % -65. 1 %，脂肪含量約為4. 4 % -17. 38 %，碳水化合物約 為11 % -17. 4%，水分7. 8% -23%。蚯蚓體內(nèi)還含有豐富的維生素 D(約占鮮體重的 0· 04% -0· 073% )，以及鈣和磷（約占鮮體重的0· 124% -0· 188% )等礦物質(zhì)元素。蚯蚓 體內(nèi)含有地龍素、地龍解毒素、黃嘌呤、抗組織胺和維生素 B等多種藥用成分。鑒于以上蚯 蚓藥食兩用的特點，本發(fā)明首次嘗試采用蚯蚓為載體培育蛹蟲草。
[0006] CN101205519公開了一種《以地鱉蟲為培養(yǎng)基培育蛹蟲草的方法》，把地鱉蟲進行 粉碎與蠶蛹粉混合，配比為地鱉蟲粉50 - 100 %，蠶蛹粉0 - 50 %，加水為1 : 1.2 - 1.4， 混合后裝入容器，滅菌，接入蛹蟲草菌種在一定的溫度濕度等條件下，培養(yǎng)長出蛹蟲草子實 體。地鱉蟲的營養(yǎng)成份，與蠶蛹相似，但地鱉蟲含有許多藥用成份，這就使培育出的地鱉蟲 蛹蟲草，不但具有蛹蟲草的藥效同時具有地鱉蟲的藥效。
[0007] 蚯蚓與地鱉蟲特性不同，以地鱉蟲為培養(yǎng)基培育蛹蟲草的方法不能適用于以蚯蚓 為載體的蛹蟲草培養(yǎng)。目前，尚未有記載以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的文獻。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明針對現(xiàn)有蛹蟲草培養(yǎng)技術(shù)存在的不足以及尚沒有以蚯蚓為載體培育蛹蟲 草的問題，提供一種能夠制備成本低廉的蚯蚓蛹蟲草的以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方 法，所得蚯蚓蛹蟲草口感獨特、營養(yǎng)豐富、保健功能強。
[0009] 本發(fā)明的以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法，包括以下步驟：
[0010] (1)篩選蟲草菌菌株：在20-23°C以及相對濕度65%的條件下，將蛹蟲草菌株（任 何蛹蟲草均可以）接種于一種平板培養(yǎng)基上，該平板培養(yǎng)基的配方是蚯蚓粉末20g-40g、葡 萄糖20g-40g和瓊脂15g-20g，三者加水混合至體積1000mL，pH值自然，密封121°C滅菌20 分鐘，待菌絲體長滿平板，反復(fù)篩選直至獲得子座長度最長且性狀穩(wěn)定的蛹蟲草純菌株，以 篩選的上述菌株作為出發(fā)菌株；
[0011] (2)準(zhǔn)備蚯蚓：收集活蚯蝴，用于培育蛹蟲草子實體；在無菌操作臺內(nèi)，將活蚯蚓 用75%酒精消毒8分鐘-10分鐘，用無菌水沖洗5-6次，晾干作宿主；
[0012] (3)制作菌懸液：將出發(fā)菌株接種于PDA培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂 培養(yǎng)基的簡稱）平板上，置于20°C下培養(yǎng)，待長滿菌絲后，挑取一塊菌塊（面積3cm 2-4cm2) 接種于一種液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)4-5天，得到菌懸液；所述液體培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯 150g-300g，葡萄糖20g-40g，加水混合至體積IOOOmL, pH值自然；
[0013] 上述液體培養(yǎng)基的制備過程是：馬鈴薯洗凈去皮切成塊,加水IOOOml加熱至沸 騰，維持20分鐘-30分鐘，用紗布趁熱過濾，濾渣棄取，加熱濾液，加入葡萄糖，攪拌均勻，冷 卻后再加水至體積1000毫升，密封121°C滅菌20分鐘-25分鐘，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?br> [0014] (4)接種：在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入宿主尾部或口器，每只 蚯蚓的注入量為0. 1毫升-0. 15毫升，注射深度為0. 1厘米-0. 2厘米；
[0015] (5)子座的培育：將接種蚯蚓放于無菌的玻璃瓶中，20°C下保護至其僵硬；然后將 僵硬的蚯蚓置于15-25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)4周， 得到成熟子座；
[0016] (6)收集保存蟲草：將成熟子座收集，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥 處密封保存。
[0017] 本發(fā)明用蛹蟲草菌株制備菌懸液接種到活體蚯蚓上經(jīng)人工培育而成蚯蚓蛹蟲草， 所得蛹蟲草口感獨特，營養(yǎng)價值高，具有很好的保健功能，可以適合各年齡階段人群；同時 顯著提高蚯蚓的附加值，為蚯蚓產(chǎn)品深加工提供一條新的途徑。
[0018] 本發(fā)明具有以下特點：
[0019] 1.獨創(chuàng)性的選擇具有藥食兩用的蚯蚓為載體來生產(chǎn)新型蛹蟲草；
[0020] 2.蚯蚓作為人類食物有很長的食用歷史，所以，利用蚯蚓來生產(chǎn)蛹蟲草，它的食品 安全性更高；
[0021] 3.豐富了現(xiàn)有蛹蟲草的品種，所得蚯蚓蛹蟲草口味獨特，很好的改善了傳統(tǒng)蛹蟲 草口味差的技術(shù)難題；
[0022] 4.蚯蚓具有抗腫瘤作用，蚯蝴提取液中含有一些蛋白類物質(zhì)，DNA、RNA、糖、維生素 和微量元素等成分對抑制腫瘤的生長和提高細(xì)胞免疫功能有明顯的效果；利用蚯蚓為培養(yǎng) 基生產(chǎn)蛹蟲草，則更加強化了蛹蟲草的抗腫瘤和提高細(xì)胞免疫功能的效果。

【具體實施方式】
[0023] 實施例1
[0024] (1)篩選蟲草菌菌株：在20_23°C以及相對濕度65%的條件下，將蛹蟲草菌株（任 何蛹蟲草均可以）接種于一種平板培養(yǎng)基上，該平板培養(yǎng)基的配方是虹蝴粉末（20-100 目）20g、葡萄糖30g和瓊脂15g，三者加水混合至體積lOOOmL，pH值自然，密封121°C滅菌 20分鐘，待菌絲體長滿平板，反復(fù)篩選直至獲得子座長度最長且性狀穩(wěn)定的蛹蟲草純菌株， 以篩選的上述菌株作為出發(fā)菌株；
[0025] (2)準(zhǔn)備蚯蝴：收集活蚯蚓，用于培育蛹蟲草子實體；在無菌操作臺內(nèi)，將活蚯蚓 用75%酒精消毒8分鐘，用無菌水沖洗5次，晾干作宿主；
[0026] (3)制作菌懸液：將出發(fā)菌株接種于PDA培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂 培養(yǎng)基的簡稱）平板上，置于20°C下培養(yǎng)，待長滿菌絲后，挑取一塊菌塊（面積3cm 2-4cm2) 接種于一種液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)5天，得到菌懸液；
[0027] 所述液體培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯150g，葡萄糖30g，加水混合至體積IOOOmL, pH值 自然；制備過程是：馬鈴薯洗凈去皮切成塊，加水IOOOml加熱至沸騰，維持20分鐘，用紗布 趁熱過濾，濾渣棄取，加熱濾液，加入葡萄糖，攪拌均勻，冷卻后再加水至體積1000毫升，密 封121°C滅菌20分鐘，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?br> [0028] (4)接種：在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入宿主尾部或口器，每只 蚯蚓的注入量為0. 1毫升，注射深度為0. 1厘米；
[0029] (5)子座的培育：將接種蚯蚓放于無菌的玻璃瓶中，20°C下保護至其僵硬；然后將 僵硬的蚯蚓置于15°C、空氣相對濕度為85%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)4周，得到成 熟子座；
[0030] (6)蟲草的收集保存：將成熟子座收集，放在60°C環(huán)境下烘干3小時，置陰涼干燥 處密封保存。
[0031] 對本發(fā)明制得的蚯蚓蛹蟲草的活性成份含量進行檢測，并與市售、利用大米粉等 廉價培養(yǎng)基培育的蛹蟲草進行比較，見下表：

【權(quán)利要求】
1. 一種以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 篩選蟲草菌菌株：在20-23°C以及相對濕度65%的條件下，將蛹蟲草菌株接種于 一種平板培養(yǎng)基上，該平板培養(yǎng)基的配方是纟丘蝴粉末20g-40g、葡萄糖20g-40g和瓊脂 15g-20g，三者加水混合至體積lOOOmL，pH值自然，待菌絲體長滿平板，反復(fù)篩選直至獲得 子座長度最長且性狀穩(wěn)定的蛹蟲草純菌株，以篩選的上述菌株作為出發(fā)菌株； (2) 準(zhǔn)備蚯蝴：收集活蚯蚓，用于培育蛹蟲草子實體；在無菌操作臺內(nèi)，將活蚯蚓用 75%酒精消毒8分鐘-10分鐘，用無菌水沖洗5-6次，晾干作宿主； (3) 制作菌懸液：將出發(fā)菌株接種于PDA培養(yǎng)基平板上，置于20°C下培養(yǎng)，待長滿菌絲 后，挑取一塊菌塊接種于一種液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)4-5天，得到菌懸液；所述液體培養(yǎng) 基的配方為馬鈴薯150g-300g，葡萄糖20g-40g，加水至體積IOOOmL, pH值自然； (4) 接種：在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入宿主尾部或口器，每只蚯蚓 的注入量為0. 1毫升-0. 15毫升，注射深度為0. 1厘米-0. 2厘米； (5) 子座的培育：將接種蚯蚓放于無菌的玻璃瓶中，20°C下保護至其僵硬；然后將僵硬 的蚯蚓置于15-25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)4周，得到 成熟子座； (6) 收集保存蟲草：將成熟子座收集，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥處密 封保存。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法，其特征在于，所述步驟 (3)中液體培養(yǎng)基的制備過程是：馬鈴薯洗凈去皮切成塊，加水IOOOml加熱至沸騰，維持20 分鐘-30分鐘，用紗布趁熱過濾，濾渣棄取，加熱濾液，加入葡萄糖，攪拌均勻，冷卻后再加 水至體積1000毫升，密封121°C滅菌20分鐘-25分鐘，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?br> 3. -種用權(quán)利要求1所述以蚯蚓為載體培養(yǎng)人工蛹蟲草的方法制備的蚯蚓蛹蟲草產(chǎn) 品。
【文檔編號】A01G1/04GK104322272SQ201410443623
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月2日
【發(fā)明者】張超, 陳文兵, 武道吉, 張桂芹, 馬永山, 祁峰, 趙海濤 申請人:山東建筑大學(xué)