一種生物源混合殺菌劑的制備方法
【專利摘要】一種生物源混合殺菌劑的制備方法，按以下步驟：(1)黑木耳子實體干粉與水按重量比l:40-50混均，70-100℃水浴中抽提2-5h，過濾，10000rpm離心20-50min，離心液用70％乙醇醇析，8000-12000rpm離心30min，收集沉淀后干燥獲黑木耳穩(wěn)定劑；(2)香菇子實體干粉與水按重量比1:15-30混均，4℃浸提3-5h，10000rpm離心25min，上清液用40%-60%飽和度的硫酸銨沉淀，4℃冰箱中靜置12h，10000-12000rpm離心15-30min，沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析20-24h，收集透析液真空干燥后獲香菇殺菌劑；(3)將黑木耳穩(wěn)定劑與香菇殺菌劑按重量比1:8-12混均，再與水按重量比1:30-40混均，得到混合殺菌劑。本發(fā)明工藝簡單，可控行強，對西瓜炭疽和辣椒疫霉菌絲生長抑制率分別為53.55-78.62%和80.43-95.71%，藥效持續(xù)14-20天和8-12天。
【專利說明】一種生物源混合殺菌劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于自然資源中生物農(nóng)藥的提取，特別涉及殺菌劑的提取。
技術(shù)背景
[0002]西瓜是中國傳統(tǒng)夏季消暑解渴佳品，西瓜炭疽{CoIletotrichum orbiculare Arx)和辣椒疫霉(Phytophthora capsici)兩種病原真菌都能侵染西瓜而直接影響其產(chǎn)量和質(zhì)量，而且病菌侵染后潛伏期短，發(fā)病快，防治十分困難。為了有效控制這些病的危害，目前使用最多的還是化學(xué)防治方法。由于病原菌極易對殺菌劑產(chǎn)生抗藥性，化學(xué)防治的效果常常因為病菌抗藥性的提高而大大降低。而且大量化學(xué)農(nóng)藥的使用，給生態(tài)，農(nóng)業(yè)和環(huán)境帶來了很大的消極影響。
[0003]使用微生物或動植物制成的生物抑制劑是控制植物有害真菌更為安全和有效的方法之一，國內(nèi)外研究者對此進行了大量的研究，并獲得多種具開發(fā)潛力的提取物。在20世紀(jì)的60、70年代，日本學(xué)者對食用菌提取物的植物病菌抑制活性進行了廣泛的研究，并于70、80年代陸續(xù)分離了一些有抑菌活性的活性物質(zhì)，有些已用于生產(chǎn)實際中。由于天然抗真菌活性物質(zhì)在實踐中存在藥效不穩(wěn)，容易喪失活性等問題，限制了這些生物農(nóng)藥的進一步開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目地是針對西瓜上的兩種病原真菌，提供一種獲得混合殺菌劑的方法。能有效地解決環(huán)保和藥效穩(wěn)定性這兩個問題。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0006]本發(fā)明所述的制備方法，按以下步驟。
[0007](I)黑木耳子實體干粉與水按重量比1:40-50的比例混均，在70-100 °C水浴中抽提2-5h,紗布進行初步過濾，1000rpm離心20_50min,離心液用70 %乙醇醇析，8000-12000rpm離心30min，收集沉淀后干燥獲得黑木耳穩(wěn)定劑。
[0008](2)香菇子實體干粉與水按重量比1:15-30的比例混均，4°C浸提3_5h，1000rpm離心25min，收集上清液，上清液用40%_60%飽和度的硫酸銨((NH4)2SO4)沉淀，4°C冰箱中靜置12h，10000-12000rpm離心15_30min，將沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析20_24h，收
集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑。
[0009](3)將步驟(1)和步驟(2)的黑木耳穩(wěn)定劑與香菇殺菌劑按重量比1:8-12的比例混均后，再與水按重量比1:30-40的比例混均，得到混合殺菌劑。
[0010]本發(fā)明采用生長速率法檢測殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用?；旌蠚⒕鷦ξ鞴咸烤液屠苯芬呙咕z生長抑制率達87.85-100%，藥效持續(xù)時間達15-30天。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)選條件是按以下步驟。
[0012](I)黑木耳子實體干粉與水按重量比1:40的比例混均，在80°C水浴中抽提4h，紗布進行初步過濾，1000rpm離心20min,離心液用70%乙醇醇析，1000rpm離心30min,收集沉淀后干燥獲得黑木耳穩(wěn)定劑。
[0013](2)香菇子實體干粉與水按重量比1:20的比例混均，4°C浸提4h，1000rpm離心25min,收集上清液，上清液用40%_60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，12000rpm離心25min，將沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析24h，收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑。
[0014](3)將步驟(1)和步驟(2)的黑木耳穩(wěn)定劑與香菇殺菌劑按重量比1:9的比例混均后，再與水按重量比1:33的比例混均，得到混合殺菌劑。
[0015]本發(fā)明工藝簡單，可控行強，對西瓜炭疽和辣椒疫霉菌絲生長抑制率分別為53.55-78.62%和80.43-95.71%，藥效持續(xù)時間為14-20天和8-12天。所制備的混合殺菌劑可用于生物農(nóng)藥開發(fā)。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明將通過以下實施例作進一步說明。
[0017]實施例1。
[0018]黑木耳子實體干粉與水之重量比為1: 50，在100°C水浴中抽提3h，紗布進行初步過濾，1000rpm離心40min，離心液用70%乙醇醇析，12000rpm離心30min，收集沉淀后干燥
獲得黑木耳穩(wěn)定劑。 [0019]香菇子實體干粉與水之重量比為1:15，41:浸提511，10000印111離心251^11，收集上清液，上清液用40%-60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，1000rpm離心30min，將沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析20h，收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑。
[0020]黑木耳穩(wěn)定劑和香菇殺菌劑粉末按1:8的重量比混合后與水之重量比為1:30得到混合殺菌劑。
[0021]采用生長速率法檢測殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用?；旌蠚⒕鷦ξ鞴咸烤液屠苯芬呙咕z生長抑制率達94.64%，藥效持續(xù)時間達28天。
[0022]實施例2。
[0023]黑木耳子實體干粉與水之重量比為1:40，在701:水浴中抽提2h，紗布進行初步過濾，1000rpm離心20min,離心液用70%乙醇醇析，1000rpm離心30min,收集沉淀后干燥獲
得黑木耳穩(wěn)定劑。
[0024]香菇子實體干粉與水之重量比為1:30，41:浸提511，10000印111離心251^11，收集上清液，上清液用40%-60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，1000rpm離心20min，將沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析20h，收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑。
[0025]黑木耳穩(wěn)定劑和香菇殺菌劑粉末按1:12的重量比混合后與水之重量比為1:35得到混合殺菌劑。
[0026]采用生長速率法檢測殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用?；旌蠚⒕鷦ξ鞴咸烤液屠苯芬呙咕z生長抑制率達90.25%，藥效持續(xù)時間達23天。
[0027]實施例3。
[0028]黑木耳子實體干粉與水之重量比為1:45，在801:水浴中抽提5h，紗布進行初步過濾，1000rpm離心50min,離心液用70%乙醇醇析,8000rpm離心30min,收集沉淀后干燥獲
得黑木耳穩(wěn)定劑。[0029]香菇子實體干粉與水之重量比為1:20，41:浸提311，10000印111離心251^11，收集上清液，上清液用40%-60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，12000rpm離心15min，將沉淀收集后放透析袋中用蒸餾水透析24h，收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑。
[0030]黑木耳穩(wěn)定劑和香菇殺菌劑粉末按1:10的重量比混合后與水之重量比為1:40得到混合殺菌劑。
[0031]采用生長速率法檢測殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用?；旌蠚⒕鷦ξ鞴咸烤液屠苯芬呙咕z生長抑制率達92.46%，藥效持續(xù)時間達27天。
【權(quán)利要求】
1.一種生物源混合殺菌劑的制備方法，其特征是按以下步驟: (1)黑木耳子實體干粉與水按重量比1:40-50的比例混均，在70-100°C水浴中抽提2-5h,紗布進行初步過濾，1000rpm離心20-50min,離心液用70 %乙醇醇析，8000-12000rpm離心30min，收集沉淀后干燥獲得黑木耳穩(wěn)定劑； (2)香菇子實體干粉與水按重量比1:15-30的比例混均，4°C浸提3-5h，1000rpm離心25min，收集上清液，上清液用40%_60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，10000-12000rpm離心15_30min,將沉淀收集后放透析袋中用蒸懼水透析20_24h,收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑； (3)將步驟(1)和步驟(2)的黑木耳穩(wěn)定劑與香菇殺菌劑按重量比1:8-12的比例混均后，再與水按重量比1:30-40的比例混均，得到混合殺菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是按以下步驟: Cl)黑木耳子實體干粉與水按重量比1:40的比例混均，在80°C水浴中抽提4h，紗布進行初步過濾，1000rpm離心20min,離心液用70%乙醇醇析，1000rpm離心30min,收集沉淀后干燥獲得黑木耳穩(wěn)定劑； (2)香菇子實體干粉與水按重量比1:20的比例混均，4°C浸提4h，1000rpm離心25min，收集上清液，上清液用40%-60%飽和度的硫酸銨沉淀，4°C冰箱中靜置12h，12000rpm離心25min，將沉淀收集 后放透析袋中用蒸餾水透析24h，收集透析液真空干燥后獲得香菇殺菌劑； (3)將步驟(1)和步驟(2)的黑木耳穩(wěn)定劑與香菇殺菌劑按重量比1:9的比例混均后，再與水按重量比1:33的比例混均，得到混合殺菌劑。
【文檔編號】A01P3/00GK104026155SQ201410295505
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】吳麗萍, 陳來, 李恒, 段元丹, 徐爾尼, 劉文群 申請人:南昌大學(xué)