一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：（1）外植體表面滅菌前處理；（2）外植體表面滅菌與初代培養(yǎng)；（3）繼代增殖培養(yǎng)；（4）壯苗培養(yǎng)；（5）生根培養(yǎng)；（6）苗的馴化和移栽。本發(fā)明所述的方法能夠有效克服鐵線蓮維奧利特·伊利莎白現(xiàn)有繁殖技術存在的缺陷，加快了繁殖速度，增加了繁殖系數(shù)，實現(xiàn)了鐵線蓮的快速繁殖，對于其在園林上的廣泛應用和推廣具有較強的價值。
【專利說明】一種鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白的組織培養(yǎng)方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及的是一種鐵線蓮栽培品種"維奧利特.伊利莎白"的組織培養(yǎng)方法，屬 于植物組織培養(yǎng)【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 維奧利特?伊利莎白（英文商品名為：Clematis 'Violet Elizabeth'）屬鐵線蓮 屬植物。鐵線蓮屬（Clematis L.)隸屬于毛茛科（Ranunculaceae)，為常綠或落葉藤本，罕 直立灌木或宿根草本，是世界著名的觀賞植物。共約355種，廣布全球；我國有147種，全國 各地都有分布，尤以西南地區(qū)種類較多；江蘇省野生12種，5變種及1變型。
[0003] 鐵線蓮為毛茛科鐵線蓮屬植物的通稱，是一種兼具園藝及藥用雙重效用的重要植 物資源，靠葉柄纏繞攀援生長，莖棕紅色似鐵絲，其萼片花瓣狀，色彩豐富，花開如蓮，故得 名鐵線蓮。其生長適應性強，園林用途廣泛，觀賞價值高，在垂直綠化中具有十分重要的地 位，并號稱"攀援皇后"。
[0004] 野生種常進行種子繁殖，但種子較難發(fā)芽。栽培品種"維奧利特?伊利莎白"為雜 交種，為保持其種的特性，常進行扦插繁殖。為加快繁殖速度，增加繁殖系數(shù)，采用組織培養(yǎng) 的方法進行鐵線蓮"維奧利特.伊利莎白"的快速繁殖，對于"維奧利特.伊利莎白"在園 林上廣泛應用推廣具有較強的價值。


【發(fā)明內容】

[0005] 為解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可有效提高繁殖系數(shù)以適應 引種推廣及園林應用需求的鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白的組織培養(yǎng)方。
[0006] 本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：
[0007] -種鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下 步驟：
[0008] (1)外植體表面滅菌前處理：取當年生、無病蟲害鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利 莎白的健壯枝條，剪成lcm帶芽莖段作為外植體，首先將外植體用洗衣粉溶液浸泡30min， 然后用流水沖洗lh ;
[0009] (2)外植體表面滅菌與初代培養(yǎng)：在無菌瓶中放20-30個帶芽莖段外植體，首先加 入75%的酒精浸泡20s，然后用無菌水沖洗2次，再用0. 1 %的升汞滅菌，滅菌3-8min，在滅 菌過程中輕輕晃動三角瓶，使升汞與外植體充分接觸，滅菌完成后用無菌水沖洗4-5次，沖 洗完成后切除外植體兩端與升汞接觸的部分，接種于無菌的初代培養(yǎng)基上，每個處理接種 30個外植體，在培養(yǎng)溫度為25±2°C，空氣相對濕度50-60%，光照時間12h/d，光照強度為 20001x的條件下，進行進行14-20d的初代培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，30-40d 后芽點長成帶有3-5節(jié)的新梢，形成無菌試管苗；
[0010] (3)繼代增殖培養(yǎng)：逐節(jié)切下步驟（2)所述的無菌試管苗轉移到增殖培養(yǎng)基上進 行繼代增殖培養(yǎng)30d，每個處理接種30株小苗，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為25±2°C，空氣相對 濕度50-60%，光照時間1211/(1，光照強度為200011;
[0011] (4)壯苗培養(yǎng)：將步驟（3)增殖后的苗接種在壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)30d，培 養(yǎng)條件為：溫度為25±21：，空氣相對濕度50-60%，光照時間1211/(1，光照強度為200011 ;
[0012] (5)生根培養(yǎng)：將經過步驟（4)壯苗培養(yǎng)后的苗高大于3cm的苗作為生根苗，接入 生根培養(yǎng)基中，每個處理接種30瓶，培養(yǎng)40d，培養(yǎng)條件為：溫度為25 ± 1 °C，空氣相對濕度 50-60%，光照時間1211/(1，光照強度為20001叉；
[0013] (6)苗的馴化和移栽：當步驟（5)所述的經過生根培養(yǎng)后的不定根長至1cm時，首 先將生根苗在自然光照條件下煉苗2-3d，然后，敞開瓶蓋再煉苗3-4d，進行生根苗的移栽， 移栽前將生根苗取出，清水中輕輕漂洗生根苗粘附的培養(yǎng)基，洗凈幼苗根系，然后移栽到基 質中，移栽后澆一次透水，此時溫度為25± 1 °C，空氣相對濕度50-60%，光照時間12h/d，光 照強度為20001X，7d以后，可逐步施加水肥并常規(guī)管理。
[0014] 進一步，所述的初代培養(yǎng)基為 MS+lmg/L6-BA+0. 05mg/L NAA+7g/L 瓊脂 +30g/L 蔗 糖，pH 為 5. 8。
[0015] 所述的增殖培養(yǎng)基為 MS+lmg/L6-BA+0. 02mg/L NAA+200ml/L 椰汁 +7g/L 瓊脂 +30g/L 鹿糖。
[0016] 所述的壯苗培養(yǎng)基為：MS+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖；
[0017] 而所述的生根培養(yǎng)基為：l/2MS+lmgL-lNAA+0. 5mg/L IBA+7g/L 瓊脂 +30g/L 蔗糖。
[0018] 且,上述的MS包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分，其中，
[0019] 所述的大量元素為：

【權利要求】
1. 一種鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下 步驟： (1) 外植體表面滅菌前處理：取當年生、無病蟲害鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白 的健壯枝條，剪成lcm帶芽莖段作為外植體，首先將外植體用洗衣粉溶液浸泡30min，然后 用流水沖洗lh ; (2) 外植體表面滅菌與初代培養(yǎng)：在無菌瓶中放20-30個帶芽莖段外植體，首先加入 75%的酒精浸泡20s，然后用無菌水沖洗2次，再用0. 1%的升汞滅菌，滅菌3-8min，在滅菌過 程中輕輕晃動三角瓶，使升汞與外植體充分接觸，滅菌完成后用無菌水沖洗4-5次，沖洗完 成后切除外植體兩端與升汞接觸的部分，接種于無菌的初代培養(yǎng)基上，每個處理接種30個 外植體，在培養(yǎng)溫度為25±2°C，空氣相對濕度50-60%，光照時間12h/d，光照強度為20001x 的條件下，進行進行14-20d的初代培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，30-40d后芽點 長成帶有3-5節(jié)的新梢，形成無菌試管苗； (3) 繼代增殖培養(yǎng)：逐節(jié)切下步驟（2)所述的無菌試管苗轉移到增殖培養(yǎng)基上進行繼 代增殖培養(yǎng)30d，每個處理接種30株小苗，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為25±2°C，空氣相對濕度 50-60%，光照時間12h/d，光照強度為20001x ; (4) 壯苗培養(yǎng)：將步驟（3)增殖后的苗接種在壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)30d，培養(yǎng)條 件為：溫度為25±2°C，空氣相對濕度50-60%，光照時間12h/d，光照強度為20001x ; (5) 生根培養(yǎng)：將經過步驟（4)壯苗培養(yǎng)后的苗高大于3cm的苗作為生根苗，接入生 根培養(yǎng)基中，每個處理接種30瓶，培養(yǎng)40d，培養(yǎng)條件為：溫度為25土 TC，空氣相對濕度 50-60%，光照時間12h/d，光照強度為20001x ; (6) 苗的馴化和移栽：當步驟（5)所述的經過生根培養(yǎng)后的不定根長至lcm時，首先 將生根苗在自然光照條件下煉苗2-3d，然后，敞開瓶蓋再煉苗3-4d，進行生根苗的移栽，移 栽前將生根苗取出，清水中輕輕漂洗生根苗粘附的培養(yǎng)基，洗凈幼苗根系，然后移栽到基質 中，移栽后澆一次透水，此時溫度為25土1°C，空氣相對濕度50-60%，光照時間12h/d，光照 強度為20001 X，7d以后，可逐步施加水肥并常規(guī)管理。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法， 其特征在于，所述的初代培養(yǎng)基為MS+1 mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖， pH 為 5.8。
3. 根據(jù)權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法， 其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基為MS+lmg/L 6-BA+O. 02mg/L NAA+200 ml/L椰汁+7g/L瓊 脂+30g/L蔗糖。
4. 根據(jù)權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法， 其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基為：MS+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖。
5. 根據(jù)權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法， 其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基為：l/2MS+lmg/L NAA+0.5 mg/L IBA +7g/L瓊脂+30g/L蔗 糖。
6. 根據(jù)權利要求2-4任一項權利要求所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特?伊利莎白 的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的MS包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分，其中， 所述的大量元素為：

8.根據(jù)權利要求1所述的一種鐵線蓮栽培品種維奧利特·伊利莎白的組織培養(yǎng)方法， 其特征在于，所述的基質為珍珠巖。
【文檔編號】A01H4/00GK104082137SQ201410295548
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權日:2014年6月26日
【發(fā)明者】王磊, 宋微, 潘靜霞, 胡永進, 楊小花 申請人:江蘇農林職業(yè)技術學院