專利名稱：一項鐵線蓮茱莉亞組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)。
背景技術(shù)：
鐵線蓮‘茱莉亞，(Clematis‘Madame Julia Correvon')隸屬于毛茛科 (Ranunculaceae)鐵線蓮屬(Clematis L.),是鐵線蓮 Clematis 'Rubra Grandiflora'與 Clemati iVille de Lyon'的雜交品種，原產(chǎn)自法國。該品種具有葉柄攀援的特點，而且花 色鮮艷，花型美麗；用其布置墻垣、棚架、陽臺、門廊，顯得優(yōu)雅別致，因而有“攀援植物皇后” 的美譽(yù)。‘茱莉亞’作為垂直綠化材料，不僅應(yīng)用于園林領(lǐng)域，而且廣泛用于盆栽，切花等。雖然我國的鐵線蓮種質(zhì)資源相當(dāng)豐富，有近世界三分之一的種系，但卻因其種子 繁殖困難，推廣速度慢，而沒有選育出觀賞價值高的品種。對于觀賞價值較高，應(yīng)用前景廣 的‘茱莉亞’，目前我國還沒有研究出它的快繁技術(shù)，仍需從國外大量進(jìn)口。所以，研究‘茱 莉亞’快繁技術(shù)不僅可以進(jìn)一步推廣鐵線蓮的園林應(yīng)用，同時也可以節(jié)省大量外匯。至今對于鐵線蓮的研究主要有，澤仁旺姆利用甘青鐵線蓮的種子長出的幼苗進(jìn)行 了不定芽和不定根的生成；張啟香找出了 ‘Multi-Blue’的最佳外植體為莖尖；而張濤誘導(dǎo) 出重瓣鐵線蓮的愈傷，但沒有誘導(dǎo)不定芽。本技術(shù)利用鐵線蓮‘茱莉亞’當(dāng)年新生枝條帶芽 莖段，進(jìn)行組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽的發(fā)生，促進(jìn)不定芽的生成，再誘導(dǎo)其生根。通過人工配制不 同營養(yǎng)成分和激素調(diào)控，使其形成成千上萬小植株，并且保持了母體內(nèi)全部優(yōu)良遺傳性狀， 此方法可在短時間內(nèi)獲得大量試管苗，獲得的幼苗存放在人工控制的培養(yǎng)室內(nèi)，可實施一 年四季工廠化生產(chǎn)。因此利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖鐵線蓮‘茱莉亞’，不僅為推廣鐵線蓮‘茱 莉亞’提供了一個快速的途徑，也為其工廠化生產(chǎn)提供幫助，意義重大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可以快速，大量繁殖鐵線蓮‘茱莉亞’的組織培養(yǎng)技術(shù)。本發(fā)明提供的鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，包括以下幾個步驟1、腋芽誘導(dǎo)將當(dāng)年新生枝條帶芽莖段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有1/4MS、1/2MS、MS常 規(guī)基本培養(yǎng)基、2，4_ 二氯苯氧乙酸1. O毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖30克/升。 培養(yǎng)1周后，待培養(yǎng)物誘導(dǎo)出芽原基后，進(jìn)入以下第2步；2、不定芽增殖將第1步所得的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基含有MS常規(guī)基本培養(yǎng) 基、6-芐基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40克/升。培 養(yǎng)天20左右，待小苗長到常規(guī)生根程序所需高度時，進(jìn)入以下第3步；3、生根將第2步所得的無根小苗齊根取下，轉(zhuǎn)至常規(guī)生根培養(yǎng)基中，生根基本培養(yǎng)基含 有1/4MS，1/2MS，MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、萘乙酸0. 05毫克/升，培養(yǎng)20天左右，待小苗根部長出短根，即可進(jìn)行根的伸長，根伸長培養(yǎng)基為1/2MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、萘乙酸0-2. 0毫克/ 升或吲哚丁酸0. 3-2. 0毫克/升、蔗糖30克/升。之后數(shù)天，小苗長出4-5根主根時，進(jìn)入 以下第4步；4、移栽與煉苗先把封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)煉苗1周左右，取出小苗，洗凈小苗根部的瓊脂，移 栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質(zhì)內(nèi)，放入溫室大棚進(jìn)一步煉苗15-20天。其間需要 噴灑1/10MS大量元素營養(yǎng)液以利于緩解蒸騰失水，并補(bǔ)充植物營養(yǎng)。本發(fā)明利用帶腋芽的莖段做外植體進(jìn)行直接器官的發(fā)生，大大提高了快繁速率， 同時用基本培養(yǎng)基添加微量激素進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，能夠快速誘導(dǎo)腋芽，并促使其伸長。腋 芽誘導(dǎo)后，不宜在原培養(yǎng)基上長期培養(yǎng)，否則誘導(dǎo)出的芽容易伸長生長，因此要轉(zhuǎn)接到 MS+6-芐基嘌呤1. 0毫克/升+吲哚丁酸0. 15毫克/升+蔗糖30克/升的培養(yǎng)基上，以 利于不定芽的分化和伸長。生根階段，本發(fā)明采用了先誘導(dǎo)再促進(jìn)伸長的方法，首先，把伸 長到適合常規(guī)生根高度的小苗，先轉(zhuǎn)移到添加了 0. 05毫克/升萘乙酸的1/2MS基本培養(yǎng)基 中，誘導(dǎo)不定根的生成，再轉(zhuǎn)移到1/2MS+萘乙酸0. 05毫克/升培養(yǎng)基中促進(jìn)根的伸長，此 方法大大提高了根誘導(dǎo)和伸長的速率。因此采用此發(fā)明的培養(yǎng)基有如下優(yōu)點腋芽誘導(dǎo)啟動快，芽分化系數(shù)高，苗伸長 快、生長一致且健壯，生根率高、根長且壯，生長周期短，基本無畸形苗。
四

圖12，4_D和IBA誘導(dǎo)產(chǎn)生的腋芽圖沈-BA和IBA處理后的增殖芽圖3NAA誘導(dǎo)產(chǎn)生的根
五具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實施例1、取材以鐵線蓮‘茱莉亞’當(dāng)年生嫩枝作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)，要求新生枝生長健 壯，葉片具有母本的優(yōu)良性狀，而且有飽滿而未萌發(fā)的腋芽。2、材料消毒方法除掉多余的葉片，只保留莖段，用酒精脫脂棉輕輕擦洗去除外植 體上的絨毛，流水沖洗1小時。在無菌條件下，用75%酒精浸泡30秒，0. 升汞處理3-5 分鐘，無菌水沖洗5 6次。3、接種在超凈工作臺內(nèi)，無菌濾紙吸取殘余水分后，將莖段兩頭切去一小段，以 減少升汞的毒害。然后將其切成1 1.5cm長的莖段，然后接種到外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基。誘 導(dǎo)培養(yǎng)基組成為MS+2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30
克/升。4、不定芽增殖將帶腋芽莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上20天后就可看到腋芽萌發(fā)長 高(圖1)，然后將其轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上。增殖培養(yǎng)基組成為MS+6-芐基嘌呤1.0毫克/ 升+吲哚丁酸0. 15毫克/升+蔗糖30克/升。5、生根當(dāng)分化出的叢生芽(圖幻長到常規(guī)生根所需高度時，用剪刀單個剪下，接種到生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基的組成為1/2MS+萘乙酸0. 05毫克/升。為使誘導(dǎo)出的根能更好的伸長生長，將生根小苗轉(zhuǎn)移到根伸長培養(yǎng)基中，根伸長 培養(yǎng)基的組成為1/2MS+萘乙酸0. 05毫克/升(圖3)。培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為25士 1°C ；光照為2000勒克斯，16小時/天。6、移栽與煉苗在生根培養(yǎng)基中小苗生長35天左右后，根系比較發(fā)達(dá)，一般會長 出4-5條主根時，即可進(jìn)行移栽。先把封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)煉苗1周左右，取出小苗，洗凈小苗根部的瓊脂，移 栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質(zhì)里，放入溫室大棚進(jìn)一步煉苗10-15天。其間需要 噴灑1/10MS大量元素營養(yǎng)液以利于緩解蒸騰失水，并補(bǔ)充植物營養(yǎng)，以防止葉片發(fā)黃。
權(quán)利要求
1.一項鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，其特征在于以下四個部分組成(1)腋芽誘導(dǎo)將當(dāng)年新生枝條帶芽莖段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有1/4MS、 1/2MS、MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖 30克/升，培養(yǎng)1周后，培養(yǎng)物誘導(dǎo)出芽原基，再經(jīng)1周時間，即可開始下一階段培養(yǎng)；(2)不定芽增殖將第1步所得的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基含有MS常 規(guī)基本培養(yǎng)基、6-芐基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40 克/升，培養(yǎng)20天左右，進(jìn)入以下第3步；(3)生根將第2步所得的無根小苗齊根取下，轉(zhuǎn)至常規(guī)生根培養(yǎng)基中，生根基本培養(yǎng) 基含有1/4MS，1/2MS，MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、萘乙酸0. 05毫克/升，培養(yǎng)20天左右，待小苗根 部長出短根，即可進(jìn)行根的伸長，根伸長培養(yǎng)基含有1/2MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、萘乙酸0-2. 0 毫克/升或吲哚丁酸0. 3-2. 0毫克/升、蔗糖30克/升，35天左右，即可移栽長成正常的鐵 線蓮植株；(4)移栽與煉苗待第3步小苗長出4-5根主根時，先把封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)煉苗 1周左右，取出小苗，洗凈小苗根部的瓊脂，移栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質(zhì)里，放 入溫室大棚進(jìn)一步煉苗15-20天，其間需要噴灑1/10MS大量元素營養(yǎng)液以利于緩解蒸騰失 水，并補(bǔ)充植物營養(yǎng)。
2.按權(quán)利要求1所述的鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁過程中的腋芽誘導(dǎo)，其特征在于 所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/4MS、1/2MS、MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、2，4_ 二氯苯氧乙酸1.0毫克/升、 吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖30克/升。
3.按權(quán)利要求1所述的鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁過程中的不定芽增殖，其特征 在于所述的增殖培養(yǎng)基為MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、6-芐基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸 0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40克/升。
4.按權(quán)利要求1所述的鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁過程中的生根，其特征在于所述 的生根培養(yǎng)基為1/2MS常規(guī)基本培養(yǎng)基、萘乙酸0-2. 0毫克/升或吲哚丁酸0. 3-2. 0毫克 /升、蔗糖30克/升。
5.按權(quán)利要求1所述的鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁過程中的移栽與煉苗，其特征在 于所述的移植基質(zhì)為珍珠巖泥炭=1 3。
全文摘要
“一項鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)”屬于鐵線蓮‘茱莉亞’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)領(lǐng)域。該技術(shù)以當(dāng)年新生枝條帶芽莖段為外植體，建立了鐵線蓮‘茱莉亞’的再生體系。研究結(jié)果表明，腋芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基是MS+2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，分化率達(dá)93.3％；不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-芐基嘌呤1.0毫克/升+吲哚丁酸0.15毫克/升+蔗糖30克/升，增殖系數(shù)為4.03；適宜的生根培養(yǎng)基是1/2MS+萘乙酸0.05毫克/升，生根率達(dá)91.2％。經(jīng)過5～7天的開瓶煉苗，以珍珠巖∶泥炭＝1∶3為基質(zhì)，20天后調(diào)查，其移栽成活率達(dá)87％。上述發(fā)明技術(shù)可應(yīng)用于鐵線蓮‘茱莉亞’的高效快速繁殖，并可達(dá)到工廠化育苗的目標(biāo)。
文檔編號A01H4/00GK102119663SQ20111000072
公開日2011年7月13日 申請日期2011年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月5日
發(fā)明者仵丹丹, 季孔庶 申請人:南京林業(yè)大學(xué)