磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，屬于野生食用菌培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】。磚紅絨蓋牛肝菌，屬于一種名貴野生食用菌，是云南省夏季市場上的主要美味菌類之一，由于其為松樹外生菌根菌，目前不能人工培養(yǎng)，全靠野外自然采摘，因此價格昂貴。要保證牛肝菌能周年供應(yīng)，滿足大眾餐桌所需，降低價格，只有實現(xiàn)人工培養(yǎng)。而牛肝菌的人工栽培，仍存在許多盲點問題：如菌絲在培養(yǎng)基上生長很緩慢；與共生樹種的共生機理尚不完全清楚等。本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是，以野外采摘的子實體小組織塊為材料，在試管培養(yǎng)基上直接誘導分化能發(fā)育成熟的子實體原基，具有直接、簡易、生產(chǎn)成本低等特點，這為今后該菌的大規(guī)模室內(nèi)人工培養(yǎng)奠定了重要基礎(chǔ)。
【專利說明】磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是屬于野生食用菌室內(nèi)培養(yǎng)范疇。
【背景技術(shù)】
[0002]牛肝菌隸屬于擔子菌門(Basidiomycota),傘菌綱(Agaricomycetes),牛肝菌目(Boletales),牛肝菌科(Boletaceae),為世界廣布大屬，是一類與植物共生的菌根真菌。該屬真菌味道鮮美，且含有抗氧化、抗腫瘤等生理活性物質(zhì)，因而具有很高的經(jīng)濟價值和研究前景。目前，除少數(shù)腐生種如暗褐網(wǎng)柄牛肝菌外，其絕大部分種仍難以進行人工栽培，市售子實體完全依賴野外采收。云南的自然資源豐富，野生牛肝菌品種多，但因近年氣候變化、生態(tài)破壞等原因其自然產(chǎn)量已經(jīng)嚴重下降，導致售價昂貴。
[0003]磚紅絨蓋牛肝菌CferocofiMAs spadiceus (Fr.)仍⑷.),在云南俗稱紅見手，為松樹外生菌根菌，目前不能人工培養(yǎng)。其夏季于林中地上單生或群生，子實體中等至大型，菌蓋直徑5~17cm，半球形至扁平，土紅色或磚紅色，菌肉黃白色，受機械損傷后變成藍色，菌柄長6~13cm，粗3~6cm，深玫瑰紅色或暗紫紅色，頂端有網(wǎng)紋，下部被絨毛，內(nèi)實。磚紅絨蓋牛肝菌屬于一種名貴野生食用菌，其在云南分布廣，是云南省夏季市場上豐富多彩的主要美味菌類之一，由于全靠人工野外米摘，且個體生長受氣候、生態(tài)環(huán)境影響大(如遇長期干旱，幾乎不會生長)，6月份剛上市時，其每千克鮮重售價在200~300元，在7~8月份產(chǎn)品較多時，價格也維持在90~150元，且食用期只有每年的6~9月，其它月份無自然產(chǎn)品。牛肝菌的干品味 道較差，營養(yǎng)大大損失，人們很少食用。
[0004]因此，要保證牛肝菌能周年供應(yīng)，滿足大眾餐桌所需，降低價格，只有實現(xiàn)人工培養(yǎng)。而牛肝菌的人工栽培，也像其它珍稀食用菌一樣，存在許多盲點，一方面，菌絲在培養(yǎng)基上生長很緩慢，另一方面，菌絲的生長發(fā)育與共生樹種的共生機理尚不完全清楚，因此至今仍沒有人工培養(yǎng)的品種。
[0005]本發(fā)明在菌絲誘導過程中，偶然發(fā)現(xiàn)，磚紅絨蓋牛肝菌能在試管中直接誘導子實體原基，改進培養(yǎng)條件，原基能進一步發(fā)育為完全的子實體。這為今后磚紅絨蓋牛肝菌大規(guī)模的室內(nèi)人工培養(yǎng)奠定了重要基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于，提供一種直接、簡易、生產(chǎn)成本低，能在試管中直接誘導長出子實體原基的方法。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是，以野外采摘的子實體小組織塊為材料，在試管培養(yǎng)基上直接誘導分化子實體原基；
所述子實體小組織塊的準備及切取方法為:野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.25~0.49cm2的小塊；
所述試管培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯80.00~100g/L、酶解松針粉35~40 g/L、發(fā)酵玉米復合粉 15 ~20 g/L,CaCl2 1.0Og /UKH2PO40.60g/L、16.0 波美的麥芽汁 80 ~90ml/L、瓊脂 12.00 g/L,控制 PH 值為 5.40 ~5.60 ;
所述培養(yǎng)基中酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:4~1:6的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理65~75min，再加入8~10倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.0~4.6，于50~53°C水浴中，按6.0~7.0%的重量體積比加入纖維素酶，酶解120~140 min后，將水浴溫度升至92~95°C，至水分基本蒸干時移入73~75°C烘箱中，干燥30~32hr ;所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1~1:1.5的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸20~30分鐘，取出，待溫度冷至30~35°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28~30°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵4~6天，將發(fā)酵物在55~60°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩； 所述子實體原基的誘導方法為:將切取的小組織塊，輕輕嵌入試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)8~10天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于400~600Lx的弱光下10hr，5~7天后，每天將試管放置于1600~2000Lx的較強光照下10hr，10~15天，即從原組織塊上長出I~2個菌柄高
0.8~1.2cm,直徑0.30~0.5cm的小子實體原基。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:在試管培養(yǎng)條件下，利用子實體小組織塊，直接誘導分化子實體原基，其特點如下:
(1)簡單直接:不經(jīng)過菌絲體階段，直接從原子實體小組織塊，脫分化出子實體原基，原基繼而可以長成幼小的全子實體；
(2)易實現(xiàn):本發(fā)明的特點在于，小組織塊一萌發(fā)出菌絲，即開始放入人工氣候箱控光，操作容易；
(3 )生產(chǎn)成本低:本發(fā)明的試管培養(yǎng)基成分取自天然的松針及食用玉米等，不會增加培養(yǎng)成本；人工氣候箱是實驗室常規(guī)設(shè)備，不需額外增設(shè)大型設(shè)備支出。
【具體實施方式】
[0009]以下的實施例子是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0010]實例一:
野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.25cm2的小塊；
將切取的小組織塊，輕輕嵌入18X180mm的試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，所述的培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯80.00g/L、酶解松針粉35 g/L、發(fā)酵玉米復合粉15 g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麥芽汁80ml/L、瓊脂12.00 g/L，控制PH值為5.40 ;所述酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:4的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理65min，再加入8倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.0，于50°C水浴中，按6.0%的重量體積比加入纖維素酶，酶解120min后，將水浴溫度升至92°C，至水分基本蒸干時移入73°C烘箱中，干燥30hr ;所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸20分鐘，取出，待溫度冷至30°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵4天，將發(fā)酵物在55°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩；將接種小組織塊的試管放置在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)8天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于400Lx的弱光下10hr，5天后，每天將試管放置于1600LX的較強光照下10hr，10天，即從原組織塊上長出I個菌柄高0.8cm,直徑
0.30cm的小子實體原基。
[0011]實例二:
野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.35cm2的小塊；
將切取的小組織塊，輕輕嵌入18X180mm的試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，所述的培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯90.00g/L、酶解松針粉38 g/L、發(fā)酵玉米復合粉17g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麥芽汁85ml/L、瓊脂12.00 g/L，控制PH值為5.60 ;所述酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:5的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理70min，再加入9倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.2，于52°C水浴中，按6.5%的重量體積比加入纖維素酶，酶解130 min后，將水浴溫度升至93°C，至水分基本蒸干時移入74°C烘箱中，干燥31hr ; 所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.5的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸25分鐘，取出，待溫度冷至32°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在29°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵5天，將發(fā)酵物在58°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩；將接種小組織塊的試管放置在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)9天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于500Lx的弱光下10hr，6天后，每天將試管放置于1800LX的較強光照下10hr，13天，即從原組織塊上長出2個菌柄高1.0cm,直徑
0.40cm的小子實體原基。
[0012]實例三:
野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.49cm2的小塊；
將切取的小組織塊，輕輕嵌入18X180mm的試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，所述的培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯100g/L、酶解松針粉40 g/L、發(fā)酵玉米復合粉20 g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麥芽汁90ml/L、瓊脂12.00 g/L，控制PH值為5.40 ;所述酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:6的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理75min，再加入10倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.6，于53°C水浴中，按7.0%的重量體積比加入纖維素酶，酶解140 min后，將水浴溫度升至95°C，至水分基本蒸干時移入75°C烘箱中，干燥32hr ;所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.3的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸30分鐘，取出，待溫度冷至35°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在30°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵6天，將發(fā)酵物在60°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩；
將接種小組織塊的試管放置在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)10天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于600Lx的弱光下10hr，7天后，每天將試管放置于1900LX的較強光照下10hr，15天，即從原組織塊上長出2個菌柄高1.2cm,直徑0.5cm的小子實體原基。
[0013] 實例四:
野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.45cm2的小塊；
將切取的小組織塊，輕輕嵌入18X180mm的試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，所述的培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯95.00g/L、酶解松針粉37g/L、發(fā)酵玉米復合粉16g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麥芽汁83ml/L、瓊脂12.00 g/L，控制PH值為5.60 ;所述酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:6的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理68min，再加入8.5倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.4，于51 °C水浴中，按6.8%的重量體積比加入纖維素酶，酶解135 min后，將水浴溫度升至93°C，至水分基本蒸干時移入73°C烘箱中，干燥31h r ;所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.5的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸28分鐘，取出，待溫度冷至33°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在29°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵5天，將發(fā)酵物在58°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩；
將接種小組織塊的試管放置在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)9天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于550Lx的弱光下10hr，6天后，每天將試管放置于2000LX的較強光照下10hr，13天，即從原組織塊上長出2個菌柄高1.1cm,直徑
0.40cm的小子實體原基。
【權(quán)利要求】
1.一種磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，其特征為，以野外采摘的子實體小組織塊為材料，在試管培養(yǎng)基上直接誘導分化子實體原基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，其特征為，子實體小組織塊的準備及切取方法為:野外采摘生長健壯、無蟲害、未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄部位，用解剖刀片輕輕去除菌蓋中部表皮，從菌蓋中部取十字，將子實體一分為四，取菌柄與菌蓋交接處的內(nèi)部無菌組織塊，切成0.25~0.49cm2的小塊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，其特征為，所述的試管培養(yǎng)基成分為:馬鈴薯80.00~100g/L、酶解松針粉35~40 g/L、發(fā)酵玉米復合粉 15 ~20 g/L、CaCl2 1.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0 波美的麥芽汁 80 ~90ml/L、瓊脂12.00 g/L,控制 PH 值為 5.40 ~5.60。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試管培養(yǎng)方法，其特征為，所述培養(yǎng)基中酶解松針粉的制備方法如下:在牛肝菌生長地收集松針，烘干，粉碎；按1:4~1:6的重量體積比加入水，混成糊狀，用超聲波處理65~75min，再加入8~10倍水，調(diào)節(jié)PH值為4.0~4.6，于50~53°C水浴中，按6.0~7.0%的重量體積比加入纖維素酶，酶解120~140 min后，將水浴溫度升至92~95°C，至水分基本蒸干時移入73~75°C烘箱中，干燥30~32hr ;所述發(fā)酵玉米復合粉的制備方法如下:將玉米面、小麥面、黃豆粉按2:1:1比例混合，按1:1~1:1.5的混合物重量體積比加入水，拌勻，在蒸鍋中蒸20~30分鐘，取出，待溫度冷至30~35°C時，按說明書摻入適量的酒曲粉，拌勻后放入干凈的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28~30°C的培養(yǎng)箱中，發(fā)酵4~6天，將發(fā)酵物在55~60°C烘箱中烘干，粉碎，過80目分樣篩。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磚紅絨蓋牛肝菌試管子實體原基的誘導方法，其特征為，子實體原基的誘導方法為:將切取的小組織塊，輕輕嵌入試管斜面誘導培養(yǎng)基表面，在溫度為22~23°C下暗培養(yǎng)8~10天，待菌塊周圍有極少白色菌絲萌發(fā)，培養(yǎng)基漸變成淺褐色時，每天將試管放置于400~600Lx的弱光下10hr，5~7天后，每天將試管放置于1600~2000Lx的較強光照下IOhr，10~15天，即從原組織塊上長出I~2個菌柄高0.8~1.2cm，直徑0.30~0.5cm的小子實體原基。
【文檔編號】A01H4/00GK103609338SQ201310701987
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月19日
【發(fā)明者】李宗菊, 王鵬飛, 張曦予, 吳鵬, 馮遼遼, 趙昱, 左奎 申請人:云南大學