一種黑牛肝菌母種長期保藏方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及菌種保藏領(lǐng)域，具體而言，涉及一種黑牛肝菌母種長期保藏方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黑牛肝菌（Phlebopusportentosus)，是一種珍貴的熱帶食用菌，深受出產(chǎn)地人們 的喜愛，也是此屬中唯一可以使用腐生方法栽培的食用菌，目前已可用袋栽及瓶栽的方法 進(jìn)行中等規(guī)模的栽培推廣。黑牛肝菌是一種高溫食用菌，菌絲體不耐低溫，微生物及一般食 用菌菌種常用的低溫（4°C)保藏法，保藏黑牛肝菌菌種24小時死亡率100%。因此，菌種 的中短期保藏需要保存在中溫條件下進(jìn)行，而長期保藏未見報道。黑牛肝菌是一種新型的 可進(jìn)行人工栽培的小牛肝菌科真菌，獲得一株具有商業(yè)栽培價值的菌株極其困難，加之菌 種的不耐低溫及中短期保藏多次轉(zhuǎn)接產(chǎn)生的退化，限制了黑牛肝菌的研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化栽培。
[0003] 常規(guī)液氮保藏方法使用甘油或二甲亞砜，而黑牛肝菌在這些保護(hù)劑下不萌發(fā)或復(fù) 蘇后退化現(xiàn)象明顯；由于是高溫菇，中低溫菇的預(yù)冷方式（如降溫速率為1°C降溫至-40°C 再移入液氮中）并不適合，萌發(fā)率并不高；常用38°C水溫下水浴復(fù)蘇本菌種萌發(fā)率為0。保 藏菌種常采用長滿斜面或平皿菌種，其他一些食用菌菌絲生長速度快，長滿斜面或平皿只 需10d左右，菌絲旺盛，而本菌種需要25-30天，此時液泡過大，胞液結(jié)晶時對菌絲損傷大， 不適合保藏。因此，中低溫食用菌液氮保藏方法并不適合本菌種，急需尋求一種適宜黑牛肝 菌菌種長期保藏的方法，提高其菌種的穩(wěn)定性，為黑牛肝菌的研發(fā)以及實現(xiàn)其產(chǎn)業(yè)化栽培 提供菌種保障。
[0004] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種黑牛肝菌母種長期保藏方法，以提高黑牛肝菌的穩(wěn)定 性，為黑牛肝菌的研發(fā)以及實現(xiàn)其產(chǎn)業(yè)化栽培提供菌種保障。
[0006] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0007] -種黑牛肝菌母種長期保藏方法，以海藻糖作為保護(hù)劑保藏黑牛肝菌母種。
[0008] 本發(fā)明提供的一種黑牛肝菌母種長期保藏方法，選用海藻糖作為保護(hù)劑保藏黑牛 肝菌母種，徹底解決了黑牛肝菌菌種長期保藏問題，其操作簡單，成本低廉，并且不易退化 和變異，成活率高，具有良好的應(yīng)用前景。同時，也為其他高溫食用菌菌種保藏技術(shù)的完善 提供積極的促進(jìn)作用。
[0009] 為了防止保藏過程中發(fā)生退化和變異，提升保藏后的黑牛肝菌的穩(wěn)定性，使保藏 后成活率高，優(yōu)選地，所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為20% -40%的海藻糖水溶液。
[0010] 優(yōu)選地，所述黑牛肝菌母種具有以下特征：
[0011] 顏色乳黃色至金色，無菌皮，無菌索，無吐水，延展性好。
[0012] 顏色乳黃至金色，說明菌絲生長旺盛；而菌皮、菌索以及吐水是菌絲生長老化的特 征。本發(fā)明保藏的黑牛肝菌母種處于生長旺盛階段，母種在保藏過程中對外界抗逆性強(qiáng)，能 很好的保持自身的性狀。
[0013] 進(jìn)一步地，所述黑牛肝菌母種通過以下培養(yǎng)方式獲得：
[0014] 將菌絲塊接種于母種培養(yǎng)基上，于28-30°C恒溫培養(yǎng)15~20天。
[0015] 菌絲塊是由黑牛肝菌子實體的組織塊培養(yǎng)得到，用于短期保藏的菌種。即直接取 短期保藏的菌絲塊進(jìn)行培養(yǎng)，至其顏色乳黃色至金色，無菌皮，無菌索，無吐水，延展性好即 可。得到的母種處于生長旺盛階段。
[0016] 此外，黑牛肝菌母種也可以直接將黑牛肝菌子實體的組織塊培養(yǎng)獲得，即將黑牛 肝菌子實體的組織塊于28-30°C恒溫培養(yǎng)28-32天，至其顏色乳黃色至金色，無菌皮，無菌 索，無吐水，延展性好即可。
[0017] 進(jìn)一步地，所述母種培養(yǎng)基包含以下成分：
[0018]
【主權(quán)項】
1. 一種黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，以海藻糖作為保護(hù)劑保藏黑牛肝菌 母種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述保護(hù)劑為質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)為20% -40 %的海藻糖水溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述黑牛肝菌母 種具有以下特征： 顏色乳黃色至金色，無菌皮，無菌索，無吐水，延展性好。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述黑牛肝菌母 種通過以下培養(yǎng)方式獲得： 將菌絲塊接種于母種培養(yǎng)基上，于28-30°C恒溫培養(yǎng)15~20天。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述母種培養(yǎng)基 包含以下成分：
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，保藏過程具體為： 將所述黑牛肝菌母種浸入保護(hù)劑中，先在-110°c~-130°c條件下預(yù)冷30min~60min， 然后浸入液態(tài)氮或氣相氮中保藏。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，將所述黑牛肝菌 母種按無菌操作裝入已滅菌的低溫凍存管中，使所述黑牛肝菌母種放入無菌的保護(hù)劑中。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述低溫凍存管 扭緊管塞后再用醫(yī)用膠帶封口。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，復(fù)蘇時，取出所述 低溫凍存管，放入39 °C~42 °C的恒溫溫水中快速恢復(fù)至室溫。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的黑牛肝菌母種長期保藏方法，其特征在于，所述黑 牛肝菌母種的長寬為0. 9-1. IcmXO. 3-0. 5cm。
【專利摘要】本發(fā)明涉及菌種保藏領(lǐng)域，具體而言，涉及一種黑牛肝菌母種長期保藏方法。一種黑牛肝菌母種長期保藏方法，以海藻糖作為保護(hù)劑保藏黑牛肝菌母種。本發(fā)明提供的一種黑牛肝菌母種長期保藏方法，選用海藻糖作為保護(hù)劑保藏黑牛肝菌母種，徹底解決了黑牛肝菌菌種長期保藏問題，其操作簡單，成本低廉，并且不易退化和變異，成活率高，具有良好的應(yīng)用前景。同時，也為其他高溫食用菌菌種保藏技術(shù)的完善提供積極的促進(jìn)作用。
【IPC分類】A01G1-04
【公開號】CN104663251
【申請?zhí)枴緾N201510119120
【發(fā)明人】紀(jì)光燕, 周茂, 紀(jì)光玉, 楊太茂, 楊君巧, 謝飛
【申請人】景洪宏臻農(nóng)業(yè)科技有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月18日