一種沙棗組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】一種沙棗組織培養(yǎng)方法，它涉及一種沙棗培養(yǎng)方法。它解決了目前沙棗組織培養(yǎng)擴培數(shù)量少、倍數(shù)低，或者利用愈傷組織進行繁殖生根率低，成活率低的缺陷。組織培養(yǎng)方法：一、枝條水培，嫩芽剪下處理，而后將帶有節(jié)間的莖段進行除培養(yǎng)初始培養(yǎng)；二、選初始培養(yǎng)長出的無菌苗葉的葉柄進行培養(yǎng)；三、將步驟二長出的幼芽移植培養(yǎng)，得到沙棗試管苗，然后經(jīng)過煉苗，即完成沙棗的組織培養(yǎng)。本發(fā)明可用于沙棗的種植領(lǐng)域。
【專利說明】一種沙専組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種沙棗培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 沙率(Elaeagnus angustifolia L.)屬胡頹子科胡頹子屬，為落葉或常綠灌木或小喬木。別名:銀柳胡頹子(東北木本植物圖志)、桂香柳(河南)、銀柳(遼寧)等。該樹種在我國的西北荒漠、半荒漠地區(qū)、華北、山東及東北地區(qū)均有分布，沙棗也是極少能在戈壁灘上生存下來的樹種之一，被譽為沙漠和鹽堿地的“寶樹”。
[0003]沙棗全身是寶:葉含蛋白質(zhì)4%、粗脂肪2.4%、糖15.7%，是優(yōu)質(zhì)的飼料。沙棗果肉粉含粗蛋白7.94%、粗脂肪1.34%、糖51.15%，可用于副食品加工，也可以代替糧食。沙棗花馥郁清香，可提取芳香油，又是很好的蜜源。沙棗根有根瘤菌，可固氮改善土壤。沙棗種子中子仁含油量20.69%，可用于生產(chǎn)清潔燃料(生物柴油)在未來能源逐漸短缺的背景下，開發(fā)利用生物質(zhì)能源已成為一種必然的發(fā)展趨勢。沙棗樹可營造沙棗經(jīng)濟林、防護林，并能育成風景林，綠化美化城市。
[0004]因此，擴大沙棗的栽種面積和數(shù)量有助于環(huán)境改善和農(nóng)民增收，沙棗產(chǎn)量的提高更有利于提高國民身體素質(zhì)。
[0005]依靠沙棗種子進行種植，不但生長周期長，而且成功率低。目前廣泛采用組織培養(yǎng)的方法栽種沙棗，但是，采用沙棗腋芽或頂芽進行組織培養(yǎng)存在擴培數(shù)量少、倍數(shù)低的問題；而采用組織培養(yǎng)出的葉片或葉柄進行誘導獲得愈傷組織，或者采用長出腋芽的莖段誘導獲得愈傷組織進行繁殖，又存在生根率低，成活率低的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明是為了解決目前沙棗組織培養(yǎng)擴培數(shù)量少、倍數(shù)低，或者利用愈傷組織進行繁殖生根率低，成活率低的缺陷，而提供的一種沙棗組織培養(yǎng)方法。
[0007]沙棗組織培養(yǎng)按以下步驟進行:
[0008]一、采集沙棗當年生枝條，反復沖洗后進行水培,嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水沖洗3次，之后放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸干水分后無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，并將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節(jié)間的莖段，再將莖段接種于不含任何植物激素的MS培養(yǎng)基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環(huán)境中初始培養(yǎng)10天；
[0009]二、選初始培養(yǎng)長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然后轉(zhuǎn)移至每升含有0.5mg6-芐氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)60天；然后將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉(zhuǎn)移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-芐氨基嘌呤的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)30天，長出幼芽；
[0010]三、將步驟二長出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天，得到沙棗試管苗，然后經(jīng)過煉苗，即完成沙棗的組織培養(yǎng)；
[0011]其中步驟一 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養(yǎng)基的pH值為 5.8。
[0012]本發(fā)明將步驟一嫩芽上的葉片剪除，然后利用嫩芽的莖段長出的再生葉片的葉柄培養(yǎng)獲得沙棗愈傷組織，該愈傷組織能夠提高沙棗的生根率；本發(fā)明利用愈傷塊進行繁殖，將擴培倍數(shù)提高到125倍以上，而且試管苗的生根率可達到了 92%，生根數(shù)可達到4~6根，根平均長度為1.7cm，保證了沙棗的存活率，為加快沙棗的推廣種植奠定了技術(shù)和物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0013]本發(fā)明方法對來自新疆的阿勒泰、呼圖壁，甘肅的張掖、武威，寧夏的中衛(wèi)，哈薩克斯坦的那烏爾祖母國家自然保護區(qū)等不同種源的沙棗都適用，組織培養(yǎng)的效果和數(shù)據(jù)基本相同。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1是【具體實施方式】一中步驟二長出的幼芽圖片。圖2是【具體實施方式】一步驟三得到的沙棗試管苗圖片。
【具體實施方式】
[0015]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0016]【具體實施方式】一:本實施方式沙棗組織培養(yǎng)按以下步驟進行:
[0017]一、采集沙棗當年生枝條，反復沖洗后進行水培，嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水沖洗3次，之后放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸干水分后無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，并將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節(jié)間的莖段，再將莖段接種于不含任何植物激素的MS培養(yǎng)基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環(huán)境中初始培養(yǎng)10天；
[0018]二、選初始培養(yǎng)長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然后轉(zhuǎn)移至每升含有0.5mg6-芐氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)60天；然后將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉(zhuǎn)移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-芐氨基嘌呤的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)30天，長出幼芽；
[0019]三、將步驟二長出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天，得到沙棗試管苗，然后經(jīng)過煉苗，即完成沙棗的組織培養(yǎng)；
[0020]其中步驟一 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養(yǎng)基的pH值為 5.8。
[0021]本實施方式選用分化能力強的葉柄部分進行誘導。
[0022]本實施方式選用的是錦繡I號沙棗進行試驗和數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
[0023]本實施方式采集沙棗優(yōu)良單株的當年生枝條；嫩芽長到2~3cm長一般需要水培12~15天。
[0024]本實施方式步驟二 培養(yǎng)過程中每日光照均為16h、光照強度均為2000 Iux0[0025]將本實施方式獲得的試管苗經(jīng)過煉苗轉(zhuǎn)移到以蛭石和珍珠巖為基質(zhì)的營養(yǎng)土中進行移栽，其中蛭石與珍珠巖的體積比為2:1。
[0026]本實施方式在室內(nèi)進行催芽，可減少嫩芽表面灰塵和細菌的數(shù)量，從而降低NaClO溶液的使用濃度，縮短處理時間，減少褐化比例的同時減少污染比例，提高外植體的存活率。
[0027]
【權(quán)利要求】
1.一種沙棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于沙棗組織培養(yǎng)按以下步驟進行:一、采集沙棗當年生枝條，反復沖洗后進行水培，嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水沖洗3次，之后放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸干水分后無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，并將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節(jié)間的莖段，再將莖段接種于不含任何植物激素的MS培養(yǎng)基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環(huán)境中初始培養(yǎng)10天；二、選初始培養(yǎng)長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX0.5cm大小，然后轉(zhuǎn)移至每升含有0.5mg6-芐氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)60天；然后將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉(zhuǎn)移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6_節(jié)氨基嘌呤的MS培養(yǎng)基中25°C培養(yǎng)30天，長出幼芽；三、將步驟二長出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天，得到沙棗試管苗，然后經(jīng)過煉苗，即完成沙棗的組織培養(yǎng)；其中步驟一 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養(yǎng)基的pH值為5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種沙棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一反復沖洗后將枝條剪成30±0.5cm長，枝條放入透明玻璃瓶中基部浸入清水中2~4cm進行水培，每天更換I次清水，并且每天用無菌純凈水噴灑枝條表面3~20次。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種沙棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一水培在朝陽的室內(nèi)進行，室溫保持在24 ± 0.5 °C。
【文檔編號】A01H4/00GK103583361SQ201310547387
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】劉力強, 宋福強 申請人:黑龍江錦繡大地生物工程有限公司