專利名稱：一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，具體涉及一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)。
背景技術(shù)：
藍(lán)莓屬杜胃$花科(Ericaeae)越桔亞科(Vaccinioideae)越橘屬(Vaccinium)。藍(lán)莓果實(shí)富含花青素、不飽和脂肪酸、鞣酸及鈣、鉀、鋅、鐵等元素，B族維生素含量尤為突出，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為五大健康食品之一，堪稱世界水果之王，是近幾年來(lái)發(fā)展最迅速的集營(yíng)養(yǎng)與保健于一身的第3代果樹(shù)品種[1_4]。近幾年，藍(lán)莓鮮果和加工品風(fēng)靡歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家市場(chǎng)，雖然價(jià)格昂貴但仍供不應(yīng)求，其傳統(tǒng)的北美產(chǎn)區(qū)的產(chǎn)量己遠(yuǎn)不能滿足本地和世界市場(chǎng)的需求，為此世界上其他國(guó)家己先后引種。我國(guó)有著可以生產(chǎn)藍(lán)莓的廣闊天地，南方紅黃壤土地面積達(dá)2179600km2，占全國(guó)土地面積的22%，其中2040000km2 土壤屬酸性，而且很大一部分pH < 5.0[5]。由于土壤酸度大和肥力不足，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)水平較低，人民生活水平低下。藍(lán)莓特別適合酸性和強(qiáng)酸性土壤，正是紅黃壤地區(qū)脫貧致富的理想作物。奧尼爾(O' Neal)為南高叢藍(lán)莓的代表品種之一，果實(shí)大粒、蒂痕小、果粉較少、果肉質(zhì)硬耐儲(chǔ)運(yùn)、豐產(chǎn)、香味濃，在南高叢藍(lán)莓品種中香味評(píng)價(jià)較高，適宜在長(zhǎng)江流域大部分地區(qū)種植。隨著引種規(guī)模日益擴(kuò)大,優(yōu)良種苗需求量急劇增加,種苗生產(chǎn)供不應(yīng)求。組織培養(yǎng)憑借其無(wú)性繁殖的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可以迅速去除病毒和更新品種，保留品種的本來(lái)特性，變異性小，并且可在較小空間內(nèi)和較短時(shí)間內(nèi)快速地獲得大量無(wú)性系組培苗，成為藍(lán)莓脫毒和快速繁殖的主要途徑。目前，國(guó)內(nèi)外藍(lán)莓組織培養(yǎng)技術(shù)的研究己取得一定的成果，國(guó)內(nèi)在帶芽莖段誘導(dǎo)和增殖方面的研究報(bào)道較多，而國(guó)外在對(duì)葉片進(jìn)行直接再生的研究占了較大的比例。我們從帶芽莖段誘導(dǎo)增 殖、葉片直接再生、瓶?jī)?nèi)生根、到煉苗各環(huán)節(jié)就南高叢藍(lán)莓奧尼爾建立了一種適宜于藍(lán)莓苗木的工廠化育苗技術(shù)體系，以滿足商品基地建設(shè)的需要。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提出一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，組織培養(yǎng)憑借其無(wú)性繁殖的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可以迅速去除病毒和更新品種，保留品種的本來(lái)特性，變異性小，并且可在較小空間內(nèi)和較短時(shí)間內(nèi)快速地獲得大量無(wú)性系脫毒組培苗，成為藍(lán)莓脫毒和快速繁殖的主要途徑，本發(fā)明就兔眼藍(lán)莓建立了一種脫毒高速快繁的有效方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，a、選材:植物材料為智博生物科技公司種植園種植的南高叢藍(lán)莓品種奧尼爾，夕卜植體材料選用當(dāng)年生幼嫩枝；b、初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗:以田間生長(zhǎng)的當(dāng)年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片。用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，自來(lái)水沖洗。轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)上，先后用75%酒精和0.1%升汞對(duì)外植體分別進(jìn)行50s與IOmin的表面滅菌，接著用無(wú)菌水沖洗4次，2分鐘/次，最后用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，將滅菌后的嫩枝切段形成l-2cm長(zhǎng)的單芽莖段，然后放置在初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)；C、繼代培養(yǎng)的優(yōu)化:待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度激素組合的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH =5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培養(yǎng)基的改良方法是:以Ca(NO3)2.4H20、KNO3代替原WPM培養(yǎng)基中的CaCl2、K2SO4 ；d、葉片再生體系的建立:將繼代培養(yǎng)2個(gè)月的無(wú)菌苗植株葉片切下，按垂直葉片主脈離葉尖端的1/3處切下葉片分成葉尖端和葉柄端，將葉尖端、葉柄端和全葉這三部分均背面朝下分開(kāi)放置接種于不同鹽濃度和不同ZT濃度的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶各10片左右，每個(gè)處理組重復(fù)12瓶。先進(jìn)行20d的暗培養(yǎng)，暗培養(yǎng)的溫度為25±2°C,隨后進(jìn)行光照培養(yǎng),光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C,光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，從而獲得最佳的葉片再生體系；e、試管苗生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的無(wú)菌苗植株距頂端2.5 3.0cm左右切下，隨機(jī)接種于含有不同鹽濃度、不同IBA濃度和不同活性碳濃度組合的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，記錄起始生根時(shí)間，60d后統(tǒng)計(jì)生根率和生根數(shù)并觀察苗的生長(zhǎng)狀況，從而篩選 出最適宜的生根培養(yǎng)基；f、煉苗:提前3d將瓶?jī)?nèi)生根試管苗打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行過(guò)渡，洗凈根部培養(yǎng)基，隨機(jī)移栽于不同煉苗基質(zhì)，在保持濕度100%的育苗大棚中培養(yǎng)20d，然后在濕度80%、透光度70 %的室外條件下過(guò)渡3d，再逐步通風(fēng)換氣，7d后完全揭去棚膜，2周后統(tǒng)計(jì)成活率，每套基質(zhì)的栽植量不少于50株，各試驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)不少于3次，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗。優(yōu)選地，步驟b中初代培養(yǎng)基為改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉+1.0mg/L ZT，其 pH = 5.2。優(yōu)選地，步驟c中，待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度ZT、6-BA或TDZ的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH = 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)。優(yōu)選地，步驟c中，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT濃度有密切的關(guān)系；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度為0.5mg/L時(shí)，培養(yǎng)IOd左右在莖基部產(chǎn)生黃綠色的愈傷組織，節(jié)處出現(xiàn)叢生芽，28d后增殖率達(dá)到5.02倍，且主要為主枝芽，叢生芽粗壯，生長(zhǎng)勢(shì)頭好，呈鮮嫩狀；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度升高到lmg/L時(shí)，開(kāi)始生長(zhǎng)和分化的時(shí)間與0.5mg/L時(shí)相差不大，其增殖率稍有所增加；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度等于和高于2mg/L時(shí)，再生苗開(kāi)始生長(zhǎng)和分化現(xiàn)象提前，多數(shù)分化出來(lái)的新梢枝上出現(xiàn)2次枝，增殖率達(dá)到10倍左右，由于側(cè)枝芽多使苗長(zhǎng)勢(shì)較弱易出現(xiàn)玻璃化苗現(xiàn)象；使用6-BA時(shí)，外植體不萌芽生長(zhǎng)，生長(zhǎng)停滯。使用TDZ時(shí)，IOd后在外植體基部形成少量愈傷，雖然能萌芽，但萌芽率低且生長(zhǎng)緩慢；從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本等方面進(jìn)行綜合考慮，繼代培養(yǎng)基以WPM+0.5mg/L ZT為最佳。優(yōu)選地，在步驟d中，在不同鹽濃度的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，高鹽濃度不利于葉片的再生，其誘導(dǎo)再生苗率為0-2.7% ;將大量元素濃度減少一半，能明顯促進(jìn)葉片的再生，葉片誘導(dǎo)再生苗率提高至23.1-70.9% ;在葉片不同部位中，葉尖端的再生苗誘導(dǎo)率最低，葉柄端居中，全葉的誘導(dǎo)率最高。優(yōu)選地，在步驟d中，在不同濃度ZT或TDZ的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)；TDZ不能誘導(dǎo)葉片形成再生苗，葉片培養(yǎng)IOd后在切口處形成愈傷組織，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，愈傷組織慢慢褐化，未見(jiàn)再生苗形成；ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)效果明顯優(yōu)于TDZ，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT有密切的關(guān)系，ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)存在明顯的濃度效應(yīng)，葉尖端在0.5mg/L ZT時(shí)誘導(dǎo)率為0%，隨著ZT濃度的升高誘導(dǎo)率逐漸增力口，在5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率達(dá)到32.3%;葉柄端和全葉的誘導(dǎo)率均隨ZT質(zhì)量濃度的升高逐漸增加，在2.0mg/L ZT時(shí)誘導(dǎo)率均達(dá)到最高，葉柄端和全葉的再生苗誘導(dǎo)率分別為54.3%和71.4%,5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率卻均下降；不同部位葉片的再生苗誘導(dǎo)率存在明顯差異，葉尖端的誘導(dǎo)率最低，葉柄端的居中，全葉的誘導(dǎo)率最高；低濃度ZT主要誘導(dǎo)形成單生苗，而高濃度ZT有利于簇生苗的形成；葉尖端葉片誘導(dǎo)的重生苗主要形成于切口處，葉柄端和全葉誘導(dǎo)的再生苗主要形成于葉柄一側(cè)；選用全葉進(jìn)行葉片再生苗誘導(dǎo)，其再生苗誘導(dǎo)的最佳ZT質(zhì)量濃度為2.0mg/L。優(yōu)選地，在步驟e中，不同鹽濃度對(duì)單個(gè)芽苗的生根誘導(dǎo)存在重要影響，高鹽濃度不利于芽苗生根，開(kāi)始生根時(shí)間長(zhǎng)且生根率僅為30%;當(dāng)大量元素減半時(shí)，約14d后開(kāi)始生根和生根率為75% ;當(dāng)大量元素減少到原來(lái)的1/4時(shí)，開(kāi)始生根時(shí)間提前為7天左右且生根率高達(dá)100%，苗長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)；大量元素減少到原來(lái)的1/8時(shí)，雖然開(kāi)始生根時(shí)間和生根率與大量元素減少到原來(lái)的1/4的相似，然而由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏，苗長(zhǎng)勢(shì)弱，適當(dāng)降低鹽濃度有利于生根且不影響苗的生長(zhǎng)，奧尼爾試管苗瓶?jī)?nèi)生根的生根培養(yǎng)基的鹽濃度選用大量元素減少到原來(lái)的1/4。優(yōu)選地，在步驟e中 ，活性炭對(duì)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生根具有重要影響，當(dāng)培養(yǎng)基中無(wú)活性炭時(shí)，插入培養(yǎng)基中的莖基部均先長(zhǎng)愈傷組織然后在其上生根，由于根莖之間維管束不通，不久莖即停止生長(zhǎng)，葉色發(fā)紅脫落，苗長(zhǎng)勢(shì)很差；培養(yǎng)基中添加活性炭后，莖基部很少或不長(zhǎng)愈傷組織而直接從莖上生根，從而有利于苗的生長(zhǎng)；活性炭對(duì)生根存在濃度效應(yīng)，隨著活性炭濃度的升高，生根率愈高、生根數(shù)愈多且根愈長(zhǎng)，苗長(zhǎng)勢(shì)愈好；當(dāng)活性炭為0.05%時(shí)，生根率為58% -75%，每株生根數(shù)1-3條，根長(zhǎng)l-3cm，苗生長(zhǎng)較慢；當(dāng)活性炭提高至0.2%時(shí)，生根率提高20%左右，每株生根數(shù)達(dá)4條以上，根長(zhǎng)4-6cm，苗生長(zhǎng)快；IBA對(duì)奧尼爾生根也具有濃度效應(yīng)，高濃度IBA更有利于生根，活性炭與IBA兩者之間存在協(xié)同效應(yīng)，兩者濃度均高時(shí)，生根率及苗長(zhǎng)勢(shì)都愈好。在0.2%活性炭、0.6mg/L和0.8mg/L IBA的有效生根率均達(dá)到100%，但是后者起始生根的時(shí)間和根長(zhǎng)均比前者早和長(zhǎng)，后者7天左右可見(jiàn)莖基部有根形成，45天左右長(zhǎng)出4-6條根,根長(zhǎng)達(dá)6cm左右,苗高9cm以上，葉色碧綠葉片大,苗生長(zhǎng)健壯，奧尼爾瓶?jī)?nèi)生根培養(yǎng)基中最佳的活性炭濃度和IBA濃度分別為0.2%和0.8mg/L,有效生根率高達(dá)100%。優(yōu)選地,步驟f中:煉苗基質(zhì)選擇草炭:河沙=1:1 ;或者草炭:園土 = 1:1;或者草炭:石英砂=2 3:1 ;或者草炭:珍珠巖=I 2:1 ;或者純水苔蘚。優(yōu)選地，步驟f中:生根試管苗在五種不同煉苗基質(zhì)中生長(zhǎng)，其中純水苔蘚的效果最好，成活率高達(dá)100%，苗木的生長(zhǎng)量達(dá)3cm以上，新增葉片6-8枚；效果其次的是2 3: I的草炭與石英砂組合，其成活率為84%，苗木的生長(zhǎng)量較高；I: I的草炭與河沙基質(zhì)的成活率僅為50%，但成活苗的質(zhì)量卻很高，表現(xiàn)為生長(zhǎng)墩實(shí)、植株健壯、生長(zhǎng)量與“草炭+石英砂”相當(dāng)；草炭+園土基質(zhì)與草炭+珍珠巖基質(zhì)的效果居中。本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:為獲得南高叢藍(lán)莓奧尼爾高效快繁的技術(shù)體系，以?shī)W尼爾幼嫩莖段為試驗(yàn)材料，對(duì)增殖培養(yǎng)基、葉片再生體系、生根培養(yǎng)基、煉苗基質(zhì)進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，改良WPM+0.5mg/L ZT的增殖培養(yǎng)基能使新梢增殖率提高4倍以上，且叢生苗生長(zhǎng)健壯和生長(zhǎng)速度快；降低鹽濃度有利于葉片再生苗的誘導(dǎo)，全葉的再生誘導(dǎo)優(yōu)于切斷葉片的再生，前者在1/2改良WPM+2.0mg/L ZT的培養(yǎng)基中的再生率高達(dá)71%，且主要形成簇生苗；1/4改良WPM+0.2%活性碳+0.8mg/L IBA的生根培養(yǎng)基能使試管苗生根率達(dá)100% ;以水苔蘚為煉苗基質(zhì)可使幼苗的成活率高達(dá)100%。因此，將最佳的增殖培養(yǎng)、葉片再生和生根培養(yǎng)相結(jié)合，加上有效的幼苗成活基質(zhì)，可高效、快速、持續(xù)獲得優(yōu)良的奧尼爾組培種苗。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)的不同煉苗基質(zhì)對(duì)試管苗成活率的影響的柱形圖。 本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)、功能特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將結(jié)合實(shí)施例，參照附圖做進(jìn)一步說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。具體實(shí)施的一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，包括以下步驟:a、選材:植物材料為智博生物科技公司種植園種植的南高叢藍(lán)莓品種奧尼爾，夕卜植體材料選用當(dāng)年生幼嫩枝；b、初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗:以田間生長(zhǎng)的當(dāng)年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片。用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，自來(lái)水沖洗。轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)上，先后用75%酒精和0.1%升汞對(duì)外植體分別進(jìn)行50s與IOmin的表面滅菌，接著用無(wú)菌水沖洗4次，2分鐘/次，最后用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，將滅菌后的嫩枝切段形成l-2cm長(zhǎng)的單芽莖段，然后放置在初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)；C、繼代培養(yǎng)的優(yōu)化:待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度激素組合的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH =5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培養(yǎng)基的改良方法是:以Ca(NO3)2.4H20、KNO3代替原WPM培養(yǎng)基中的CaCl2、K2SO4 ；d、葉片再生體系的建立:將繼代培養(yǎng)2個(gè)月的無(wú)菌苗植株葉片切下，按垂直葉片主脈離葉尖端的1/3處切下葉片分成葉尖端和葉柄端，將葉尖端、葉柄端和全葉這三部分均背面朝下分開(kāi)放置接種于不同鹽濃度和不同ZT濃度的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶各10片左右，每個(gè)處理組重復(fù)12瓶。先進(jìn)行20d的暗培養(yǎng)，暗培養(yǎng)的溫度為25±2°C,隨后進(jìn)行光照培養(yǎng),光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C,光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，從而獲得最佳的葉片再生體系；e、試管苗生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的無(wú)菌苗植株距頂端2.5 3.0cm左右切下，隨機(jī)接種于含有不同鹽濃度、不同IBA濃度和不同活性碳濃度組合的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，記錄起始生根時(shí)間，60d后統(tǒng)計(jì)生根率和生根數(shù)并觀察苗的生長(zhǎng)狀況，從而篩選出最適宜的生根培養(yǎng)基；f、煉苗:提前3d將瓶?jī)?nèi)生根試管苗打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行過(guò)渡，洗凈根部培養(yǎng)基，隨機(jī)移栽于不同煉苗基質(zhì)，于組培室條件下保持 濕度100%的育苗大棚中培養(yǎng)20d，然后在濕度80%、透光度70%的室外條件下過(guò)渡3d，再逐步通風(fēng)換氣，7d后完全揭去棚膜，2周后統(tǒng)計(jì)成活率，每套基質(zhì)的栽植量不少于50株，各試驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)不少于3次，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗。本發(fā)明的特征在于，步驟b中初代培養(yǎng)基為改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L 日產(chǎn)瓊脂粉 +1.0mg/L ZT，其 pH = 5.2。本發(fā)明的特征在于，步驟c中，待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度ZT、6-BA或TDZ的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH = 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)。本發(fā)明的特征在于，步驟c中，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT濃度有密切的關(guān)系；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度為0.5mg/L時(shí)，培養(yǎng)IOd左右在莖基部產(chǎn)生黃綠色的愈傷組織，節(jié)處出現(xiàn)叢生芽，28d后增殖率達(dá)到5.02倍，且主要為主枝芽，叢生芽粗壯，生長(zhǎng)勢(shì)頭好，呈鮮嫩狀；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度升高到lmg/L時(shí)，開(kāi)始生長(zhǎng)和分化的時(shí)間與0.5mg/L時(shí)相差不大，其增殖率稍有所增加；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度等于和高于2mg/L時(shí)，再生苗開(kāi)始生長(zhǎng)和分化現(xiàn)象提前，多數(shù)分化出來(lái)的新梢枝上出現(xiàn)2次枝，增殖率達(dá)到10倍左右，由于側(cè)枝芽多使苗長(zhǎng)勢(shì)較弱易出現(xiàn)玻璃化苗現(xiàn)象；使用6-BA時(shí)，外植體不萌芽生長(zhǎng)，生長(zhǎng)停滯。使用TDZ時(shí)，IOd后在外植體基部形成少量愈傷，雖然能萌芽，但萌芽率低且生長(zhǎng)緩慢；從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本等方面進(jìn)行綜合考慮，繼代培養(yǎng)基以WPM+0.5mg/L ZT為最佳。本發(fā)明的特征在于，在步驟d中，在不同鹽濃度的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，高鹽濃度不利于葉片的再生，其誘導(dǎo)再生苗率為0-2.7% ;將大量元素濃度減少一半，能明顯促進(jìn)葉片的再生，葉片誘導(dǎo)再生苗率提高至23.1-70.9% ;在葉片不同部位中，葉尖端的再生苗誘導(dǎo)率最低，葉柄端居中，全葉的誘導(dǎo)率最高。本發(fā)明的特征在于，在步驟d中，在不同濃度ZT或TDZ的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)；TDZ不能誘導(dǎo)葉片形成再生苗，葉片培養(yǎng)IOd后在切口處形成愈傷組織，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，愈傷組織慢慢褐化，未見(jiàn)再生苗形成；ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)效果明顯優(yōu)于TDZ，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT有密切的關(guān)系，ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)存在明顯的濃度效應(yīng)，葉尖端在0.5mg/L ZT時(shí)誘導(dǎo)率為0%，隨著ZT濃度的升高誘導(dǎo)率逐漸增加，在5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率達(dá)到32.3%;葉柄端和全葉的誘導(dǎo)率均隨ZT質(zhì)量濃度的升高逐漸增加，在2.0mg/L ZT時(shí)誘導(dǎo)率均達(dá)到最高，葉柄端和全葉的再生苗誘導(dǎo)率分別為54.3%和71.4%,5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率卻均下降；不同部位葉片的再生苗誘導(dǎo)率存在明顯差異，葉尖端的誘導(dǎo)率最低，葉柄端的居中，全葉的誘導(dǎo)率最高；低濃度ZT主要誘導(dǎo)形成單生苗，而高濃度ZT有利于簇生苗的形成；葉尖端葉片誘導(dǎo)的重生苗主要形成于切口處，葉柄端和全葉誘導(dǎo)的再生苗主要形成于葉柄一側(cè)；選用全葉進(jìn)行葉片再生苗誘導(dǎo)，其再生苗誘導(dǎo)的最佳ZT質(zhì)量濃度為2.0mg/L。本發(fā)明的特征在于，在步驟e中，不同鹽濃度對(duì)單個(gè)芽苗的生根誘導(dǎo)存在重要影響，高鹽濃度不利于芽苗生根，開(kāi)始生根時(shí)間長(zhǎng)且生根率僅為30% ;當(dāng)大量元素減半時(shí)，約14d后開(kāi)始生根和生根率為75% ;當(dāng)大量元素減少到原來(lái)的1/4時(shí)，開(kāi)始生根時(shí)間提前為7天左右且生根率高達(dá)100%，苗長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)；大量元素減少到原來(lái)的1/8時(shí)，雖然開(kāi)始生根時(shí)間和生根率與大量元素減少到原來(lái)的1/4的相似，然而由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏，苗長(zhǎng)勢(shì)弱，適當(dāng)降低鹽濃度有利于生根且不影響苗的生長(zhǎng)，奧尼爾試管苗瓶?jī)?nèi)生根的生根培養(yǎng)基的鹽濃度選用大量元素減少到原來(lái)的1/4。本發(fā)明的特征在于，在步驟e中，活性炭對(duì)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生根具有重要影響，當(dāng)培養(yǎng)基中無(wú)活性炭時(shí)，插入培養(yǎng)基中的莖基部均先長(zhǎng)愈傷組織然后在其上生根，由于根莖之間維管束不通，不久莖即停止生長(zhǎng)，葉色發(fā)紅脫落，苗長(zhǎng)勢(shì)很差；培養(yǎng)基中添加活性炭后，莖基部很少或不長(zhǎng)愈傷組織而直接從莖上生根，從而有利于苗的生長(zhǎng)；活性炭對(duì)生根存在濃度效應(yīng)，隨著活性炭濃度的升高，生根率愈高、生根數(shù)愈多且根愈長(zhǎng)，苗長(zhǎng)勢(shì)愈好；當(dāng)活性炭為0.05%時(shí)，生根率為58% -75%，每株生根數(shù)1-3條，根長(zhǎng)l-3cm，苗生長(zhǎng)較慢；當(dāng)活性炭提高至0.2 %時(shí)，生根率提高20 %左右，每株生根數(shù)達(dá)4條以上，根長(zhǎng)4-6cm，苗生長(zhǎng)快；IBA對(duì)奧尼爾生根也具有濃度效應(yīng)，高濃度 IBA更有利于生根，活性炭與IBA兩者之間存在協(xié)同效應(yīng)，兩者濃度均高時(shí)，生根率及苗長(zhǎng)勢(shì)都愈好。在0.2%活性炭、0.6mg/L和0.8mg/L IBA的有效生根率均達(dá)到100%，但是后者起始生根的時(shí)間和根長(zhǎng)均比前者早和長(zhǎng)，后者7天左右可見(jiàn)莖基部有根形成，45天左右長(zhǎng)出4-6條根,根長(zhǎng)達(dá)6cm左右,苗高9cm以上，葉色碧綠葉片大，苗生長(zhǎng)健壯，奧尼爾瓶?jī)?nèi)生根培養(yǎng)基中最佳的活性炭濃度和IBA濃度分別為0.2%和
0.8mg/L，有效生根率高達(dá)100%。本發(fā)明的特征在于,步驟f中:煉苗基質(zhì)選擇草炭:河沙=1:1 ;或者草炭:園土 = I: I ;或者草炭:石英砂=2 3:1 ;或者草炭:珍珠巖=I 2:1 ;或者純水苔蘚。本發(fā)明的特征在于，步驟f中:生根試管苗在五種不同煉苗基質(zhì)中生長(zhǎng)，其中純水苔蘚的效果最好，成活率高達(dá)100%，苗木的生長(zhǎng)量達(dá)3cm以上，新增葉片6-8枚；效果其次的是2 3: I的草炭與石英砂組合，其成活率為84%，苗木的生長(zhǎng)量較高；I: I的草炭與河沙基質(zhì)的成活率僅為50%，但成活苗的質(zhì)量卻很高，表現(xiàn)為生長(zhǎng)墩實(shí)、植株健壯、生長(zhǎng)量與“草炭+石英砂”相當(dāng)；草炭+園土基質(zhì)與草炭+珍珠巖基質(zhì)的效果居中。具體實(shí)施時(shí):I材料與方法1.1 材料植物材料為智博生物科技公司種植園種植的南高叢藍(lán)莓品種奧尼爾(O' Neal)。外植體材料選用當(dāng)年生幼嫩枝。1.2 方法1.2.1初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗以田間生長(zhǎng)的當(dāng)年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片。用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，自來(lái)水沖洗。轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)上，先后用75%酒精和0.1%升汞對(duì)外植體分別進(jìn)行50s與IOmin的表面滅菌,接著用無(wú)菌水沖洗4次,2分鐘/次,最后用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分。將枝條切成l_2cm長(zhǎng)的單芽莖段，在無(wú)菌條件下將單芽莖段接種于改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉+1.0mg/L ZT的初代培養(yǎng)基中，初代培養(yǎng)基的pH =
5.2，進(jìn)行光照培養(yǎng)，誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)，培養(yǎng)30d后莖段腋芽伸長(zhǎng)5cm以上，著生4_5片葉。光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗。1.2.2繼代培養(yǎng)的優(yōu)化
將初代培養(yǎng)獲得的無(wú)菌苗切下，切成單芽莖段后轉(zhuǎn)接于不同激素濃度的改良WPM培養(yǎng)基(各處理激素濃度組合見(jiàn)表l)+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH= 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)，培養(yǎng)40d后觀察芽的增殖倍數(shù)和生長(zhǎng)狀況。光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗。改良WPM培養(yǎng)基具體改良方法:以Ca (NO3) 2.4H20、KNO3 代替原 WPM 培養(yǎng)基中的 CaCl2、K2S04。1.2.2葉片再生體系的建立將繼代培養(yǎng)2個(gè)月的無(wú)菌苗植株葉片切下，按垂直葉片主脈離葉尖端的1/3處切下葉片分成葉尖端和葉柄端，將葉尖端、葉柄端以及全葉這三部分均背面朝下分開(kāi)放置接種于不同鹽濃度(各處理鹽濃度見(jiàn)表2)和不同ZT濃度(各處理ZT濃度見(jiàn)表3)的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶各10片左右，每個(gè)處理組重復(fù)12瓶。先進(jìn)行20d的暗培養(yǎng)(溫度25±2°C )，隨后進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗。30d后統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，從而獲得最佳的葉片再生體系。1.2.3試管苗生根培養(yǎng)將繼代培養(yǎng)的無(wú)菌苗植株距頂端2.5 3.0cm左右切下，隨機(jī)接種于含有不同鹽濃度(各處理鹽濃度組合見(jiàn)表4)、不同IBA濃度和不同活性碳濃度組合(各IBA濃度和活性碳濃度組合見(jiàn)表5)的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)(光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗)，記錄起始生根時(shí)間，60d后統(tǒng)計(jì)生根率和生根數(shù)并觀察苗的生長(zhǎng)狀況，從而篩選出最適宜的的生根培養(yǎng)基。1.2.4 煉苗提前3d將瓶?jī)?nèi)生根試管苗打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行過(guò)渡，洗凈根部培養(yǎng)基，隨機(jī)移栽于不同煉苗基質(zhì)(各基質(zhì)組合見(jiàn)圖1)，在保持濕度100%的育苗大棚中培養(yǎng)20d，然后在濕度80%、透光度70%的室外條件下過(guò)渡3d，再逐步通風(fēng)換氣，7d后完全揭去棚膜，2周后統(tǒng)計(jì)成活率。每套基質(zhì)的栽植量不少于50株。各試驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)不少于3次，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗。2結(jié)果與分析2.1繼代培養(yǎng)的優(yōu)化將獲得的無(wú)菌苗切成單芽莖段轉(zhuǎn)接到不同激素濃度的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)基優(yōu)化。表I的結(jié)果表明，ZT的增殖效果明顯優(yōu)于6-BA和TDZ。在ZT中，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT有密切的關(guān)系。當(dāng)ZT質(zhì)量濃度為0.5mg/L時(shí)，培養(yǎng)IOd左右在莖基部產(chǎn)生黃綠色的愈傷組織，節(jié)處出現(xiàn)叢生芽，28d后增殖率達(dá)到5.02倍，且主要為主枝芽，叢生芽粗壯，生長(zhǎng)勢(shì)頭好，呈鮮嫩狀。當(dāng)ZT質(zhì)量濃度升高到lmg/L時(shí)，開(kāi)始生長(zhǎng)和分化的時(shí)間與0.5mg/L時(shí)相差不大，其增殖率稍有所增加。當(dāng)ZT質(zhì)量濃度等于和高于2mg/L時(shí)，再生苗開(kāi)始生長(zhǎng)和分化現(xiàn)象提前，多數(shù)分化出來(lái)的新梢枝上出現(xiàn)2次枝，增殖率達(dá)到10倍左右，由于側(cè)枝芽多使苗長(zhǎng)勢(shì)較弱易出現(xiàn)玻璃化苗現(xiàn)象。WPM與其它激素組合效果均差于WPM+ZT組合。使用6-BA時(shí)，外植體不萌芽生長(zhǎng)，生長(zhǎng)停滯。使用TDZ時(shí)，IOd后在外植體基部形成少量愈傷，雖然能萌芽，但萌芽率低且生長(zhǎng)緩慢。因此，從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本等方面進(jìn)行綜合考慮，繼代培養(yǎng)基以WPM+0.5mg/L ZT為最佳。表I不同激素濃度對(duì)藍(lán)莓芽增殖的影響
權(quán)利要求
1.一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于， a、選材:植物材料為智博生物科技公司種植園種植的南高叢藍(lán)莓品種奧尼爾，外植體材料選用當(dāng)年生幼嫩枝； b、初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗:以田間生長(zhǎng)的當(dāng)年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片。用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，自來(lái)水沖洗。轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)上，先后用75%酒精和0.1%升汞對(duì)外植體分別進(jìn)行50s與IOmin的表面滅菌，接著用無(wú)菌水沖洗4次，2分鐘/次，最后用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，將滅菌后的嫩枝切段形成l-2cm長(zhǎng)的單芽莖段，然后放置在初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)； C、繼代培養(yǎng)的優(yōu)化:待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度激素組合的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH = 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25+2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培養(yǎng)基的改良方法是:以Ca (NO3) 2.4H20、KNO3代替原WPM培養(yǎng)基中的CaCl2、K2SO4 ； d、葉片再生體系的建立:將繼代培養(yǎng)2個(gè)月的無(wú)菌苗植株葉片切下，按垂直葉片主脈尚葉尖纟而的1/3處切下葉片分成葉尖纟而和葉柄將葉尖葉柄％5和全葉這二部分均背面朝下分開(kāi)放置接種于不同鹽濃度和不同ZT濃度的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶各10片左右，每個(gè)處理組重復(fù)12瓶。先進(jìn)行20d的暗培養(yǎng)，暗培養(yǎng)的溫度為25±2°C,隨后進(jìn)行光照培養(yǎng),光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C,光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，從而獲得最佳的葉片再生體系； e、試管苗生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的無(wú)菌苗植株距頂端2.5 3.0cm左右切下，隨機(jī)接種于含有不同鹽濃度、不同IBA濃度和不同活性碳濃度組合的改良WPS培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH = 5.2)的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光強(qiáng)2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，記錄起始生根時(shí)間，60d后統(tǒng)計(jì)生根率和生根數(shù)并觀察苗的生長(zhǎng)狀況，從而篩選出 最適宜的生根培養(yǎng)基； f、煉苗:提前3d將瓶?jī)?nèi)生根試管苗打開(kāi)瓶蓋進(jìn)行過(guò)渡，洗凈根部培養(yǎng)基，隨機(jī)移栽于不同煉苗基質(zhì)，在保持濕度100%的育苗大棚中培養(yǎng)20d，然后在濕度80%、透光度70%的室外條件下過(guò)渡3d，再逐步通風(fēng)換氣，7d后完全揭去棚膜，2周后統(tǒng)計(jì)成活率，每種基質(zhì)的栽植量不少于50株，各試驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)不少于3次，統(tǒng)計(jì)成活率，以完成煉苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，步驟b中初代培養(yǎng)基為改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉+1.0mg/L ZT，其pH = 5.2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，步驟c中，待單芽莖段的莖段腋芽伸長(zhǎng)后，將莖段腋芽切下轉(zhuǎn)接于含有不同濃度ZT、6-BA或TDZ的改良WPM培養(yǎng)基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產(chǎn)瓊脂粉的增殖培養(yǎng)基(pH = 5.2)中進(jìn)行光照培養(yǎng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，步驟c中，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT濃度有密切的關(guān)系；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度為0.5mg/L時(shí)，培養(yǎng)IOd左右在莖基部產(chǎn)生黃綠色的愈傷組織，節(jié)處出現(xiàn)叢生芽，28d后增殖率達(dá)到5.02倍，且主要為主枝芽，叢生芽粗壯，生長(zhǎng)勢(shì)頭好，呈鮮嫩狀；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度升高到lmg/L時(shí)，開(kāi)始生長(zhǎng)和分化的時(shí)間與0.5mg/L時(shí)相差不大，其增殖率稍有所增加；當(dāng)ZT質(zhì)量濃度等于和高于2mg/L時(shí)，再生苗開(kāi)始生長(zhǎng)和分化現(xiàn)象提前，多數(shù)分化出來(lái)的新梢枝上出現(xiàn)2次枝，增殖率達(dá)到10倍左右，由于側(cè)枝芽多使苗長(zhǎng)勢(shì)較弱易出現(xiàn)玻璃化苗現(xiàn)象；使用6-BA時(shí)，外植體不萌芽生長(zhǎng)，生長(zhǎng)停滯。使用TDZ時(shí)，IOd后在外植體基部形成少量愈傷，雖然能萌芽，但萌芽率低且生長(zhǎng)緩慢；從增殖率、叢生芽長(zhǎng)勢(shì)、玉米素成本等方面進(jìn)行綜合考慮，繼代培養(yǎng)基以WPM+0.5mg/L ZT 為最佳。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于， 在步驟d中，在不同鹽濃度的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)，高鹽濃度不利于葉片的再生，其誘導(dǎo)再生苗率為0-2.7% ;將大量元素濃度減少一半，能明顯促進(jìn)葉片的再生，葉片誘導(dǎo)再生苗率提高至23.1-70.9% ;在葉片不同部位中，葉尖端的再生苗誘導(dǎo)率最低，葉柄端居中，全葉的誘導(dǎo)率最高。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，在步驟d中，在不同濃度ZT或TDZ的培養(yǎng)瓶中統(tǒng)計(jì)葉片出芽率及每個(gè)葉片相應(yīng)形成的苗數(shù)；TDZ不能誘導(dǎo)葉片形成再生苗，葉片培養(yǎng)IOd后在切口處形成愈傷組織，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，愈傷組織慢慢褐化，未見(jiàn)再生苗形成；ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)效果明顯優(yōu)于TDZ，不定芽的發(fā)生率與培養(yǎng)基中的ZT有密切的關(guān)系，ZT對(duì)葉片再生苗誘導(dǎo)存在明顯的濃度效應(yīng)，葉尖端在0.5mg/LZT時(shí)誘導(dǎo)率為0%，隨著ZT濃度的升高誘導(dǎo)率逐漸增加，在5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率達(dá)到32.3%;葉柄端和全葉的誘導(dǎo)率均隨ZT質(zhì)量濃度的升高逐漸增加，在2.0mg/L ZT時(shí)誘導(dǎo)率均達(dá)到最高，葉柄端和全葉的再生苗誘導(dǎo)率分別為54.3%和71.4%,5mg/L ZT時(shí)的誘導(dǎo)率卻均下降；不同部位葉片的再生苗誘導(dǎo)率存在明顯差異，葉尖端的誘導(dǎo)率最低，葉柄端的居中，全葉的誘導(dǎo)率最高；低濃度ZT主要誘導(dǎo)形成單生苗，而高濃度ZT有利于簇生苗的形成；葉尖端葉片誘導(dǎo)的重生苗主要形成于切口處，葉柄端和全葉誘導(dǎo)的再生苗主要形成于葉柄一側(cè)；選用全葉進(jìn)行葉片再生苗誘導(dǎo)，其再生苗誘導(dǎo)的最佳ZT質(zhì)量濃度為2.0mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，在步驟e中，不同鹽濃度對(duì)單個(gè)芽苗的生根誘導(dǎo)存在重要影響，高鹽濃度不利于芽苗生根，開(kāi)始生根時(shí)間長(zhǎng)且生根率僅為30%;當(dāng)大量元素減半時(shí)，約14d后開(kāi)始生根和生根率為75%;當(dāng)大量元素減少到原來(lái)的1/4時(shí)，開(kāi)始生根 時(shí)間提前為7天左右且生根率高達(dá)100%，苗長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)；大量元素減少到原來(lái)的1/8時(shí)，雖然開(kāi)始生根時(shí)間和生根率與大量元素減少到原來(lái)的1/4的相似，然而由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏，苗長(zhǎng)勢(shì)弱，適當(dāng)降低鹽濃度有利于生根且不影響苗的生長(zhǎng)，奧尼爾試管苗瓶?jī)?nèi)生根的生根培養(yǎng)基的鹽濃度選用大量元素減少到原來(lái)的1/4。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，在步驟e中，活性炭對(duì)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生根具有重要影響，當(dāng)培養(yǎng)基中無(wú)活性炭時(shí)，插入培養(yǎng)基中的莖基部均先長(zhǎng)愈傷組織然后在其上生根，由于根莖之間維管束不通，不久莖即停止生長(zhǎng)，葉色發(fā)紅脫落，苗長(zhǎng)勢(shì)很差；培養(yǎng)基中添加活性炭后，莖基部很少或不長(zhǎng)愈傷組織而直接從莖上生根，從而有利于苗的生長(zhǎng)；活性炭對(duì)生根存在濃度效應(yīng)，隨著活性炭濃度的升高，生根率愈高、生根數(shù)愈多且根愈長(zhǎng)，苗長(zhǎng)勢(shì)愈好；當(dāng)活性炭為0.05%時(shí)，生根率為58% -75%，每株生根數(shù)1-3條，根長(zhǎng)l-3cm，苗生長(zhǎng)較慢；當(dāng)活性炭提高至0.2 %時(shí)，生根率提高20 %左右，每株生根數(shù)達(dá)4條以上，根長(zhǎng)4-6cm，苗生長(zhǎng)快；IBA對(duì)奧尼爾生根也具有濃度效應(yīng)，高濃度IBA更有利于生根，活性炭與IBA兩者之間存在協(xié)同效應(yīng)，兩者濃度均高時(shí)，生根率及苗長(zhǎng)勢(shì)都愈好。在0.2%活性炭、0.6mg/L和0.8mg/L IBA的有效生根率均達(dá)到100%，但是后者起始生根的時(shí)間和根長(zhǎng)均比前者早和長(zhǎng)，后者7天左右可見(jiàn)莖基部有根形成，45天左右長(zhǎng)出4-6條根，根長(zhǎng)達(dá)6cm左右，苗高9cm以上，葉色碧綠葉片大，苗生長(zhǎng)健壯，奧尼爾瓶?jī)?nèi)生根培養(yǎng)基中最佳的活性炭濃度和IBA濃度分別為0.2%和0.8mg/L，有效生根率高達(dá)100%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，步驟f中:煉苗基質(zhì)選擇草炭:河沙=1:1 ;或者草炭:園土 = 1:1 ;或者草炭:石英砂=2 3: I ；或者草炭:珍珠巖=I 2:1 ;或者純水苔蘚。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，其特征在于，步驟f中:生根試管苗在五種不同煉苗基質(zhì)中生長(zhǎng)，其中純水苔蘚的效果最好，成活率高達(dá)100%，苗木的生長(zhǎng)量達(dá)3cm以上，新增葉片6-8枚；效果其次的是2 3:1的草炭與石英砂組合，其成活率為84%，苗木的生長(zhǎng)量較高；1: I的草炭與河沙基質(zhì)的成活率僅為50%，但成活苗的質(zhì)量卻很高，表現(xiàn)為生長(zhǎng)墩實(shí)、植株健壯、生長(zhǎng)量與“草炭+石英砂”相當(dāng)；草炭+園土基質(zhì)與草炭+珍珠巖基質(zhì)的 效果居中。
全文摘要
一種適宜南高叢藍(lán)莓高效快繁技術(shù)，采用以下步驟獲得優(yōu)良的培種苗a、選材；b、初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗；c、繼代培養(yǎng)的優(yōu)化；d、葉片再生體系的建立；e、試管苗生根培養(yǎng)。本發(fā)明以?shī)W尼爾幼嫩莖段為試驗(yàn)材料，對(duì)增殖培養(yǎng)基、葉片再生體系、生根培養(yǎng)基、煉苗基質(zhì)進(jìn)行了優(yōu)化。將最佳的增殖培養(yǎng)、葉片再生和生根培養(yǎng)相結(jié)合，加上有效的幼苗成活基質(zhì)，可高效、快速、持續(xù)獲得優(yōu)良的奧尼爾組培種苗。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103222425SQ20131005503
公開(kāi)日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月21日
發(fā)明者邱義蘭, 劉如石 申請(qǐng)人:邱義蘭