專利名稱:番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)基,尤其涉及ー種番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。
背景技術(shù):
番木瓜(Carica papaya L.)是著名的熱帶、亞熱帶水果之一,是ー種廣泛分布于世界熱帶、亞熱帶地區(qū)的多年生常綠果樹作物,其因生長(zhǎng)快速、結(jié)果早、產(chǎn)量高,成為我國(guó)南部及世界熱帶地區(qū)最普遍栽培的果樹種之一,在我國(guó)廣東、廣西、福建、臺(tái)灣等地廣泛種植。它具有重要的食用和エ業(yè)價(jià)值,是當(dāng)前發(fā)展熱帶高效農(nóng)業(yè)的重要推廣項(xiàng)目和熱帶農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整項(xiàng)目之一。番木瓜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,含可溶性固形物12%,每IOOg果肉含有維生素A,B1,B2,C和G 60-122mg。未熟青果的乳汁中,含有大量的“木瓜酵素(papain)”,作為肉類軟嫩劑可助消化。用途廣,除成熟的果實(shí)作為果品供鮮食,青果作為蔬菜 食用外,還可加工腌潰或制成蜜餞、果脯、果醬和果汁等。成熟的果實(shí)還可制造胃藥,未熟的果實(shí)含有豐富的木瓜蛋白酶,可用來軟化肉類、幫助消化;在醫(yī)藥上可用作制造蛋白脈;在飲料エ業(yè)上可作澄清劑;在化妝エ業(yè)上可用來制造面膏、洗發(fā)水等。未成熟的果實(shí)和肉質(zhì)根也可作為飼料,可見本發(fā)明不僅能促進(jìn)番木瓜的生產(chǎn),而且將極大刺激食品加工、醫(yī)藥衛(wèi)生、美容保健和養(yǎng)殖業(yè)等相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。番木瓜株性復(fù)雜,有雄性、雌性和兩性株3種株型,生產(chǎn)中作為水果須種植兩性株,而作為木瓜酶生產(chǎn)以雌株為好。番木瓜以種子繁育的植株性別表現(xiàn)較遲,目前還沒有快速、簡(jiǎn)便和有效的早期鑒定方法,用種子繁育實(shí)生苗很大程度影響了生產(chǎn)。另外,優(yōu)質(zhì)番木瓜的種子價(jià)格十分昂貴,且不耐貯藏,易感染病蟲害,采用扦插、嫁接等常規(guī)的無性繁殖技術(shù)成活率又低,不適合番木瓜的快速繁殖。因此,通過組培技術(shù)快速繁殖番木瓜株性一致的優(yōu)良種苗倍受關(guān)注。大量研究表明,番木瓜利用組培快繁技術(shù)育苗是非常理想的途徑,具有保持優(yōu)良品種的遺傳穩(wěn)定性;生產(chǎn)無病種苗的優(yōu)點(diǎn);種苗繁殖迅速等特點(diǎn)。目前,國(guó)內(nèi)已有許多番木瓜組培技術(shù)研究報(bào)道,在生產(chǎn)應(yīng)用上也初具規(guī)模。但是,番木瓜品種繁多,不同的品種對(duì)培養(yǎng)基的要求不同,一般エ廠化生產(chǎn)同時(shí)生產(chǎn)幾個(gè)品種,如果ー個(gè)品種使用一種培養(yǎng)基,生產(chǎn)操作難度大,成本高,不利于規(guī)模化生產(chǎn)。目前繼代培養(yǎng)基重點(diǎn)是芽分化,但能用于生根誘導(dǎo)的芽(即有效芽)卻很少,且芽的質(zhì)量也不好,細(xì)弱、矮、黃葉;生根培養(yǎng)基配方很多,但是出根不整齊,不穩(wěn)定,根系愈傷化,數(shù)量少等,由于存在以上問題,番木瓜組培育苗成本高,エ廠化生產(chǎn)比較困難。在培養(yǎng)基的選擇上一般采用基本培養(yǎng)基(MS)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的結(jié)合,基本培養(yǎng)基一般設(shè)I / 2MS、MS、3 / 2MS等3種,生長(zhǎng)調(diào)節(jié)齊IJ選用IBA(吲哚丁酸)和NAA(萘こ酸)兩種,但是繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的側(cè)重點(diǎn)不一祥,如不區(qū)分,得到的苗生根率低,根膨化,愈傷組織多,且葉片黃花等,存在很多不足。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供ー種番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基、第一歩生根培養(yǎng)基和第二步生根培養(yǎng)基,其中
每升(L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸ニ氫鉀 325mg/L、氯化鈣 500mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ;(3)有機(jī)物甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇O. 5mg/L、煙酸O. 5mg/L、肌醇 100. Omg/L ;(4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6_芐基腺嘌呤O. 35-0. 45mg/L、萘こ酸O. 15-0. 25mg/L ;余量為蒸餾水。
每升(L)第一歩生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸ニ氫鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ;(3)有機(jī)物甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ;(4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑萘こ酸0. 1-0. 2mg/L、吲哚丁酸I. 0-2. 0mg/L ;(5)其他添加物活性炭2. 0-3. 0mg/L ;余量為蒸餾水。每升(L)第二步生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸ニ氫鉀 lllmg/L、氯化I丐 245mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉0. 025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 0. 83mg/L ;(3)有機(jī)物甘氨酸2. 0mg/L、鹽酸硫胺素10. 0mg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ;(4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑卩引哚丁酸0. 1-0. 2mg/L ;(5)其他添加物活性炭3. 0-4. 0mg/L ;余量為蒸餾水。本發(fā)明番木瓜培養(yǎng)基中的繼代培養(yǎng)基的配制方法為(I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液;(2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液,即混合母液;(3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖30g/L,瓊脂3. 0g/L ;(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解;(5)然后加入量好的混合母液,用水定容,攪拌均勻;(6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;
(7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶,蓋上瓶蓋,擰緊;(8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋,在121. 6°C,O. IMPa下滅菌20分鐘;(9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固,此時(shí)的培養(yǎng)基可以使用。本發(fā)明番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的第一步生根培養(yǎng)基的配制方法為((I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液、活性炭;(2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液,即混合母液;(3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖15g/L,瓊脂3.2g/L;(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解; (5)然后加入量好的混合母液,用水定容,攪拌均勻;(6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;(7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶,蓋上瓶蓋,擰緊;(8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋,在121. 6°C,O. IMPa下滅菌20分鐘;(9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固,此時(shí)的培養(yǎng)基可以使用。本發(fā)明番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的第二步生根培養(yǎng)基的配制方法為(I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液、活性炭;(2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液,即混合母液;(3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖15g/L,瓊脂3. 4g/L ;(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解;(5)然后加入量好的混合母液,用水定容,攪拌均勻;(6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;(7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)袋,用三角架固定,夾緊;(8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋,在121. 6°C,O. IMPa下滅菌17分鐘;(9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固,此時(shí)的培養(yǎng)基可以使用。本發(fā)明番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)的方法為(I)先弱光培養(yǎng)7至8天,繼代苗切ロ愈合,頂芽上挺,分化出側(cè)芽,苗木恢復(fù)長(zhǎng)勢(shì);(2)然后強(qiáng)光培養(yǎng)8至12天,頂芽側(cè)芽高3厘米以上,葉片舒展,莖干半木質(zhì)化。此時(shí)的芽即可用于生根培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度保持在25-30°C。本發(fā)明番木瓜培養(yǎng)基第一步生根培養(yǎng)的方法為(I)暗培養(yǎng)5至7天,生根苗基部膨脹,形成根原基。溫度要求比較粗放,不低于15°C即可,最佳溫度25-30°C。(2)此時(shí)的生根苗轉(zhuǎn)入第二步生根培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。本發(fā)明番木瓜培養(yǎng)基第二步生根培養(yǎng)的方法為(I)強(qiáng)光培養(yǎng)10至15天,室溫培養(yǎng)即可。(2)此時(shí)生根苗高4-5厘米,根系5條以上,葉片舒展,苗莖木質(zhì)化,即可出圃移植。與目前現(xiàn)有技術(shù)的番木瓜組織培養(yǎng)基相比,本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
權(quán)利要求
1.一種番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基、第一步生根培養(yǎng)基和第二步生根培養(yǎng)基,其特征在于 每升(L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸二氫鉀325mg/L、氯化I丐 500mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅 8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉O.025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ; (3)有機(jī)物甘氨酸2.Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇O. 5mg/L、煙酸O. 5mg/L、肌醇 100. Omg/L ;(4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6_芐基腺嘌呤O.35-0. 45mg/L、萘乙酸O. 15-0. 25mg/L ; 余量為蒸餾水。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,其特征在于 每升(L)第一步生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫鉀222mg/L、氯化I丐 490mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉O.025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ; (3)有機(jī)物甘氨酸2.Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ; (4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑萘乙酸O.1-0. 2mg/L、吲哚丁酸I. 0-2. 0mg/L ; (5)其他添加物活性炭2.0-3. 0mg/L ; 余量為蒸餾水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,其特征在于 每升(L)第二步生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸二氫鉀lllmg/L、氯化I丐 245mg/L ;(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉·0.025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵·27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ; (3)有機(jī)物甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10. 0mg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ; (4)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑噴哚丁酸0.1-0. 2mg/L ; (5)其他添加物活性炭3.0-4. 0mg/L ; 余量為蒸餾水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種番木瓜組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基、第一步生根培養(yǎng)基和第二步生根培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的選擇上一般采用基本培養(yǎng)基(MS)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的結(jié)合,側(cè)重點(diǎn)不一樣,具有縮短了繼代周期,芽的質(zhì)量好,得到的苗生根率高,出根能力強(qiáng),愈傷組織少,葉片深綠色等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102835315SQ201210363438
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者時(shí)群, 李清香, 黃永欽, 陳麗文, 何克欽, 勞贊新, 賴崇健, 陳艷, 黃彥妮, 李芳菲, 梁乃光 申請(qǐng)人:欽州市林業(yè)科學(xué)研究所