專利名稱：一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法。
背景技術(shù)：
番薯(Ipomoea batatas Lam.)是一種重要的糧食、飼料和工業(yè)原料作物，具有產(chǎn)量高、營養(yǎng)豐富、穩(wěn)產(chǎn)性好等優(yōu)點(diǎn)。然而，由于番薯病毒病的廣泛存在，以及生產(chǎn)中番薯以薯塊進(jìn)行無性繁殖，造成病毒病的蔓延，從而造成番薯產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降、種性退化。目前科研上主要通過莖尖離體培養(yǎng)獲得脫毒種苗，但此方法運(yùn)用于產(chǎn)業(yè)化大批量生產(chǎn)，擴(kuò)繁速度慢，變異率高，生產(chǎn)成本高
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種方法簡單、成本低、變異率低、擴(kuò)繁速度快、縮短了繁殖周期的高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟(I)材料培養(yǎng)從大田取回待脫毒番薯的20 30 cm長的莖段，扦插在大棚培養(yǎng)基上，讓其生長新枝；過程中，每星期澆一次營養(yǎng)液，每5天用50%多菌靈或百菌清500倍噴葉及周圍環(huán)境，每天晚上用75%酒精噴一次周圍環(huán)境，以保棚內(nèi)環(huán)境清潔；待新長出的枝長到8 10 cm時(shí)，剪下新枝，重新扦插到新的培養(yǎng)基上，用同樣的方法讓它長出新枝；(2)材料消毒待二次扦插苗的新枝長到8 Cm以上時(shí)，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺(tái)，用75%酒精浸19 20秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗4 5次；(3)外植體芽誘導(dǎo)切取I Cm消毒過的外植體的腋節(jié)位接種到外植體芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天時(shí)間的暗培養(yǎng)，溫度設(shè)28±2°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上；(4)繼代增值培養(yǎng)外植體培養(yǎng)25天，薯苗長至3 Cm 6 Cm時(shí)，取每株生長點(diǎn)2 4_單獨(dú)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，剩余莖段單節(jié)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天暗培養(yǎng)，溫度設(shè)28±2°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上；三天后便可生根，下代再取生長點(diǎn)和單節(jié)莖段培養(yǎng)，12 15天或20天繼代一次，增殖系數(shù)可達(dá)4 5倍；(5)病毒檢測(cè)增殖第三、四代后便進(jìn)行病毒檢測(cè)，首先采用目測(cè)法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機(jī)抽樣采用指示植物法進(jìn)行鑒定，隨機(jī)抽樣脫毒率低于100%，則加大培養(yǎng)代數(shù)，直至隨機(jī)抽樣脫毒率達(dá)100% ；(6)生根培養(yǎng)取每株生長點(diǎn)2 4mm接到生根培養(yǎng)基，增強(qiáng)光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，或放在自然光下培養(yǎng)生根；(7)煉苗、移栽生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)土，然后再蓋一層拱膜，每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培養(yǎng)土濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。外殖體芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA O O. 5mg/L+IBA O O. 5mg/L+糖30g+活性碳3 6g+瓊脂6g ； 繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g ；生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳3 6g。本發(fā)明根據(jù)病毒在植株頂端生長點(diǎn)的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于植株下部的成熟部位的原理，加大取生長點(diǎn)的代數(shù)，達(dá)到脫毒的目的。本發(fā)明采用低激素濃度、改良MS基本培養(yǎng)基和三天的暗培養(yǎng)的方法，大大降低了脫毒組培苗的變異率，加快了組培苗的生長速度，縮短了繁殖周期，擴(kuò)繁速度高，生產(chǎn)成本低。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟I、材料培養(yǎng)從大田取回待脫毒番薯的20 30 cm長的莖段，扦插在大棚基質(zhì)上，讓其生長新枝。過程中，每星期澆一次營養(yǎng)液，每5天用50%多菌靈(或百菌清)500倍噴葉及周圍環(huán)境，周圍環(huán)境最好每天下班前用75%酒精每天晚上噴一次，以保棚內(nèi)環(huán)境清潔。待新枝長到8 10 Cm時(shí)，剪下新枝，重新扦插到新的基質(zhì)，用同樣的方法讓它長出新枝。2、材料消毒待二次扦插苗的新枝長到8 Cm以上時(shí)，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封好，拿到工作臺(tái)前，用75%酒精浸20秒左右，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗4 5次。3、外植體芽誘導(dǎo)切取I Cm左右的消毒過的外植體的腋節(jié)位接種到外植體芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天時(shí)間的暗培養(yǎng)，溫度設(shè)(28±2)°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上。4、繼代增殖培養(yǎng)外植體培養(yǎng)25天左右，薯苗長至3 Cm 6 Cm時(shí)，取每株生長點(diǎn)2 4mm左右單獨(dú)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，剩余莖段單節(jié)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天暗培養(yǎng)，溫度設(shè)(28±2)°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上。三天后便可生根，下代再取生長點(diǎn)和單節(jié)莖段培養(yǎng)，一般12 15天或20天繼代一次都可，增殖系數(shù)可達(dá)4 5倍。5、病毒檢測(cè)一般增殖第三、四代后便可進(jìn)行病毒檢測(cè)。首先采用目測(cè)法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機(jī)抽樣采用指示植物法進(jìn)行鑒定。隨機(jī)抽樣脫毒率低于100%，則加大培養(yǎng)代數(shù)，直至隨機(jī)抽樣脫毒率達(dá)100%。6、生根培養(yǎng)取每株生長點(diǎn)2 4_左右接到生根培養(yǎng)基，增強(qiáng)光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，或放在自然光下培養(yǎng)生根。7、煉苗、移栽生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)土。然后再蓋一層拱膜，但每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培養(yǎng)土濕潤，濕度在80 85%左右，不能過大，否則容易腐爛，待其長到5 8片新葉即可移栽大田。培養(yǎng)基配方外殖體芽誘導(dǎo)MS+6_BAO O. 5mg/L+IBA O 0.5mg/L+糖 30g+活性碳 3 6g+瓊脂6g繼代增殖培養(yǎng)改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g生根培養(yǎng)改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳3 6g。表I.本發(fā)明的方法和普通莖尖培養(yǎng)的比較
權(quán)利要求
1.一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)材料培養(yǎng) 從大田取回待脫毒番薯的20 30 Cm長的莖段，扦插在大棚培養(yǎng)基上，讓其生長新枝；過程中，每星期澆一次營養(yǎng)液，每5天用50%多菌靈或百菌清500倍噴葉及周圍環(huán)境，每天晚上用75%酒精噴一次周圍環(huán)境，以保棚內(nèi)環(huán)境清潔；待新長出的枝長到8 10 cm時(shí)，剪下新枝，重新扦插到新的培養(yǎng)基上，用同樣的方法讓它長出新枝； (2)材料消毒 待二次扦插苗的新枝長到8 cm以上時(shí)，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺(tái)，用75%酒精浸19 20秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘， 最后用無菌水沖洗4 5次； (3)外植體芽誘導(dǎo) 切取I cm消毒過的外植體的腋節(jié)位接種到外植體芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天時(shí)間的暗培養(yǎng)，溫度設(shè)28±2°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上； (4)繼代增值培養(yǎng) 外植體培養(yǎng)25天，薯苗長至3 cm 6 cm時(shí)，取每株生長點(diǎn)2 4mm單獨(dú)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，剩余莖段單節(jié)培養(yǎng)于繼代增殖培養(yǎng)基，接種后進(jìn)行三天暗培養(yǎng)，溫度設(shè)28±2°C，在光周期16小時(shí)以上，光強(qiáng)2000LX以上；三天后便可生根，下代再取生長點(diǎn)和單節(jié)莖段培養(yǎng)，12 15天或20天繼代一次，增殖系數(shù)可達(dá)4 5倍； (5)病毒檢測(cè) 增殖第三、四代后便進(jìn)行病毒檢測(cè)，首先采用目測(cè)法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機(jī)抽樣采用指示植物法進(jìn)行鑒定，隨機(jī)抽樣脫毒率低于100%，則加大培養(yǎng)代數(shù)，直至隨機(jī)抽樣脫毒率達(dá)100% ； (6)生根培養(yǎng) 取每株生長點(diǎn)2 4mm接到生根培養(yǎng)基，增強(qiáng)光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，或放在自然光下培養(yǎng)生根； (7)煉苗、移栽 生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)土，然后再蓋一層拱膜，每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培養(yǎng)土濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。
2.如權(quán)利要求I所述的一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法，其特征在于 外殖體芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA O O. 5mg/L+IBA O O. 5mg/L+糖30g+活性碳3 6g+瓊脂6g ； 繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g ； 生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳.3 6g0
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟(1)材料培養(yǎng)(2)材料消毒(3)外植體芽誘導(dǎo)(4)繼代增值培養(yǎng)(5)病毒檢測(cè)(6)生根培養(yǎng)(7)煉苗、移栽。本發(fā)明根據(jù)病毒在植株頂端生長點(diǎn)的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于植株下部的成熟部位的原理，加大取生長點(diǎn)的代數(shù)，達(dá)到脫毒的目的。本發(fā)明采用低激素濃度、改良MS基本培養(yǎng)基和三天的暗培養(yǎng)的方法，大大降低了脫毒組培苗的變異率，加快了組培苗的生長速度，縮短了繁殖周期，擴(kuò)繁速度高，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102860259SQ20121036341
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者朱紅林, 王效寧, 劉迪, 孟衛(wèi)東, 齊蘭 申請(qǐng)人:海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所