專利名稱：灰氈毛忍冬渝蕾1號種苗的組織培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物種苗的組織培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
灰租毛忍冬(Lonicera m acranthoides Hand. Mazz)是忍冬科忍冬屬多年生半常綠纏繞小灌木或直立小灌木植物，其花蕾的綠原酸含量在全國各種金銀花中最高，是西南、 中南地區(qū)商品金銀花的主要品種之一。渝蕾I號于2008年經(jīng)重慶市林木品種審定委員會審定為灰氈毛忍冬的一個新品種。該品種畝產(chǎn)鮮花達(dá)400千克以上，較傳統(tǒng)種植灰氈毛忍冬增產(chǎn)3(Γ80%，抗逆性和適應(yīng)性也較傳統(tǒng)家種灰氈毛忍冬強，其最顯著的特點是花期長達(dá)2(Γ30天且整個花期都是花蕾， 基本上不開花，與傳統(tǒng)家種灰氈毛忍冬7 10天的花蕾期相比，采摘期大大延長，便于采摘用工安排和加工時間安排。該品種已列入重慶“兩翼”農(nóng)戶萬元增收計劃中。由于該品種植株性狀變異較大，目前通常采用無性系育種方法如扦插、嫁接繁殖優(yōu)良單株無性系，但嫁接的砧木和接穗資源不多，扦插成活率低于40%，導(dǎo)致繁殖系數(shù)較低，不能滿足生產(chǎn)和市場需求。因此，通過組織培養(yǎng)的無性繁殖在短期內(nèi)實現(xiàn)種苗產(chǎn)業(yè)化很有市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種適用于灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗繁育的組織培養(yǎng)基，具有愈傷組織誘導(dǎo)率高，不定芽分化率和增殖系數(shù)高，生根率高，試管苗移栽成活率高，芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發(fā)快等優(yōu)點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾I號大面積規(guī)?；耘嗟男枰?。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗的組織培養(yǎng)基，包括下述培養(yǎng)基中的至少一種
Α.愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以Β5為基本培養(yǎng)基，并添加6-芐氨基嘌呤(6-BA) 2mg/L、 激動素(KT) 2mg/L、萘乙酸(NAA) O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至
5.6 5. 8 ；
B.不定芽分化培養(yǎng)基以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/ L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5· 8 ；
C.不定芽繼代培養(yǎng)基以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、吲哚乙酸(IAA)O. 8mg/ L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8 ；
D.生根培養(yǎng)基以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加吲哚丁酸(IBA)I. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖20g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8。進(jìn)一步，所述灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗的組織培養(yǎng)基包括下述四種培養(yǎng)基
A.愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA2mg/L、KT 2mg/L、NAA 0. lmg/L、卡拉膠6. 0g/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5· 8 ;
B.不定芽分化培養(yǎng)基以Β5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、KT 2mg/L、NAA 0. lmg/L、卡拉膠6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8 ;
C.不定芽繼代培養(yǎng)基以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、IAA O. 8mg/L、卡拉膠
6.Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 8 ;
D.生根培養(yǎng)基以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加IBAI. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5g/L和蔗糖20g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8。上述技術(shù)方案中涉及的B5培養(yǎng)基是1968年Gamborg等設(shè)計的培養(yǎng)基，為植物組織培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基；MS培養(yǎng)基是1962年Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計的培養(yǎng)基，也是植物組織培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基;MB培養(yǎng)基是發(fā)明人在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良而得，主要是對MS培養(yǎng)基中大量元素的種類及其濃度進(jìn)行了調(diào)整，微量元素的種類與MS 培養(yǎng)基相同但各組分的濃度約相當(dāng)于MS培養(yǎng)基中濃度的2/3，鐵鹽與有機物的種類及其濃度與MS培養(yǎng)基相同；1/2、1/3、1/4MB培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中大量元素各組分的濃度分別相當(dāng)于MB培養(yǎng)基中濃度的1/2、1/3、1/4，微量元素、鐵鹽與有機物的濃度與MB培養(yǎng)基相同。B5、 MS和MB培養(yǎng)基的具體配方如下表所示。組分(mgL)35MS.\ΒI 3ΜΒKXOs:500IPCO1500500XH4X0501650410136.7CaCll. 2K0150440300100t — six 大里兀 MgS04. H050370A0Mg(SOl):OO22073.5KH 04O17017056.7t>"H4)S04134O λ η 二 tJ O66.7NaEP04.H0150O0Oiy,O。750.S30.55■155HjB 0;T6.4.134.13MiiSO-. 4H；0I]22.314.8714J7微簠元素MiiSOzMzO10ACl0 ZnSO4JH2OS.65,73^ Il _. 1XaMo04.2H00.250.250.170.1 CuSO4-5H:00.0250.025P !*> ' Ι.Μ_ο.ι CoC.6H；00.025ij. 02 O. U 20.0鐵鹽XarEDTAJS . ^-r ^ ·、. JS-I I 4 J■ft-% -IFeSO-7E0:7.S/ .οU . O:7.S肌醇100100100100I I 八甘m酸O有機物鹽酸硫胺素100.1CU0.1鹽酸吡多醇I0.50.5Li 5煙酸I0.50.50.5本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明對適用于灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗繁育的組織培養(yǎng)基包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、不定芽分化培養(yǎng)基、不定芽繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基進(jìn)行了系統(tǒng)研究和優(yōu)化，所得培養(yǎng)基具有愈傷組織誘導(dǎo)率高，不定芽分化率和增殖系數(shù)高，生根率高，試管苗移栽成活率高，芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發(fā)快等優(yōu)點， 能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾I號大面積規(guī)?；耘嗟男枰?，具有良好的應(yīng)用前景。


圖I為誘導(dǎo)出的愈傷組織。圖2為愈傷組織分化出的不定芽。圖3為不定芽的繼代培養(yǎng)。圖4為生根培養(yǎng)。圖5為灰租毛忍冬渝蕾I號種苗。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實施例中使用的灰氈毛忍冬渝蕾I號外植體由重慶文理學(xué)院花卉研究所溫室大棚提供。I、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的優(yōu)化
將灰氈毛忍冬渝蕾I號外植體(當(dāng)年抽出的葉片)用自來水沖洗干凈，用體積分?jǐn)?shù)為 70%的乙醇溶液漂洗30秒，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 1%的HgCl2溶液消毒8分鐘，最后用無菌水沖洗4飛次徹底洗去殘余的HgCl2。將消毒后的葉片切成Icm3大小，接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別以MS、MB和B5作為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA lmg/L、 KT 2mg/L、NAA O. lmg/L、卡拉膠6g/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8。每種培養(yǎng)基處理3瓶， 每瓶接種30個外植體。之后進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，每天在溫度為25土1°C、光照強度為 200(Γ30001χ的條件下光照培養(yǎng)12小時，統(tǒng)計愈傷組織的誘導(dǎo)時間和愈傷組織數(shù)，計算誘導(dǎo)率。結(jié)果見表1，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基對灰氈毛忍冬渝蕾I號葉片愈傷的誘導(dǎo)率影響較大，MS、MB和B5三種不同基本培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率差異顯著，其中B5培養(yǎng)基的平均誘導(dǎo)率最高(66. 7%)且形成的愈傷組織呈黃綠色、較致密、生長較快；而愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基對灰氈毛忍冬渝蕾I號葉片愈傷的誘導(dǎo)時間影響較小，三種不同基本培養(yǎng)基的誘導(dǎo)時間差異不顯著，都在誘導(dǎo)2周后才有愈傷形成。因此，灰氈毛忍冬渝蕾I號葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基優(yōu)選B5。表I不同基本培養(yǎng)基對灰氈毛忍冬渝蕾I號葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響
權(quán)利要求
1.灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗的組織培養(yǎng)基，其特征在于，包括下述培養(yǎng)基中的至少一種A.愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA2mg/L、KT 2mg/L、NAAO.lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 6 5· 8 ；B.不定芽分化培養(yǎng)基以Β5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/ L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5· 8 ；C.不定芽繼代培養(yǎng)基以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、IAA O. 8mg/L、卡拉膠5.5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8 ；D.生根培養(yǎng)基以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加IBAI. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖20g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 6 5. 8。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的灰氈毛忍冬渝蕾I號種苗的組織培養(yǎng)基，其特征在于，包括下述四種培養(yǎng)基A.愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以B5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA2mg/L、KT 2mg/L、NAAO.lmg/L、卡拉膠6. Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5· 8 ;B.不定芽分化培養(yǎng)基以Β5為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/ L、卡拉膠6. Og/L和蔗糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8 ;C.不定芽繼代培養(yǎng)基以MB為基本培養(yǎng)基，并添加6-BAlmg/L,IAA O. 8mg/L、卡拉膠、6.Og/L和鹿糖30g/L,調(diào)節(jié)pH至5. 8 ;D.生根培養(yǎng)基以1/3MB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加IBAI. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5g/L和蔗糖20g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適用于灰氈毛忍冬渝蕾1號種苗繁育的組織培養(yǎng)基，包括下述培養(yǎng)基中的至少一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基B5+6-BA2mg/L+KT2mg/L+NAA0.1mg/L+卡拉膠5.5~6.0g/L+蔗糖30g/L，調(diào)pH至5.6~5.8；不定芽分化培養(yǎng)基B5+6-BA1mg/L+KT2mg/L+NAA0.1mg/L+卡拉膠5.5~6.0g/L+蔗糖30g/L，調(diào)pH至5.6~5.8；不定芽繼代培養(yǎng)基MB+6-BA1mg/L+IAA0.8mg/L+卡拉膠5.5~6.0g/L+蔗糖30g/L，調(diào)pH至5.6~5.8；生根培養(yǎng)基1/3MB+IBA1.5mg/L+IAA0.1mg/L+卡拉膠5.5~6.0g/L+蔗糖20g/L，調(diào)pH至5.6~5.8；上述培養(yǎng)基具有愈傷組織誘導(dǎo)率高，不定芽分化率和增殖系數(shù)高，生根率高，試管苗移栽成活率高，芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發(fā)快等優(yōu)點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾1號大面積規(guī)?；耘嗟男枰?，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號A01H4/00GK102577970SQ20121005972
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者劉奕清, 唐建民, 廖林正, 陳澤雄, 黃登艷, 黃科 申請人:重慶文理學(xué)院