專利名稱：一種用水從竹葉中提取抑菌劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，涉及一種以當(dāng)年生竹葉為原料，在一定條 件下經(jīng)過水提取、溶劑處理等手段得到防腐抑菌劑的方法，屬于日用化學(xué)品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
根據(jù)防腐劑來源的不同，可將防腐劑分為天然防腐劑和合成防腐劑兩大類。大 多合成防腐劑對人體有一定毒性，某些毒性強(qiáng)的防腐劑已被禁止使用，如二氯酚，溴氯酚 等?！皩αu基苯甲酸酯類”具有較低毒性，是目前應(yīng)用于個人護(hù)理產(chǎn)品最廣泛的防腐劑之 一，但其用量相對較大，且隨碳鏈增長其水溶性會變差，影響其在水相中的分配率。據(jù)報道， R0UTLEDGE等的研究首次發(fā)現(xiàn)對羥基苯甲酸酯具有雌激素活性，對消費(fèi)者的身心健康帶來 不利。因此，化妝品中對羥基苯甲酸酯的添加量受到嚴(yán)格的限制。鑒于目前合成防腐劑抗菌能力有限，且存在一定的安全隱患，而天然防腐劑具有 抗菌性強(qiáng)、安全無毒、水溶性好、熱穩(wěn)定性好、作用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，因此開發(fā)高效、安全、穩(wěn)定 的天然防腐劑已成為研究的熱點(diǎn)之一。來源于植物的天然防腐劑，目前主要有中國專利93115626. 2，它是一種由厚樸和 大黃的提取物混合復(fù)配而成的一種天然防腐劑，具有廣譜殺菌的作用，但應(yīng)用較窄且成本 高；中國專利00101442.0公開了一種由秈稻米、山溪水、酒糟、馬蓼、明礬配制而成的防腐 劑，有良好的防腐作用，但制造工藝復(fù)雜、應(yīng)用范圍窄。竹葉黃酮具有的抗氧化、抑菌等顯著生理活性已得到大家一致認(rèn)可，國內(nèi)外對竹 葉黃酮的研究也成為學(xué)術(shù)界熱點(diǎn)之一。已有中國專利200410046924. 1，發(fā)明了一種應(yīng)用于 食品和藥品的竹葉天然防腐保健抑菌劑，無毒副作用，有良好的防腐效果。既可直接使用， 也可以添加氯化鋅和維生素C混合共同作為防腐保健抑菌劑使用。但該法在第一步提取 過程中使用了大量的乙醇和乙酸乙酯，有機(jī)試劑耗量大且易流失；繼而在用石油醚、乙醚萃 取后，需經(jīng)過三次聚酰胺柱層析和乙醇兩次重結(jié)晶得到產(chǎn)品，操作較復(fù)雜。另外，中國專利 200910157355. 0——《一種利用竹葉黃酮生產(chǎn)的新型天然食品防腐劑》，采用超聲輔助乙醇 提取，將經(jīng)石油醚萃取后的粗品上AB-8大孔樹脂吸附，乙醇洗脫得提純品。這兩種方法都不可避免的采用了大量的乙醇作提取劑，對石油醚萃取得到的低極 性成分直接棄去，只對水相成分作進(jìn)一步處理，又經(jīng)過若干次柱層析后得到產(chǎn)品，工藝耗時 久。因此，如何開發(fā)出一種能以較低成本從竹葉中較快獲得防腐抑菌劑的方法，是有效利用 竹葉資源，發(fā)揮竹葉提取物抑菌作用的關(guān)鍵所在。本發(fā)明在前人研究基礎(chǔ)上，改用水提醇沉 法，不僅得到防腐抑菌劑產(chǎn)品，同時，在常規(guī)的提取、萃取操作中常被棄去的石油醚萃取液 部分發(fā)現(xiàn)并得到了具有高效廣譜抑菌作用的成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種用水為提取劑制備竹葉高效抑菌劑的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案一種用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，該方法步驟為
(1)取當(dāng)年生的竹葉為原料，將竹葉加水，竹葉與加水量之間的固液重量比為 1 10 1 50，在20 150°C的條件下浸取2 3h，浸取1 3次，使竹葉中的水溶性 有效成分充分溶出，濾出后合并浸取液；(2)浸取液經(jīng)過濃縮后，加入乙醇至乙醇終濃度為60% 70%，攪拌混合，沉淀， 靜置離心后，取上層清液濃縮，得濃縮液或浸膏粗品；(3)將得到的濃縮液用有機(jī)溶劑萃取，或?qū)⒔啻制酚盟稚⒑笥糜袡C(jī)溶劑萃取， 有機(jī)溶劑萃取方式采用單獨(dú)用三氯甲烷萃取，或單獨(dú)用乙酸乙酯萃??；或先用三氯甲烷萃 取、剩余水相再用乙酸乙酯萃取；或按先用石油醚萃取、剩余水相繼而用三氯甲烷萃取、再 得到的剩余水相用乙酸乙酯萃取的順序；每次萃取的有機(jī)相與水相體積比為1 2 1 4，每種萃取方式中各種萃取劑的 萃取均進(jìn)行2 4次；在每種萃取方式中合并同一萃取劑萃取后的有機(jī)相，回收溶劑得浸膏，浸膏真空 干燥得產(chǎn)品抑菌劑。步驟(1)中所述竹葉與加水量之間的固液重量比優(yōu)選為1 15 1 25。步驟(1)所述的溫度優(yōu)選為80 100°C。步驟(2)中所述的濃縮步驟為常壓或者減壓濃縮。步驟(3)中所述的真空干燥條件為溫度控制在30 50°C。按先用石油醚萃取、剩余水相繼而用三氯甲烷萃取、再得到的剩余水相用乙酸乙 酯萃取的順序操作為取上述濃縮液，或?qū)⒔啻制酚盟稚⒑?，采用石油?60 90°C ) 液液萃取進(jìn)行提純，靜置后取出上層石油醚清液部分，剩余液繼續(xù)萃取直至該層基本無色， 合并萃取相后減壓濃縮回收溶劑，濃縮物干燥得產(chǎn)品I，為淡黃色油狀物；在剩余水相溶液 中加入三氯甲烷萃取，取出下層萃取液部分，剩余液繼續(xù)萃取直至該層基本無色，合并萃取 相后減壓濃縮回收溶劑，濃縮物干燥得產(chǎn)品II，為棕色浸膏；在剩余上層液中繼續(xù)加入乙 酸乙酯萃取，剩余液繼續(xù)萃取直至萃至該層基本無色，合并萃取液部分減壓濃縮，回收溶 劑，濃縮物干燥后得產(chǎn)品III，為棕黃色浸膏。本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明的竹葉抑菌劑提取方法中所用的竹葉是竹農(nóng)砍伐竹柴中的丟棄物，進(jìn)行 歸類收集，可以較大地提高竹林的利用率。2、本發(fā)明的竹葉抑菌劑的生產(chǎn)方法，所采用的提取溶劑為水，一方面大大減少了 企業(yè)的溶劑使用成本，另一方面也降低了對環(huán)境的污染，同時由于竹子大多生長在山上，用 水提取的初生產(chǎn)過程可以就地進(jìn)行，避免了有機(jī)溶劑易燃易爆帶來的弊端。3、本發(fā)明中所用到的乙醇等有機(jī)溶劑都可以回收重復(fù)利用，而且工藝流程簡單， 設(shè)備投入小，生產(chǎn)成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)。4、本發(fā)明通過簡單的液液萃取法可以同時得到三種抑菌劑產(chǎn)品，也可以以其中一 種溶劑萃取得到某一個產(chǎn)品，均具有良好的抑菌性。且在常規(guī)的提取、萃取操作中常被棄去 的非極性部分被本發(fā)明發(fā)現(xiàn)并得到了具有廣譜抑菌作用的成分。5、按照常規(guī)的比例在化妝品配方中加入本發(fā)明的竹葉抑菌劑產(chǎn)品，對常見的化妝 品中易滋生菌有明顯的抑制和殺滅作用，穩(wěn)定性良好，不僅延長了貨架壽命，而且賦予產(chǎn)品 獨(dú)特的竹子清香，提升產(chǎn)品魅力。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 將500g竹葉放入水槽中，加入12. 5L水，加熱到95°C提取2h，將提取液濾出；往 殘?jiān)屑尤?. 5L水，同樣條件下提取2h，撈出殘?jiān)喜纱谓∫海?5°C水浴減壓濃縮至 IL ；加入乙醇，使體系中乙醇終濃度為60% 70%，充分?jǐn)嚢杌旌希o置過夜后過濾，濃縮 清液至干，干燥后得浸膏粗品77. 7g。將浸膏粗品用100_200mL水分散后采用石油醚液液萃取，每次用石油醚50mL， 萃取進(jìn)行2 4次，萃至無色，合并上層石油醚清液，回收溶劑，濃縮物真空干燥得產(chǎn)品I
0.315g，為淡黃色油狀物。在上步剩余水溶液中加入三氯甲烷液液萃取，每次用三氯甲烷 50mL，萃取進(jìn)行2 4次，萃至無色，合并取出的下層黃色三氯甲烷層部分后減壓濃縮回收 溶劑，濃縮物真空干燥得產(chǎn)品II 1. 155g，為棕色浸膏。在上層水液中繼續(xù)加入乙酸乙酯萃 取，每次用乙酸乙酯50mL，萃取進(jìn)行2 4次，萃至無色，合并乙酸乙酯萃取相回收溶劑，濃 縮物真空干燥得產(chǎn)品III 1.80g，為棕黃色浸膏。實(shí)施例2 稱取500g竹葉，置于水槽中，加入IOL水浸沒竹葉，加熱至85°C提取兩次，每次 3h，第二次提取時的加水量可視情況適當(dāng)減少，以浸沒竹葉為宜。合并兩次浸取液減壓濃縮 至約800mL，加入乙醇沉淀，使體系中乙醇終濃度為60% 70%，濾液濃縮至約500mL后， 按上述方法依次萃取，回收各部分溶劑，得到產(chǎn)品I 0.3293g，產(chǎn)品II 1. 1966g，產(chǎn)品III
1.9675g。實(shí)施例3:稱取500g竹葉，置于水槽中，加入IOL水浸沒竹葉，加熱至85°C提取兩次，每次 3h，第二次提取時的加水量可視情況適當(dāng)減少，以浸沒竹葉為宜。合并兩次浸取液減壓濃縮 至約800mL，加入乙醇沉淀，使體系中乙醇終濃度為60% 70%，濾液濃縮至約1000mL。平 均分為兩份，每份浸取液約500mL，一份直接用三氯甲烷萃取，每次用三氯甲烷125-250mL 萃取進(jìn)行2 4次，萃至無色后合并萃取相回收溶劑，濃縮物干燥后得萃取物0. 6037g ；另一份500mL浸取液直接用乙酸乙酯萃取，每次用乙酸乙酯125_250mL，萃取進(jìn)行 2 4次，萃至無色，合并萃取相回收溶劑，濃縮物干燥后得產(chǎn)品1. 2504g。體外抑菌性試驗(yàn)將上述實(shí)施例中得到的產(chǎn)品配制成0. 2g/mL的樣品溶液，將直 徑6mm的滅菌濾紙片在樣品溶液中浸泡30分鐘，取出、揮干溶劑，覆蓋在分別以金黃色葡 萄球菌(Sa.)和大腸桿菌(Ec.)為指示菌的培養(yǎng)基表面，倒置，37°C培養(yǎng)24小時，進(jìn)行抑 菌性試驗(yàn)，觀察滅菌濾紙片周圍的抑菌圈大小，抑菌圈直徑越大抑菌效果越好，抑菌圈直徑 ^ IOmm被認(rèn)為抑菌效果良好。每件樣品取三片滅菌濾紙片做試驗(yàn)，試驗(yàn)畢對每片滅菌濾紙 片測量垂直及水平的抑菌圈長度，測量數(shù)據(jù)如表1所示，結(jié)果表明，所得抑菌劑均有良好的 抑菌性能。表1竹葉提取物對兩種供試菌的抑菌效果 在化妝品中的應(yīng)用按照常規(guī)的化妝品生產(chǎn)工藝，將竹葉抑菌劑按一定量加入化 妝品配方中，化妝品樣品不另外經(jīng)滅菌處理。將化妝品樣品每隔一周檢驗(yàn)一次，連續(xù)檢驗(yàn)3 個月，結(jié)果表明添加了竹葉抑菌劑的化妝品樣品菌落斑點(diǎn)明顯少于空白對照樣，隨著保藏 時間的延長，空白對照樣品出現(xiàn)的菌落斑點(diǎn)逐漸增多，隨著化妝品樣品中竹葉抑菌劑加入 濃度的增大，抑菌效果更顯著。
權(quán)利要求
一種用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，其特征在于該方法步驟為(1)取當(dāng)年生的竹葉為原料，將竹葉加水，竹葉與加水量之間的固液重量比為1∶10～1∶50，在20～150℃的條件下浸取2～3h，浸取1～3次，濾出后合并浸取液；(2)浸取液經(jīng)過濃縮后，加入乙醇至乙醇終濃度為60％～70％，攪拌混合，沉淀，靜置離心后，取上層清液濃縮，得濃縮液或浸膏粗品；(3)將得到的濃縮液用有機(jī)溶劑萃取，或?qū)⒔啻制酚盟稚⒑笥糜袡C(jī)溶劑萃取，有機(jī)溶劑萃取方式采用單獨(dú)用三氯甲烷萃取，或單獨(dú)用乙酸乙酯萃??；或先用三氯甲烷萃取、剩余水相再用乙酸乙酯萃??；或按先用石油醚萃取、剩余水相繼而用三氯甲烷萃取、再得到的剩余水相用乙酸乙酯萃取的順序；每次萃取的有機(jī)相與水相體積比為1∶2～1∶4，每種萃取方式中各種萃取劑的萃取均進(jìn)行2～4次；在每種萃取方式中合并同一萃取劑萃取后的有機(jī)相，回收溶劑得浸膏，浸膏真空干燥得產(chǎn)品抑菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，其特征在于步驟(1)中所 述竹葉與加水量之間的固液重量比為1 15 1 25。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，其特征在于步驟(1)所述 的溫度為80 100°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，其特征在于步驟(2)中所 述的濃縮步驟為常壓或者減壓濃縮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，其特征在于步驟(3)中所 述的真空干燥條件為溫度控制在30 50°C。
全文摘要
一種用水從竹葉中提取抑菌劑的方法，屬于日用化學(xué)品技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種以當(dāng)年生的竹葉為原料，在一定條件下經(jīng)過水提取、溶劑處理等步驟得到防腐抑菌劑的方法。主要包括以下步驟竹葉熱水煎煮浸提，醇沉處理、離心濃縮、加溶劑液液萃取，回收溶劑、殘留物真空干燥得成品抑菌劑。本發(fā)明具有工藝簡單、成本低廉、操作方便、設(shè)備投資少、產(chǎn)品活性高、對環(huán)境無污染、易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A01N65/44GK101889594SQ20101022427
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月6日
發(fā)明者倪向梅, 姚志蕊, 曹光群 申請人:江南大學(xué)