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一種從竹葉中提取葒草苷的方法

文檔序號:3501430閱讀:577來源:國知局
專利名稱:一種從竹葉中提取葒草苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域,尤其是涉及一種從竹葉中提取葒草苷的方法。
背景技術(shù)
葒草苷,屬于黃酮苷類化合物,易溶于水、乙醇,難溶于苯、氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑 中。葒草苷是竹葉黃酮的主要成分,黃酮類成分有明顯的抗?jié)?、解痙、抗菌、抗炎、降 血脂、鎮(zhèn)痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用。竹葉在我國具有悠久的藥用歷史,是一味著名的清熱解毒良藥。竹葉提取物的功 能因子主要是黃酮苷,竹葉黃酮具有多方面的生物活性,如抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、清除自 由基、阻斷亞硝基化、降低血脂及血膽固醇、抗菌消炎、抗病毒,增強(qiáng)免疫功能,抑制移植性 腫瘤在宿主體內(nèi)的生長等方面的作用。竹葉黃酮以其巨大的資源優(yōu)勢,良好的藥理活性已 成為一種非常有前途的天然藥物,是具有廣闊開發(fā)前景的新型藥用資源?,F(xiàn)有葒草苷的提取工藝多是微波提取、大孔樹脂分離、硅膠柱分離、微孔濾膜 分離等。如薛月芹等發(fā)表的“淡竹葉中葒草苷的微波萃取-HPLC法測定”,該文獻(xiàn)公開 了含醇溶液微波提取的工藝。此外還有孫武興等公開的“毛金竹葉提取物化學(xué)成分的 分離與鑒定”,該文獻(xiàn)公開的方法是水提、正丁醇萃取、大孔吸附樹脂、反復(fù)硅膠柱色譜、 Sephadex LH 20柱色譜、開放ODS柱色譜等多種方法進(jìn)行分離純化,該方法操作繁瑣。專 利200610026825. 6 “化合物(2S)-5,7,2,,6,-四羥基_6,8-二異戊烯基-二氫黃酮的提 取工藝及其應(yīng)用”,公開的方法是從白花醬草中通過醇提、有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱層析等工 序得到產(chǎn)品。而現(xiàn)有文獻(xiàn)中對從竹葉中提取分離葒草苷的研究較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種葒草苷的制備方法。該方法操作簡單,產(chǎn)品 含量高,重現(xiàn)性好。本發(fā)明之所以采用聚酰胺柱色譜聯(lián)合ODS中壓柱色譜進(jìn)行分離,是因?yàn)榫埘0穼?葒草苷具有較好的分離效果,且容量比較大,節(jié)省ODS硅膠的用量。與大孔樹脂相比,聚酰 胺色譜柱分離效果更好;ODS硅膠柱相對凝膠柱分離時分辨率更高,可以反復(fù)使用。本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的1. 一種從竹葉中提取葒草苷的方法,其特征在于包含以下步驟1)提取將竹葉原料粉碎,加入8 12倍量石灰水與硼砂混合均勻后,加熱提取 2 3次,提取液加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)至酸性,得葒草苷粗提液。2)聚酰胺柱分離將上述粗提液加入聚酰胺色譜柱,用乙醇水溶液洗脫,濃縮洗 脫液至無醇味,得濃縮液。3)正丁醇萃取將上述濃縮液用正丁醇萃取2 3次。合并萃取液,揮干正丁醇, 得濃縮液。
4)硅膠柱層析將上述濃縮液與硅膠拌勻,烘干,干法上柱,密封,加壓用甲 醇-水_醋酸混合溶液洗脫,薄層監(jiān)測,收集葒草苷流分,真空干燥得產(chǎn)品。所述步驟1)中硼砂的用量是竹葉的 2%,加入飽和石灰水堿化溶液,pH控 制在8 9,提取時間為2 4小時,提取溫度控制在60 80°C,用鹽酸溶液酸化時,pH控 制在4 6。 所述步驟2)中的聚酰胺樹脂為200 400目,乙醇水是60 % 80 %的乙醇溶液, 用量是2 3BV。所述步驟4)中的硅膠采用20 μ m粒徑的ODS型硅膠,流動相是乙醇-水-醋酸 (30 45 65 1),硅膠柱加壓控制流速在100 150ml/min。綜上所述,本發(fā)明存在以下優(yōu)點(diǎn)石灰水提取,硼酸保護(hù)葒草苷不被破壞,除去鞣 質(zhì),果膠,粘液質(zhì)等水溶性雜質(zhì),調(diào)節(jié)酸后除去了疏水性黃酮物質(zhì),更有利聚酰胺柱的分離, ODS硅膠對極性產(chǎn)品的分離效果較好;采用中壓柱保證了洗脫劑的流速,加強(qiáng)了分離效果, 與開放性O(shè)DS硅膠柱相比,周期短。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明,但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施實(shí)例中葒草苷的監(jiān)測采用薄層色譜法(參照趙平等“葒草素和異葒草素 對照品的制備”文獻(xiàn)),具體方法如下薄層色譜條件 薄層板硅膠G薄層板;展開劑醋酸乙酯-甲酸-7jC (10 0. 5 0. 5);顯色劑2%的FeCl3乙醇液;展開后,取出,晾干,噴以2% FeCl3乙醇液,在日光下檢視,供試品在與對照品色譜 相應(yīng)的位置上(Rf = 0. 68),有一相同顏色的單一斑點(diǎn)。實(shí)施例1 取竹葉粉碎物2kg,加入18L石灰水(控制pH在8 9)與30g硼砂混合均勻后, 加熱至75°C提取3個小時,過濾,濾渣按上述條件再提取一次,合并濾液,濾液中加入8%的 鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至5,過200目篩的聚酰胺色譜柱吸附,用3BV的65%的乙醇溶液洗脫,濃 縮洗脫液,再用正丁醇萃取3次,揮干正丁醇,與40g粒徑為50 μ m的ODS硅膠拌勻,烘干, 干法上硅膠柱,用乙醇-水-醋酸混合溶液梯度洗脫,加壓控制流速30ml/min,薄層監(jiān)測,收 集葒草苷流分,濃縮回收乙醇,真空干燥得產(chǎn)品6. Sg,含量97. 1 %。實(shí)施例2 取竹葉粉碎物2kg,加入20L石灰水(控制pH在8 9)與25g硼砂混合均勻后, 加熱至70°C提取3個小時,過濾,濾渣按上述條件再提取一次,合并濾液,濾液中加入5%的 鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 5,過200目篩的聚酰胺色譜柱吸附,用2BV的70%的乙醇溶液洗脫, 濃縮洗脫液,再用正丁醇萃取2次,揮干正丁醇,與35g粒徑為50 μ m的ODS硅膠拌勻,烘 干,干法上硅膠柱,用乙醇-水-醋酸溶液梯度洗脫,加壓控制流速50ml/min,薄層監(jiān)測,收 集葒草苷流分,濃縮回收乙醇,真空干燥得產(chǎn)品7. 4g,含量97.5%。
實(shí)施例3 取竹葉粉碎物5kg,加入60L石灰水(控制pH在8 9)與60g硼砂混合均勻后,加熱至65°C提取3個小時,過濾,濾渣加入50L石灰水(控制pH8 9)與50g硼砂混合均 勻后,加熱至60°C提取2個小時,過濾,合并濾液,濾液中加入8%鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至5, 過300目篩的聚酰胺色譜柱吸附,用2. 5BV的75%的乙醇溶液洗脫,濃縮洗脫液,再用正丁 醇萃取3次,揮干正丁醇,與70g粒徑是50 μ m的ODS硅膠拌勻,烘干,干法上硅膠柱,用乙 醇-水-醋酸混合溶液梯度洗脫,加壓控制流速40ml/min,薄層監(jiān)測,收集葒草苷流分,濃縮 回收乙醇,真空干燥得產(chǎn)品16. 2g,含量95. 3%。
權(quán)利要求
一種從竹葉中提取葒草苷的方法,其特征在于包含以下步驟1)提取將竹葉原料粉碎,加入8~12倍量石灰水與硼砂混合均勻后,加熱提取2~3次,提取液加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)至酸性,得葒草苷粗提液;2)聚酰胺柱分離將上述粗提液加入聚酰胺色譜柱,用乙醇水溶液洗脫,濃縮洗脫液至無醇味,得濃縮液;3)正丁醇萃取將上述濃縮液用正丁醇萃取2~3次。合并萃取液,揮干正丁醇,得濃縮液;4)硅膠柱層析將上述濃縮液與硅膠拌勻,烘干,干法上柱,密封,加壓用甲醇 水 醋酸混合溶液洗脫,薄層監(jiān)測,收集葒草苷流分,真空干燥得產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的從竹葉中提取葒草苷的方法,其特征在于所述步驟1)中硼砂 的用量是竹葉的 2%,加入飽和石灰水堿化溶液,pH控制在8 9,提取時間為2 4 小時,提取溫度控制在60 80°C,用鹽酸溶液酸化時,pH控制在4 6。
3.如權(quán)利要求1所述的從竹葉中提取葒草苷的方法,其特征在于所述步驟2)中的聚酰 胺樹脂為200 400目,乙醇水是60% 80%的乙醇溶液,用量是2 3BV。
4.如權(quán)利要求1所述的從竹葉中提取葒草苷的方法,其特征在于所述步驟4)中的硅膠 采用20 μ m粒徑的ODS型硅膠,流動相是乙醇-水-醋酸(30 45 65 1),硅膠柱加壓 控制流速在30-60ml/min。
全文摘要
本發(fā)明提供一種竹葉中具有營養(yǎng)心肌作用的活性化合物葒草苷的提取方法,其特征在于,將竹葉原料粉碎,加入8~12倍量含硼砂的堿性水加熱提取2~3次,酸化提取液,加入聚酰胺色譜柱,用乙醇-水混合溶劑洗脫,洗脫液濃縮,用正丁醇萃取2~3次,再用ODS硅膠柱分離,用甲醇-水-醋酸混合溶劑加壓洗脫,薄層監(jiān)測,收集葒草苷流分,真空干燥得產(chǎn)品。本方法操作簡單,產(chǎn)品含量高,重現(xiàn)性好。
文檔編號C07D407/04GK101955479SQ201010510899
公開日2011年1月26日 申請日期2010年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月19日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
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