專利名稱：慈菇組培育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種慈菇組培育苗方法。
背景技術(shù)：
慈菇(Sagittaria sagittrifolia L.)又名慈菇，植物分 類學(xué)上為澤瀉科水生草本植物，是人們喜食的一個水生蔬菜品種。慈菇人工栽 培已有上百年的歷史，傳統(tǒng)的栽培方法是保芽留種法，就是選取生長狀實(shí)的芽 莖作為下一代的種苗進(jìn)行繁殖，屬無性繁殖。慈菇在種植過程中易感染病毒， 發(fā)病時在葉片和葉柄上形成黃白色的斑泡，以后瘤泡內(nèi)充滿白色乳狀漿水，最 后乳狀漿水變成黑粉狀物，布滿整個葉片。傳統(tǒng)的保芽留種法，使病毒逐代積 累，逐年加重，引起慈燕種性退化、產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣。目前種植戶采取慈 菇傳統(tǒng)自由留種，病毒感染面積大約占總面積的80%以上，使得慈菇生產(chǎn)水平 相對較低畝產(chǎn)量逐年降低。噴施農(nóng)藥成本不斷攀升，而造成農(nóng)藥殘留加重，影 響食用安全。
像雜交水稻一樣，利用組織培育的方法，選育出具有一代明顯生長優(yōu)勢的 種苗，在當(dāng)代增加產(chǎn)量的方法已經(jīng)在一些植物品種上得到應(yīng)用。但是在某一具 體品種上如何進(jìn)行培育卻是沒有一塵不變的路子可走的，必須針對特定品種的 生物學(xué)特性加以研究，開發(fā)出適合的工藝方法，才能產(chǎn)生像雜交稻那樣的效果。 慈菇的組培育苗到目前為止尚無人研究的報道，更無組培苗的生產(chǎn)和銷售出 現(xiàn)。這一問題尚待人們研究解決
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種慈菇組培育苗方法，依該方法培育
出來的種苗具有長生旺、產(chǎn)量高、抗病能力強(qiáng)的特性，方法本身可操作性強(qiáng)， 種苗品質(zhì)穩(wěn)定，以此彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明提出的這種慈菇組培育苗方法，其特征在于有如下步驟
(1)制備下列無菌培養(yǎng)基待用
誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-6mg/L + NAA 0. 5-1. 0mg/L +蔗糖30g/L、增 殖培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-4mg/L + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖30g/L、壯苗生根培 養(yǎng)基1/2 MS + NAA 0. l-O. 5mg/L +蔗糖15g/L;(2) 選取健壯的慈菇莖芽經(jīng)消毒滅菌處理后先置入誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基中，讓 其萌動生長，之后將莖芽和腋芽轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)；
(3) 將上步增殖后植株2-3cm高的叢生苗接到壯苗生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培 養(yǎng)，得到生根壯苗；
(4) 將上步得試管苗放在自然光下煉苗1周左右，取出洗去根部培養(yǎng)基， 無菌水中預(yù)培養(yǎng)，使其健壯生長得原原種幼苗；
(5) 將上步所得生長良好的原原種幼苗移栽大田，并進(jìn)行常規(guī)水肥管理， 得原種苗。
選取生長健壯的原種苗果實(shí)的慈菇芽莖，植入大田中規(guī)模繁育培養(yǎng)，進(jìn)行 常規(guī)田間管理，小苗成活到適栽尺寸后即成生產(chǎn)苗。
慈菇莖芽在第(2) - (3)步的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為pH5. 8-6.0，培養(yǎng) 溫度25-27。C，光照強(qiáng)度1500-2000LX，光照時間10-12小時/天。
第(2)步中慈菇莖芽的消毒做法是將莖芽放在燒杯里用肥皂水沖洗干 凈，再用自來水沖洗l小時，移入經(jīng)消毒的河沙沙床預(yù)培15天后，取出用肥 皂水和自來水沖洗干凈，移入無菌接種箱內(nèi)，浸泡在20%的次氯酸鈉溶液中5-10 分鐘，取出后用無菌水沖洗3-5次，再浸泡在重量百分濃度為0. 1%的升汞溶液 中8-10分鐘，取出后用無菌水沖洗3-5次。
第(2)步的培養(yǎng)時間20天(可以是15-25天)，第(3)步的培養(yǎng)時間 是25天(可以是20-30天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是10-15天。
第(5)步移栽大田的原原種幼苗株高要求在8-15cm。
第(1)步中的培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為
認(rèn)03 1900、 NH4Na, 1650、 KH2P04 170、 MgS04. 7H203 70、 CaC12. H204 40、 MnS04. 4H202 2 . 3、 ZnS04. 7H208 . 6貼0:,6. 2、 KI0. 83、 Na2M()04. 2H2oO. 25、 CuS04. 5H20 0.025、 C()Cl. 6H200 . 02 5、 Na2-EDTA37. 3、 FeS04. 4H2027. 8、維生素B力.5、維生 素BA 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
經(jīng)第(2)后，增殖系數(shù)可達(dá)到3-4倍。第(3)步的10-15天后小苗基部 出現(xiàn)白色根突，隨后逐漸伸長，生根率達(dá)90%以上。
5本發(fā)明的實(shí)質(zhì)是將被病毒污染了的、被長期抑制著的原有生長特性的慈菇 種苗進(jìn)行脫毒處理，切斷病毒在慈菇代際間的傳遞，將品種原有的生長潛力和 抗病蟲害能力充分釋放，集中在生產(chǎn)苗這一代體現(xiàn)出來。本發(fā)明通過把現(xiàn)代植 物組培的理論與慈燕這一具體品種的生長習(xí)性的實(shí)際相結(jié)合，提出了適合的脫 毒組培慈菇生產(chǎn)苗的方法和工藝措施，解決了人們長期渴望解決而沒有很好解 決的問題。
本發(fā)明取得積極效果體現(xiàn)在
1、 生產(chǎn)苗的長勢明顯優(yōu)于傳統(tǒng)種苗，慈菇產(chǎn)量平均提高20-30%。
2、 生產(chǎn)苗的植株抗病蟲害能力強(qiáng)，常見病發(fā)病率較傳統(tǒng)種苗低50%以上， 蟲害少30%以上，施用農(nóng)藥平均少80%。
3、 慈燕品質(zhì)優(yōu)良，各種營養(yǎng)成分含量與傳統(tǒng)的大致相同或略優(yōu)。
4、 本發(fā)明的方法操作性強(qiáng)，種苗品質(zhì)穩(wěn)定，培育成本低，容易推廣。


圖1是本發(fā)明的工藝流程原則框圖。
圖2是工廠化生產(chǎn)苗增育的工藝流程框圖。
圖2中，慈菇苗按2500株/畝計(jì)算；畝收慈菇球莖按30000個/畝計(jì)算。
具體實(shí)施方式
第一步選擇優(yōu)良的無性外植體(慈菇芽)莖芽，照上述方 法消毒處理，移入消毒的河沙沙床上預(yù)培15天后取出用肥皂水和自來水沖洗 千凈，移入無菌箱中浸泡于重量百分濃度為20%的次氯酸鈉溶液中5-10分鐘， 取出后無菌清水洗凈再用重量百分濃度為0. 1%的升汞溶液浸泡8-10分鐘，再 用無菌水沖洗干凈，依次在誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根壯苗培養(yǎng)基中培 養(yǎng)得試管苗。試管苗再煉苗7天即得原原種幼苗。原原種幼苗移栽大田，迸行 常規(guī)水肥管理，所得果實(shí)，慈菇芽莖即為原種苗。原種苗已經(jīng)是脫毒后的良種 苗，獲得了先天的優(yōu)良生長特性。原種苗經(jīng)規(guī)模培育成小植株后就是可直接用 于生產(chǎn)的生產(chǎn)苗。與雜交稻種子有相類似的本質(zhì)。
本例上述接種在誘導(dǎo)培育基的具體做法是截取已消毒的材料莖尖生長點(diǎn) 3-5mm接種到培養(yǎng)基上，6-8天莖尖轉(zhuǎn)綠基部組織膨大，生出小芽和匍匐莖。 20天左右有腋芽生出，這時移到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天左右，增殖系數(shù)達(dá)到3-4倍。植株生長明顯加快。接下來把2-3cm高的叢生苗移到壯苗生根培養(yǎng)基 中培養(yǎng)10-15天后有根突長出，生根率達(dá)到90%左右，此后，根系生長加快。 再后來的煉苗、移栽到原種苗的繁育步驟如上，此處不再贅述。這些步驟都是 在無菌條件進(jìn)行的。
三種培養(yǎng)基是誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-6mg/L + NAA 0. 5-1. 0mg/L + 蔗糖30g/L、增殖培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-4mg/L + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖30g/L、 壯苗生根培養(yǎng)基1/2 MS + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖15g/L。
其中培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為
KNO:, 1900、 NH4N0:, 1650、 Kfy^ 170、 MgS04. 7H20370、 CaC12. H20440、 MnS04. 4H2022. 3、 ZnS04. 7H208 , 6貼036 . 2、 KIO. 83、 Na2M。04. 2H200. 25、 CUS(V 5H20 0.025、 C。C1.6H200.025、 Na2-EDTA37. 3、 FeS04. 4H2027. 8、維生素B在5、維生 素B,O. 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
6-BA是六卞基氨基腺嘌呤，作為細(xì)胞分裂素用，NAA是萘乙酸，作為細(xì)胞 生長素用。
上述三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的條件均為為pH5. 8-6.0，培養(yǎng)溫度25-27。C，光 照強(qiáng)度1500-2000LX，光照時間10-12小時/天。其余條件同上。
以圖2所示的順序和數(shù)量，用9000個外殖體(普通慈燕芽)，經(jīng)本例的 方法培育，獲得原種苗17000株，全部移栽到6.8畝大田，收獲慈菇種球20.4 萬個，全部栽種于81.6畝大田，又收獲245萬個慈菇種球。
經(jīng)在小范圍內(nèi)對比試驗(yàn)，在水肥、氣候和土壤條件都相同時，用本發(fā)明組 培苗栽種的慈菇較之傳統(tǒng)同種慈菇長勢明顯，產(chǎn)量平均提高20-30%;植株抗病 蟲害能力強(qiáng)，常見病發(fā)病率較傳統(tǒng)種苗低50%以上，蟲害少30%以上，施用農(nóng) 藥平均少80-90%;慈菇個頭大，無空隙，品質(zhì)優(yōu)良，各種營養(yǎng)成分含量與傳統(tǒng) 的大致相同或略優(yōu)。
權(quán)利要求
1、一種慈菇組培育苗方法，其特征在于有如下步驟(1)制備下列無菌培養(yǎng)基待用誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基MS+6-BA 2-6mg/L+NAA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L、增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2-4mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L、壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖15g/L；(2)選取健壯的慈菇莖芽經(jīng)消毒滅菌處理后先置入誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基中，讓其萌動生長，之后將莖芽和腋芽轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)；(3)將上步增殖后植株2-3cm高的叢生苗接到壯苗生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，得到生根壯苗；(4)將上步得試管苗放在自然光下煉苗1周左右，取出洗去根部培養(yǎng)基，無菌水中預(yù)培養(yǎng)，使其健壯生長得原原種幼苗；(5)將上步所得生長良好的原原種幼苗移栽大田，并進(jìn)行常規(guī)水肥管理，得原種苗。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于選取生長健壯 的原種苗果實(shí)的慈菇芽莖，植入大田中規(guī)模繁育培養(yǎng)，進(jìn)行常規(guī)田間管理，小 苗成活到適栽尺寸后即成生產(chǎn)苗。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于慈菇莖芽在第 (2) - (3)步的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為pH5. 8-6.0,培養(yǎng)溫度25-27°C，光照強(qiáng)度1500-2000LX,光照時間10-12小時/天。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(2)步中慈 菇莖芽的消毒做法是將莖芽放在燒杯里用肥皂水沖洗干凈，再用自來水沖洗 1小時，移入經(jīng)消毒的河沙沙床預(yù)培15天后，取出用肥皂水和自來水沖洗干凈， 移入無菌接種箱內(nèi)，浸泡在20%的次氯酸鈉溶液中5-10分鐘，取出后用無菌水 沖洗3-5次，再浸泡在重量百分濃度為O. 1%的升汞溶液中8-10分鐘，取出后 用無菌水沖洗3-5次。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(2)步的培養(yǎng)時間20天(可以是15-25天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是25天(可以是20-30 天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是10-15天。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(5)步移栽 大田的原原種幼苗株高要求在8-15cm。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(1)步中的 培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為KN0:, 1900、 NE,N03 1 6 50、 KH2P04 170、 MgS04, 71^0370、 CaC12. H20440、 M S04. 4H2022. 3、 Z S0" 7H208. 6H3B036. 2、 KIO. 83、 Na2M。04. 2H200 . 25、 CuS(k 5H20 0.025、 C()Cl. 6H200 . 02 5、 Na2-EDTA37. 3、 FBS(K 4H2027. 8、維生素Bfi0. 5、維生 素BiO. 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
全文摘要
本發(fā)明是一種慈菇組培育苗方法，內(nèi)容包括制備無菌的誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基；選取慈菇莖芽經(jīng)消毒滅菌置入誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基中，讓其萌動生長，之后又先后轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)成試管苗；將試管苗煉苗1周左右，取出在無菌水中預(yù)培養(yǎng)，得原原種幼苗；將原原種幼苗移栽大田，并進(jìn)行常規(guī)水肥管理，得原種苗，原種苗果實(shí)的慈菇芽莖，規(guī)模繁育培養(yǎng)即成生產(chǎn)苗。本發(fā)明通過對種苗組織的脫毒無菌培養(yǎng)，恢復(fù)品種原有的生長潛力和抗病蟲害能力，生產(chǎn)苗本代的慈菇產(chǎn)量平均提高20-30％，抗病蟲害能力明顯增強(qiáng)，施用農(nóng)藥平均減少80％。方法操作性強(qiáng)，種苗品質(zhì)穩(wěn)定，培育成本低，容易推廣。
文檔編號A01H4/00GK101554137SQ200910094348
公開日2009年10月14日 申請日期2009年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月9日
發(fā)明者白永興 申請人:白永興