專利名稱：：一種小菌核菌菌株及其用于生物除草的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種小菌核菌菌株及其用于生物除草的方法，屬于微生物應(yīng)用于農(nóng)業(yè)植物保護、防除農(nóng)作物雜草的
技術(shù)領(lǐng)域：
，專用于禾本科作物田及草坪闊葉雜草的防除。
背景技術(shù)：
：隨著人們生態(tài)意識的增強，近年來城鄉(xiāng)綠化建設(shè)發(fā)展較快，特別是以禾本科草坪為主的綠地面積不斷擴大。許多闊葉雜草，包括蘇門白酒草(Conyzasumatrehsis(Reez)Walker)、蒲公英(TaraxacummongolicumHand._Mazz.)、一年蓬(Erigerona皿皿s(L)Pers.)、剌兒菜(C印halanoplossegetum(B皿ge)Kitam.)、牛繁縷(Malachiumaquaticum(L)Fries)、波斯婆婆纟內(nèi)(VeronicapersicaPoir.)、車前草(PlantagoasiaticaL)、大巢菜(ViciasativaL)、石龍芮(RanunculussceleratusL)、碎米薺(CardaminehirsutaL.)以及異型莎草(yperusdifformisL.)闊葉雜草侵占了新鋪植的草坪的露地空間，影響了草坪的質(zhì)量和美觀。隨著水稻直播這一新型農(nóng)業(yè)栽培措施的大面積運用，"干干濕濕"的稻田環(huán)境使得節(jié)節(jié)菜(Rotalaindica(Willd.)Koehne)、通泉草(Mazusjaponicus(Th皿b.)0.K皿tze)、陌上菜(Xinderniaprocumbens(Krock.)Philcox)、耳葉水莧(AmmanniaarenaridH.)、鱧腸(EcliptaprostrataL.)等闊葉雜草發(fā)生量較大，給水稻生產(chǎn)帶來損失。此外在玉米田中馬齒莧(PortulacaoleraceaL.)、反枝莧(AmaranthusretroflexusL.)、鐵莧菜(AcalyphaaustralisL.)等闊葉雜草危害也較為嚴重。紫莖澤蘭、加拿大一枝黃花、小飛蓬、蘇門白酒草、黃頂菊、薇甘菊、一年蓬、飛機草等外來入侵植物在我國已經(jīng)逸生成為惡性雜草，常形成單優(yōu)勢群落，對當(dāng)?shù)氐纳鐣?jīng)濟、自然生態(tài)系統(tǒng)和生物多樣性均構(gòu)成了一定威脅。已經(jīng)被列入中國重要外來有害植物名錄。目前對于這些雜草的主要防治辦法還是采用人工和機械鏟除、化學(xué)防治以及生態(tài)替代等等。這些防除措施要么防除成本高，或者會導(dǎo)致對環(huán)境的污染。研制生物除草劑防除外來惡性入侵雜草為外來入侵雜草的防除提供了新的防除途徑，而且對環(huán)境安全性高。目前，國內(nèi)外尚無十分成功有效的生物除草劑防除上述各種外來入侵雜草。顯然將該菌株作為生物除草劑的開發(fā)會有極為顯著的經(jīng)濟和社會效益。當(dāng)今人們對化學(xué)除草劑殘留、環(huán)境污染以及耐藥和抗藥性雜草發(fā)展的認識逐漸清晰，越來越關(guān)注有毒有害化學(xué)物質(zhì)在土壤和水體中的殘留、對食品的污染、以及對非靶標生物的危害和人類健康的影響等。隨著綠色食品和有機農(nóng)業(yè)的大力推廣，研制生物除草劑防除雜草已成為生產(chǎn)實際的迫切需求；也是一個新興的技術(shù)和雜草防除最活躍的研究領(lǐng)域。它具有投資少、研制周期短、專一性強、對環(huán)境安全和不產(chǎn)生污染等優(yōu)點。被認為是未來化學(xué)除草劑的替代產(chǎn)品。目前，商業(yè)化的生物除草劑品種有80年代初研制出的DeVine和Collego以及90年代末推出的Comperico和Biochon。這些除草劑在控制相應(yīng)的目標雜草上起到了重要作用，甚至是唯一的選擇。如DeVine的持效性可以保證使用一次，2-3年無須再除草。有希望商業(yè)化的生物除草劑項目有數(shù)十項，其中稗草、野荸薺等具有十分誘人的前景。但是，在國內(nèi)目前還沒有正在意義上商業(yè)化的生物除草劑。因此，要發(fā)展有機農(nóng)業(yè)非常缺乏相應(yīng)的除草配套產(chǎn)品和技術(shù)，而生物除草劑則是其中最理想的選擇。生防真菌又相對集中在半知菌亞門中以下幾屬(l)炭疽菌屬(Colletotrichum);(2)疫霉屬(Phytophthora);(3)鐮刀菌屬(Fusarium);(4)鏈格孢屬(Alternaria);(5)柄銹菌屬(Puccinia);(6)尾孢霉屬(Cercospora);(7)核盤菌屬(Sclerotinia);(8)葉黑粉菌屬(Entyloma);(9)殼單孢菌屬(Ascochyta)。目前成功應(yīng)用于作物生產(chǎn)并申請專利的主要有炭疽菌屬(Colletotrichumspecies)(US3，849，104和US3,999,973);鐮刀菌屬(Fusariumspecies)(US4,419,120);鏈格孢屬(Alternariaspecies)(US4,390,360);殼單孢菌屬(Ascochytaspecies)(US4,915,724)以及核盤菌屬(Sclerotiniaspecies)(CA02，292，233)等。而國內(nèi)還沒有小菌核菌屬，尤其小菌核菌菌株(Sclerotiumrolfsii)(SC64)的申報，也無用在草坪、高爾夫球場、公園及禾本科作物田防除闊葉雜草的植物病原菌生物除草劑。本發(fā)明從加拿大一枝黃花分離得到小菌核菌，試驗證明該菌對加拿大一枝黃花及多種闊葉雜草致病性強，對禾本科植物安全。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對旱直播水稻田的異型莎草、節(jié)節(jié)菜、鱧腸、陌上菜等，玉米等禾本科作物田的波斯婆婆納、馬齒莧等闊葉雜草及草坪的牛繁縷、繁縷、蒲公英、山萵苣等闊葉雜草，等以及水稻、玉米、草坪苗期及荒地等的惡性雜草加拿大一枝黃花(SolidagocanadensisL.)以及闊葉雜草等，篩選一種小菌核菌菌株，用于生物除草，能安全有效地控制和防治闊葉雜草及異型莎草、惡性雜草加拿大一枝黃花等，成本低，無污染，對農(nóng)作物安全。本發(fā)明一種小菌核菌菌株及其用于生物除草的方法，其內(nèi)容和實施方案如下羅氏白絹小菌核菌菌株SclerotiumrolfsiiSacc.(SC64)，(保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2009年3月12日保藏號:CGMCCN0.2934)，小菌核菌CGMCC2934屬于半知菌類(F皿giImperfecti)，無孢菌群(MyceliaSterilia)，小菌核菌屬(SclerotiumTodeexFr.)，羅氏白絹小菌核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)，PDA培養(yǎng)基上菌株SC64的菌落呈圓形，菌絲白色絹絲狀，茂盛，有隔膜，多分枝，分枝不成直角，呈放射狀擴散，菌絲致直徑3.56.5ym。710d后菌落上菌絲集結(jié)產(chǎn)生菌核。菌核表生，球形，只要產(chǎn)生于PDA培養(yǎng)基邊緣或培養(yǎng)皿蓋上，先呈白色或乳白色后變淺黃色至茶褐色或棕褐色，球形至卵圓形，內(nèi)部灰白色，表面光滑且具光澤，直徑為0.50.8mm。菌核表層由3層細胞組成，外層棕褐色，表皮層下為假薄壁組織，中間為疏絲組織。菌株(SC64)，只發(fā)現(xiàn)不孕性菌絲，產(chǎn)生菌核，但不在植物體內(nèi)部產(chǎn)生，亦不產(chǎn)生子囊盤和子囊孢子，不產(chǎn)生分生孢子。羅氏白絹小菌核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)具有相對簡單的侵染循環(huán)，菌核在土壤環(huán)境條件適宜情況下直接萌發(fā)產(chǎn)生侵染性菌絲，隨后完成對植物的侵染并在植物體表面及周圍形成更多的菌核。菌核的有性生殖萌發(fā)產(chǎn)生子囊孢子曾在自然條件下被觀察和報道，但極少發(fā)生，因此對病菌的侵染循環(huán)無重大影響。發(fā)明人在對加拿大一枝黃花的生物防治研究過程中發(fā)現(xiàn)了田間加拿大4一枝黃花的自然發(fā)病現(xiàn)象，故對其寄生真菌進行分離研究并嚴格按照柯赫氏法則(Koch'spostulate)進行了致病性驗證。首先分離獲得羅氏白絹小菌核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)菌株SC64，小菌核菌菌株SC64純培養(yǎng)產(chǎn)生的孢子在加拿大一枝黃花上的致病癥狀為加拿大一枝黃花菌核病菌主要侵染其莖基部，引起莖基部表皮黃化腐壞，壞死高度為37cm。病菌侵染后57d植株葉片自頂部開始出現(xiàn)萎蔫下垂，1520d即可引起高為11.5m的成株加拿大一枝黃花死亡。隨后菌絲體迅速在土表靠近加拿大一枝黃花莖稈處產(chǎn)生了白色菌核，并很快轉(zhuǎn)變?yōu)辄S褐色。棉籽殼培養(yǎng)的菌體顆粒接種后結(jié)果顯示所有加拿大一枝黃花在接種后57d即出現(xiàn)了明顯的莖基部表皮壞死，引起的癥狀與自然患病情況類似，死亡率達95%以上。采集罹病加拿大一枝黃花植株，剪取病健交界處莖稈表皮及采集該病原菌的菌核，用1。；升汞溶液進行表面消毒，然后置于PDA培養(yǎng)基上，在28t:恒溫箱中培養(yǎng)，觀察到菌絲生長情況及菌核產(chǎn)生情況也與前面相似。說明所分離到的小菌核菌是加拿大一枝黃花的病原真菌，且為加拿大一枝黃花的強致病菌。本發(fā)明的小菌核菌菌株(SC64)分離自加拿大一枝黃花，但它具有廣譜的闊葉雜草致病力，同樣它的另一個優(yōu)點在于可以有效殺死闊葉雜草而不影響周邊的禾本科植物。從這一點看，小菌核菌菌株(SC64)具有與化學(xué)除草劑2，4-D同樣的專一性，但卻對環(huán)境安全。以上實驗條件下的發(fā)病癥狀與自然病癥相似。按其特征鑒定為半知菌類(FungiImperfecti)，無孢菌群(MyceliaSterilia)，小菌核菌屬(SclerotiumTodeexFr.)，羅氏白纟昌小菌核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)，該菌株會g侵染菊禾斗(Asteraceae)、豆禾斗(Xeguminosae)、大卓戈禾斗(Euphorbiaceae)、石竹科(Caryophyllaceae)、車前科(Plantaginaceae)等的闊葉雜草，對水稻、小麥、玉米等主要禾本科作物和高羊茅等禾本科草坪草高度免疫，以及供試的其它19科32種植物，26種高度免疫、6種免疫(表1和表2)，故可以用于水稻、小麥、玉米等主要禾本科作物和草坪，防除闊葉雜草。本發(fā)明小菌核菌SclerotiumrolfsiiSC64用于生物除草的防除對象為菊科、旋花科、唇形科、十字花科、玄參科、?？?、莧科、石竹科、錦葵科、鴨跖草科、莎草科、大戟科、寥科、報春花科、豆科、馬齒莧科、茄科、車前科、酢漿草科、毛茛科、千屈菜科的闊葉雜草；對禾本科作物玉米、水稻、小麥、大麥、甘蔗、高粱、谷子以及禾本科草坪狗牙根、結(jié)縷草、高羊茅、早熟禾、剪股穎、地毯草、大葉油草、假儉草、海濱雀稗安全；因而，可用于禾本科作物和草坪上，控制闊葉雜草；特別還可以控制外來雜草紫莖澤蘭、加拿大一枝黃花、小飛蓬、蘇門白酒草。本發(fā)明的小菌核菌SclerotiumrolfsiiSC64用于生物除草。具體的應(yīng)用方法為將菌種接種于基質(zhì)，固體發(fā)酵后通風(fēng)晾干制得除草菌顆粒；撒施于田間或雜草發(fā)生地，使用劑量為30至150gm—2。所說的基質(zhì)是常規(guī)的基質(zhì)，具體可以是棉籽殼、酒糟、醋糟、雞糞、豬糞、中藥藥渣、麩皮、加拿大一枝黃花、紫莖澤蘭、玉米或小麥秸稈粉碎基質(zhì)。其培養(yǎng)方法為該菌采用液體_固體聯(lián)合發(fā)酵的大批量生產(chǎn)方式，即先以液體發(fā)酵培養(yǎng)菌絲體，后在固體基質(zhì)或培養(yǎng)基上固定發(fā)酵培養(yǎng)，生產(chǎn)真菌侵染的基質(zhì)，基質(zhì)在晾干過程中會產(chǎn)生菌核。生產(chǎn)流程實驗室菌種一一級種子(培養(yǎng)皿平板)一液體接種發(fā)酵一固體培養(yǎng)基混勻(接種)一通風(fēng)晾干一粉碎一干真菌侵染基質(zhì)一助劑一劑型一室溫(102(TC陰涼干燥密封保存)一貨架期活力檢測。可用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)得到液體菌種PDA液體培養(yǎng)基一一馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯200g葡萄糖20g水1LLEPDA培養(yǎng)基-一加拿大一枝黃花浸汁PDA液體培養(yǎng)基加拿大一枝黃花莖葉60g(洗凈晾干，粉碎，過濾)馬鈴薯200g葡萄糖20g蒸餾水1LMSSA培養(yǎng)基一-玉米粉豆粉蔗糖固體培養(yǎng)基玉米粉15g黃豆粉15g蔗糖15g瓊脂20g水1L優(yōu)化Richard液體KH2P04lgKC10.5gMgS042.5gFeCl30.Olg葡萄糖25g酵母膏2.5g水1L該菌固體發(fā)酵菌顆粒的大批量生產(chǎn)用液體-固體聯(lián)合培養(yǎng)辦法生產(chǎn)。其主要的步驟包括用PDA液體培養(yǎng)基或玉米粉豆粉蔗糖液體培養(yǎng)基，對小菌核菌進行培養(yǎng)約4天，以棉籽殼等為固體發(fā)酵基質(zhì)，滅菌后接種液體菌種發(fā)酵7天。i棉籽殼lOOOg(晾干)夜#帛禾中50ml尿素(或其他氮源)10g水600mlii酒糟lOOOg(晾干)夜#帛禾中50ml尿素(或其他氮源)10g水600mliii醋糟lOOOg(晾干)液體菌禾中50ml[OO54]尿素(或其他氮源)10g水600mliv麩皮lOOOg(晾干)液體菌種50ml尿素(或其他氮源)10g水600mlv豬糞lOOOg(晾干)液體菌種50ml尿素(或其他氮源)510g水650mlvi加拿大一枝黃花秸稈粉碎基質(zhì)lOOOg(晾干，粉碎)夜亍本菌禾中100ml尿素(或其他氮源)1520g水10001200mlvii紫莖澤蘭秸稈粉碎基質(zhì)lOOOg(晾干，粉碎)液體菌種100ml尿素(或其他氮源)1520g水10001200mlviii玉米秸稈粉碎基質(zhì)lOOOg(晾干，粉碎)液體菌種80100ml尿素(或其他氮源)1015g水1000mlix小麥秸稈粉碎基質(zhì)lOOOg(晾干，粉碎)液體菌種100ml尿素(或其他氮源)1520g水1000mlx稻草粉碎基質(zhì)lOOOg(晾干，粉碎)液體菌種100150ml尿素(或其他氮源)1520g水15002000mlxl雞糞lOOOg(晾干)液體菌種50ml水400-850mlxl雞糞500g+稻草粉碎基質(zhì)500g夜亍本菌種100150ml尿素(或其他氮源)510g水8002000ml每天翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)基，待菌絲長滿后將發(fā)酵菌顆粒于通風(fēng)櫥晾干得到除草菌顆粒。任何適合于小菌核菌生長的谷物及其他固體基質(zhì)均可以按照同樣的方法發(fā)酵得到除草菌顆粒。此外，其他同屬的小菌核菌亦可以采取同樣的培養(yǎng)方式，開發(fā)作為生物除草劑。本發(fā)明的主要優(yōu)點和積極效果如下小菌核菌用于生物除草，可制成富含其菌絲體的除草菌顆粒，可以在禾本科作物與這些雜草間進行安全地選擇。在供試的29科共82種植物中，對小菌核菌SC64菌株不敏感的(高度免疫)有20種，主要是禾本科、藜科、莧科的空心蓮子草和牛膝；稍敏感的(免疫)有4種，敏感的有58種，主要分布在菊科、旋花科、大戟科、石竹科、玄參科、千屈菜科等。從形態(tài)角度看，菌絲主要侵染莖基部及靠近土壤的植株莖和葉，植物匍甸生長于地表更容易被侵染，植株莖稈含纖維素較多不容易被侵染，禾本科植物由于莖稈豎立，纖維含量高，不容易被侵染。從分類角度看，菊科的多種雜草對該菌也很敏感，大戟科、石竹科、玄參科等的闊葉雜草對該菌敏感。表1供試雜草對小菌核菌菌株SC64的敏感性供試寄主雜草(Hostweeds)致死率(%)致病等級(05)a潛育期(d)菊科Asteraceae續(xù)斷菊S。"c/zmsasper(L.)Hill303.74~6黃鵪菜KtOTgz'a_/apom-ca(L.)DC.704.4刺兒菜CepAa/ac;p/osseg她附(Bunge)Kitam.504.04一年蓬￡Wgera"awMUS(L.)Pers.453.55~7泥胡菜說附is嘩to/[yratoBunge40"4天名精Ca7e血加(2ftroto"o!'iiasL.1005.0韋占形紫雜Js/errafcw/aftwMichx.603.27黃花蒿爿rte附is/aa朋"aL603.03~7力口拿大一枝黃花So/WagocamMfe柳'iSL.854.94~7野艾蒿」r/e加is/a/"va;^M/a咖/!'(3DC.203.5蘇門白酒草CoMj^zarawafrefcz's(Reez)Walker804.8苦苣菜So"c/juso/eracewsL.854.8鱧腸五c/^ptopras&ata(L.)L.704.146山萵苣丄actoca/WcaL.854.5菊花腦sa"fA柳M7wKiOTfo'wgeraseHand.-Mazz.804.94~7稻搓菜丄a;wv2wa5伊MWa/wgowofcfes(Maxim.)J.H.1005.03~7Pak&K.Bremer.蒼耳Xa",/w.w/ws沾/"'c鵬Patrin.331.3小飛蓬Cow，ca"ac卿&(L.)Cronq403.64~7旋覆花/ww/。乂apo"z'caThunb.332.8膝草/i附6row》L.503.3紫莖澤蘭五wpaton'w附acfe"op/jorwwSpreng.402.24蒲公英7brax:acw附wogo//c/wHand.-Mazz.774.33~5黃頂菊F/averiabWenfe(L.)Kuntze824.62~6薇甘菊fl/W/can/'a/n/'cran的aHBK784.13~6飛機草E叩ato〃'umocforafumL804.436旋花禾斗Convolvulaceae打碗花Ca(y她g/a/zefifemceaWall.ExRoxb.352.846圓葉牽牛iVwrWto;w/7wrea(L.)Voigt.754.04~6裂葉牽牛PtorWfe"http://(L.)Choisy704.04~6傘形科Umbelliferae野胡蘿卜D。"c"scoTO/aLinn.01.7唇形禾斗Lamiaceae蘊枝草Sa/由p/e6e/"R.Br.334.05~7寶蓋草a邵feric認/eL.854.73~7十字花禾斗Brassicaceae遏藍菜77!toj3!'arve""L.00一98/13頁界菜Co[fwe//a6"rsa-;asfcv/s(L.)Medic.403.33~5碎米薺C。nAj7w!.we/w'rawtoL.50"3~5印度薛菜Wo傘p")Hiern00—桑禾斗Moraceae萚草加翻/usscawc/era(Lour.)Merr.331.7覓禾斗Amaranthaceae空心蓮子草^maw狄era;/H7axera!'cfes(Mart.)Griseb.00牛膝^4c//_yraf/asBlume00一反枝莧J附araw決usw/rq/fecMSL.754.235玄參禾斗Sorophulariaceae波斯婆婆納rera"/caper'caPoir.774.04北水苦荬Pfera"/ca"waga/fc-a《Ma"caL.502.84陌上菜"c"附fcms(Krock.)Philcox804.9通泉草Mazwsyapom'cws(Thunb.)0.Kuntze704.83茜草科Rubiaceae豬殃殃Gfl"wnqpa"'"evacfewwww(Gren.EtGodr.)Rcbb.202.03石竹科牛繁縷A/a/ac/K'鵬ag認ft'c謂(L.)Fries653.74~5Caryophyllaceae禾占毛巻耳Cem幼'w加v&ccwmwL.553.64爵床禾斗Acanthaceae爵床ia$/e//w/w'oj9rocwZ>e;w(L.)Nees202.27錦葵科Malvaceae苘麻^wri/o"快eo/Aras//Medic.201.3鴨跖草科飯包草Co附附Wwa6e"ga/e/wfcL,253.55~7Commelinaceae甲鳥妬草Go附mdiHaco附附w"isL.503.74~7莎草禾斗Cyperaceae香附子C>pmrafttfK^L.00一異型莎草C^pemsL.504.23~4大戟禾斗Euphorbiaceae澤漆^p/oWfl！fteZ/axcqp^L.854.83~5鐵莧菜Jca脈toaus的/isL804.5蓼禾斗Polygonaceae粘毛蓼/"o(ygo"w附v/scosw附Buch.-H咖.704.07齒果酸模L.01,35~7羊蹄)。/ww/cusHoutt.01.57報春花科Primulaceae金爪兒iw'附ac/K'aH肌ce402.84~7澤珍珠菜iyWmacft!'acancft'cfcLindl.453.14~6雜牛兒苗科Geraniaceae野老鶴Geraw'w附cto/"H鵬Linn.754.0畫畫豆禾斗Leguminosae大巢菜Wc/aiSaft'vaL.251.7藜禾斗Chenopodiaceae藜C7ze"cpo血/M。/6鵬L.00—小藜C7i￡c|p。<iz'wseraft'"鵬L.00—馬齒莧禾斗Portulacaceae馬齒莧/Ww/aajfoferaceaL.704.43~6茄禾斗Solanaceae龍葵iSo/a聰附^grwKL.00.34~7白英iSo/aw固Thunb.904.92萌盧科Cucurbilaceae絲瓜丄z^)fcy//"rfh'ca(Linn.)Roem674.32車前科Plantaginaceae車前尸/朋啤oox她'caL.754.2商陸禾斗Phytolaccaceae美洲商陸尸/zyto/accaa附er!'ca"aL.00—酢漿草科Oxalidaceae酢漿草ftcafccor"Zcw/atoL.1005.03毛茛禾斗Ranunculaceae石龍丙ia"wwcw/ussce/eraftisL.1005.0千屈菜禾斗Lythraceae節(jié)節(jié)菜Woto/a!W'.ca(Willd.)Koehne874.62耳葉7jC莧y4/w隱""/aiw"a"'c/H.654.04未本科Gramineae早熟未Poaaw7如L.00—馬唐D"。"'asa"gw'wato(L.)Scop.00—狗尾草v&Ws(L)Beauv.00—牛筋草五/eux/we/wfca(L.)Gaertn.00—狗牙根Cy"oc/o"dac(y/oKL.00—高羊茅Festocae/ataKengexE.Alexeev00—剪股穎々rosfeffxatewniMraeHack.ExHonda00—結(jié)縷草ZoyVajV3p0"/caSteud.00—地毪草^jkwjo/imjco附j(luò)cros咖(Swartz)Beauv.00—假儉草￡moc/j/o<2cp/K'wro她s(Munro)Hack.00—海濱雀稗Pos/a/wwvagz'w"加附Sw.00—黑麥草丄oZ/脂L00—注a:致病等級評價0-不致病；1_125%的組織壞死；2-2650%的組織壞死；3-5175%的組織壞死；4-7699%的組織壞死；5-植株整體壞死，下同。表2供試作物對小菌核菌菌株SC64的敏感性情況供試作物致死率致病等級潛育期(o/o)C0~5)(d)未本禾斗Gramineae小麥7Wft'c鵬(3ayft'VM/KL00—玉米Zgo附a"L00水稻Ofzasatt'vaL.00大麥/forefeM7Mvw/g(areLinn.00—甘蔗Socc/wra;wtyceMr鵬L.00—高粱Sorg/iWOTv"/garePers.00—谷子iStetan'az'Wca(L.)Beauv.00—豆科Leguminosae大豆G/戸'"emar(L.)Merr.(1)894.72大豆G/yc/"e/wax(L.)Merr.(2)804.53蠶豆Mc/a^aLinn.784.43~5綠豆/Vzo^o/m5rad/a加L.824.52花生」racWs/ypg"eaL.502.8茄科Sol肌aceae辣椒Ca/w/cw附如tescewsL.854.4錦葵科Malvaceae棉花Gos卿/鵬/n.ra由附L.804.23~4十字花禾斗Brassicaceae蘿卜及qp/ja"wssaft'vw5874.73油菜5,aw/caca附/e欲/sL.834.42青菜5mssicac/w'"e"sisL774.5胡麻禾斗Pedaliaceae芝麻5"esa附w附/"血m附Linn.804.02傘形科Umbelliferae芫荽Co"'a"c/n/附s加Vm7wL.804.22~3百合禾斗Liliaceae大蒜爿〃/mwjs油Va附/654.25~7根據(jù)以上測試結(jié)果，小菌核菌菌株SC64對禾本科供試植物安全，對草坪草安全，對菊科、大戟科、石竹科、玄參科等闊葉雜草以及異型莎草等雜草敏感性較高，在旱直播水稻田、麥田、玉米田和草坪等可以安全使用，并能同時用于控制上述闊葉雜草。這再次表明了小菌核菌菌株SC64具有開發(fā)為防除闊葉雜草生物除草劑的潛力。本發(fā)明用生物除草，是利用活的生物本身，該生物是直接采集于農(nóng)田自然環(huán)境，是目標作物田間及其環(huán)境中發(fā)生的目標雜草的天然致病菌，由于環(huán)境中已經(jīng)存在，故沒有在使用過程中的生態(tài)風(fēng)險，加之，該菌株對禾本科作物、草坪草及其它非目標植物安全性高，不會導(dǎo)致對環(huán)境的殘留危害。其菌體死亡后迅速腐化降解，其降解產(chǎn)物均為可循環(huán)有機物，不會因使用導(dǎo)致污染，此外，小菌核菌菌株除草菌顆粒采用農(nóng)業(yè)廢棄物棉籽殼(或麩皮、酒糟、醋糟、玉米秸稈粉碎基質(zhì)、小麥秸粉碎基質(zhì)、加拿大一枝黃花粉碎基質(zhì)等固體培養(yǎng)基)為發(fā)酵基質(zhì)，可以有效進行廢物利用，把秸稈等作為有機肥回歸農(nóng)田。因而，對環(huán)境安全，可用于生產(chǎn)出綠色或有機農(nóng)產(chǎn)品。具體實施例方式實施例1:從自然發(fā)生于南京的加拿大一枝黃花病害植株上采集分離出小菌核菌，對它的致病性進行了試驗。從野外采集到患病加拿大一枝黃花的莖和根，記錄植株發(fā)病癥狀，鏡檢。用加拿大一枝黃花汁瓊脂培養(yǎng)基進行病原真菌的分離。挑取菌株的單菌核，分別接種在PDA培養(yǎng)基上，于黑暗，28±rc下培養(yǎng)，觀察病原真菌純培養(yǎng)的菌落特征并測量各菌落直徑。在溫室條件下對比了不同小菌核菌對闊葉雜草的致病力。Sc085分離自秋海棠，Sc087分離自花生。測試的雜草包括小飛蓬(Conyzacanadensis(L.)Cronq.)、續(xù)斷菊(Sonchusasper(L)Hill)、大巢菜(ViciasativaL)、波其jf婆婆纟內(nèi)(VeronicapersicaPoir.)和馬唐(Ditariasanguinalis(L.)Scop.)測試過程保持土壤濕潤，溫度在28士rC，試驗結(jié)果如3所示。表3菌株SC64與其他小菌核菌分離系對不同雜草致病力的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例2:將棉籽殼固體基質(zhì)按照1:0.6加水混勻后，常規(guī)滅菌，冷卻后接生長旺盛的PDA邊緣的SC64菌種，每天翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)基，待菌絲長滿后將發(fā)酵菌顆粒于通風(fēng)櫥晾干得到除草菌顆粒并及時用于試驗，使用滅菌的棉籽殼基質(zhì)作對照。室內(nèi)測試了小菌核菌菌株SC64對鱧腸(第4對真葉期)、山萵苣(4葉期)、馬齒莧(第45對真葉期)、加拿大一枝黃花(6葉期)和陌上菜(初花期)等幾種目標雜草的防除效果，試驗時期溫度在2230°C。表4小菌核菌菌株SC64對幾種主要目標雜草的防除效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注小寫字母為0.05顯著水平，大寫字母為0.01顯著水平(下同)。實施例3:按實施例2的方法，測試了小菌核菌菌株SC64不同固體發(fā)酵除草菌顆粒對鱧腸24對真葉年齡的致病力。表5菌株SC64不同固體發(fā)酵除草菌顆粒對鱧腸的致病效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例4:在直徑為20cm花盆種植玉米及波斯婆婆納、馬齒莧闊葉雜草。待雜草長至第45對真葉期按實施例2的方法施用除草菌顆粒。各3個重復(fù)。表6小菌核菌菌株SC64對玉米田雜草的防除效果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例5:按實施例2的方法，生產(chǎn)出除草菌顆粒，測試了小菌核菌菌株SC64防除水稻田雜草室外初步試驗。試驗地水田雜草以陌上菜為主。試驗統(tǒng)計時把陌上菜以外雜草節(jié)節(jié)菜和異型莎草，少量耳葉水莧、通泉草一同進行防效分析。表7SC64除草菌顆粒防除水稻田雜草的株防效(藥后5天)除草菌顆粒劑量陌上菜其他雜草<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表8SC64除草菌顆粒防除水稻田雜草的株防效和鮮重防效(藥后10天)除草菌顆粒劑陌上菜其他雜草陌上菜其他雜草<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實施例6:按實施例2的方法，生產(chǎn)出除草菌顆粒，測試了小菌核菌菌株SC64防除草坪雜草室外初步試驗。試驗地草坪雜草以酢漿草為主。試驗統(tǒng)計時把酢漿草以外雜草一同進行防效分析。表8SC64除草菌顆粒防除草坪雜草的株防效(藥后10天)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>權(quán)利要求一種小菌核菌菌株，其特征在于它是羅氏白絹小菌核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)CGMCCNO.2934。2.權(quán)利要求1所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，為將小菌核菌菌株Sc-07菌種接種于基質(zhì)，固體發(fā)酵后通風(fēng)晾干制得除草菌顆粒；撒施于田間或雜草發(fā)生地。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，其特征在于，所說的基質(zhì)是棉籽殼、酒糟、醋糟、雞糞、豬糞、中藥藥渣、麩皮、加拿大一枝黃花、紫莖澤蘭、玉米或小麥秸稈粉碎基質(zhì)。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，其特征在于，用于禾本科作物或草坪上，控制闊葉雜草。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，其特征在于，所說的闊葉雜草是菊科、旋花科、唇形科、十字花科、玄參科、?？啤⑶{科、石竹科、錦葵科、鴨跖草科、莎草科、大戟科、寥科、報春花科、豆科、馬齒莧科、茄科、車前科、酢漿草科、毛茛科、千屈菜科的闊葉雜草。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，其特征在于，用于控制紫莖澤蘭、加拿大一枝黃花、小飛蓬、蘇門白酒草、黃頂菊、薇甘菊、一年蓬、飛機草。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述小菌核菌菌株用于生物除草的方法，其特征在于，小菌核菌菌株除草菌顆粒使用劑量為30至150gm—2。全文摘要本發(fā)明為一種小菌核菌菌株及其用于生物除草的方法，屬于微生物應(yīng)用于農(nóng)業(yè)植物保護領(lǐng)域。小菌核菌菌株(SC64)CGMCCNO.2934。用該菌株進行固體發(fā)酵得到的除草菌顆粒使用劑量30至150g·m-2，用在禾本科作物玉米、水稻、小麥、大麥、甘蔗、高粱、谷子以及禾本科草坪狗牙根、結(jié)縷草、高羊茅、早熟禾、剪股穎、地毯草、大葉油草、假儉草、雀稗，控制闊葉雜草。此外，還可以特別應(yīng)用于控制危害嚴重的紫莖澤蘭、加拿大一枝黃花、小飛蓬、蘇門白酒草、黃頂菊、薇甘菊、一年蓬、飛機草等外來入侵性雜草。對目標雜草控制效果可以達到80％以上。具有安全、環(huán)保的特點。文檔編號A01N63/02GK101712938SQ200910030759公開日2010年5月26日申請日期2009年4月15日優(yōu)先權(quán)日2009年4月15日發(fā)明者唐偉,強勝,朱云枝,陳世國申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)