專利名稱：大量生產(chǎn)大棘多彩沙鰍的方法
大量生產(chǎn)大棘多彩沙鰍的方法本發(fā)明的目標(biāo)在于大量生產(chǎn)鯉形目(Cypriniforms)尤其是鰍科(Cobitidae)的 魚，特別是大棘多彩沙鰍(也稱為皇冠沙鰍或小丑鰍)(Chromobotia macracanthus)的方法。1996年，觀賞魚和觀賞無脊椎動物的出口額超過了 2億歐元，其中超過60% (即 大約1.3億歐元)成為發(fā)展中國家的積蓄。自從1985年以來，觀賞水生生物的國際貿(mào)易以 14%的平均年進度增加。以野生狀態(tài)捕獲的生物僅占總觀賞貿(mào)易的很小的百分比。但是， 該產(chǎn)業(yè)的這一方面將可能對于發(fā)展中國家的漁民群體具有最大的影響。亞洲和南美洲在世界上是觀賞魚的主要供應(yīng)者，而美國、歐洲和日本是主要的進 口者。1998年，東南亞的水族箱魚產(chǎn)業(yè)據(jù)估計在1.5至2億歐元之間，并且新加坡(迄今最 大的出口國)賣出8至9千萬歐元。這些數(shù)字還是低估的，據(jù)說僅東南亞就超過3至4億 歐元。新加坡的生產(chǎn)主要基于來自鄰近國家例如印度尼西亞、馬來西亞、錫蘭和泰國的魚的 重新調(diào)養(yǎng)(reconditionnement)禾口轉(zhuǎn)賣。盡管印度尼西亞的生產(chǎn)中的一部分經(jīng)過新加坡，但來自印度尼西亞的水生生物出 口在官方上為1.34千萬歐元，該數(shù)字使印度尼西亞在2004年位居第四位世界出口國。然 而，由印度尼西亞機場檢疫機構(gòu)給出的值為1. 3億歐元。根據(jù)海事和漁業(yè)部所稱，該國擁有 48000個大大小小的淡水觀賞魚生產(chǎn)商，他們每年生產(chǎn)超過6千萬條魚。在這些生產(chǎn)商中， 許多迫切期待可靠的生產(chǎn)大棘多彩沙鰍的技術(shù)。在東南亞淡水觀賞魚產(chǎn)業(yè)中，大棘多彩沙鰍(Bleeker)被歸類在“類別1”中。原產(chǎn) 于印度尼西亞且在蘇門答臘和加里曼丹的河流中捕獲的大棘多彩沙鰍被出口到所有大陸。 由于在歐洲賣6至8 € (甚至更多)，因而國際交易據(jù)估計在1998年為2千萬的出口自印 度尼西亞的大小為3至8cm的個體。看起來該數(shù)字是被大大低估的，并且國際需求經(jīng)常性 地增長。這些估計僅針對出口數(shù)目，而未考慮收獲后的損失(疾病，應(yīng)激等)或者所造成的 損害(生境，附帶捕獲的其他水生物種)。該領(lǐng)域從業(yè)人員注意到，自差不多30年來遭受強 度越來越大的捕撈的幼魚捕獲量經(jīng)常性地下降。很明顯，該物種被過度利用了并且受到了 威脅，這致使印度尼西亞政府在2002年通過法令禁止出口被認(rèn)為性成熟的大于15cm的魚。 該法令的目的在于保護在其自然環(huán)境中的親魚。如果在接下來的數(shù)十年期間，來自飼養(yǎng)的幼魚未滿足國際需求，那么大棘多彩沙 鰍將和其產(chǎn)業(yè)一起消失，而在局部范圍內(nèi)該魚的開發(fā)利用對于鄉(xiāng)鎮(zhèn)來說是重要的收入來 源。此外，在國際范圍內(nèi)，從業(yè)人員越來越牽涉和受限于關(guān)于環(huán)境保護的國際標(biāo)準(zhǔn)，并 且超過80 %的目前商業(yè)化的物種來自飼養(yǎng)。因此，掌握該物種的生產(chǎn)周期是國際性的焦點問題，并且似乎已在泰國、馬來西 亞、捷克共和國、俄羅斯和佛羅里達偶然獲得了蓄養(yǎng)的大棘多彩沙鰍的人工繁殖，但沒有任 何報道或文章對此進行確認(rèn)，也不存在有相應(yīng)的技術(shù)支持。2005年，盡管印度尼西亞的研究機構(gòu)試圖掌握大棘多彩沙鰍的繁殖周期已愈 10 年(Satyani D. (2004) Journ. Penel. Perid. Indon. 10(5)，第 55—59 頁；Satyani D.，H. Mundriyanto, T. Kadarini dan Kusdiarti2005 Prosiding Seminar Nasional dan Konggres Biologi XIII. Fakultas Biologi UGM· Yogyakarta，第 435-438 頁；Subandiyah S. (2005)Prosiding Seminar Nasional dan Konggres Biologi XIII. Fakultas Biologi UGM. Yogyakarta，第 290-293 頁；Subandiyah S. danD. Satyani(2004)Prosiding Seminar Biologi menuju Millenium III. Fakultas Biologi UGM. Yogyakarta,第 127-136 頁)， 但還沒能夠建立起任何的生產(chǎn)技術(shù)路線。通過使用激素植入物，通過測試強化的或天 然的飼料，通過改變光周期，進行了關(guān)于在自然環(huán)境下的成熟，關(guān)于在蓄養(yǎng)下性成熟的 刺激和改善的研究工作(Satyani D.，Chumaidi danKusdiarti. (2006)Pros. Sem. Nas. Pengembangan Tekn. BudidayaPerikanan dan Temu Bisnis Kerapu. Balai Besar Riset Perik. Budidaya Laut Gondol dan Balai Riset Perik. Air Payau, Maros. PRPB-BRKP. Bali.Ill；Subandiyah S. (2005)Prosiding Seminarnasional Perikanan Indonesia. STP. Jakarta,第 185-192 頁；Chumaidi. (2005) Prosiding Sem Nasional Tahunan Hasil Penel. Perik. dan Kelautan. UGM. Yogyakarta,第 249-254 頁；Effendi I., Τ. Prasetya, Α. 0. Sudrajat, N. Suhenda 禾口 K. Sumawidjaja(2003)JurnalAkuakultur Indonesia,2 (2)， 第 51-54 頁；Satyani D. , Τ. Kadarinidan 0. Komarudin(1999)Journ. Penel. Perik. Indon. II (4) ,H 37-42 M ；Subagja J. ，0. Komarudin dan J. Effendi. (1997) Jurn. Penel. Perik. Indon. 111(2),H 10-17 頁)。然而，在這些研究結(jié)束后，在蓄養(yǎng)下維持的大棘多彩沙鰍的親魚依然難以達到其 完全的性成熟。它們的性成熟是不確定的，具有短的持續(xù)時間，并且依賴于氣候波動。盡管 有時在排卵的激素誘導(dǎo)后獲得受精卵，但結(jié)果仍然具有差的可重復(fù)性并且沒有任何顯著有 效的魚苗生產(chǎn)。生產(chǎn)周期依然是失敗的，并且采集的卵子的數(shù)量比在自然環(huán)境下獲得的更 低。授精率非常低，在孵化期間超過70%的卵死亡，并且在孵出后5至9天100%的仔魚死 亡。因此，存在著對于擁有生產(chǎn)大棘多彩沙鰍幼魚的方法的巨大需要，所述方法應(yīng)是 可靠的、可重復(fù)的并且使得能夠獲得高授精率以及卵和仔魚的高存活率。在工作中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了使得能夠解決所有這些問題的飼養(yǎng)條件，并且制定出了 可靠的、可重復(fù)的并且使得能夠獲得高授精率以及卵和仔魚的高存活率的方法。因此，本發(fā)明的目標(biāo)在于在處于封閉管路系統(tǒng)(circuit)中的飼養(yǎng)設(shè)施之中大量 生產(chǎn)鯉形目，尤其是鰍科的魚的方法，所述方法包括下列步驟a)在供給以水的飼養(yǎng)槽中，以5至15條魚/m3，有利地6至7條魚/m3的密度，在 微光下飼養(yǎng)雄性和雌性親魚，所述水的溫度在6至15個月的時間段期間，有利地在14個月 期間維持在30至32 °C，隨后，將其溫度降至25-29 °C，有利地25-26 °C，并且在1至6個月， 有利地3個月的時間段期間維持在該值，其中在整個飼養(yǎng)時段期間以下述方式飼喂親魚 早晨用按照魚生物量的0. 5至配給的復(fù)合飼料進行飼喂，和晚上用占魚生物量的至少 10%，有利地占所述生物量的10至15%的蚯蚓進行飼喂，b)選擇出卵母細(xì)胞直徑為1. 00至1. 32mm的雌性親魚，c)選擇出通過腹部按摩其體內(nèi)精液容易地流出的雄性親魚(性成熟的階段3)，d)對雌性親魚進行激素處理，·要么通過兩次注射純化的或以合成類似物形式的促性腺激素釋放激素與抗多巴胺能化合物的組合，所述注射以5至8小時，有利地等于6小時的間隔時間而分隔開，第一 次注射的劑量對于促性腺激素釋放激素及其合成類似物而言為2至10μ g/kg，有利地等于 8 μ g/kg,和對于抗多巴能化合物而言為1至5mg，有利地等于％ig，并且第二次注射的劑量 對于純化的或以合成類似物形式的促性腺激素釋放激素而言為8至12μ g/kg，有利地等于 12 μ g/kg,和對于抗多巴能化合物而言為4至6mg，有利地等于6mg， 要么通過第一次按照250至500IU/kg，有利地按照500IU/kg注射人絨毛膜促性 腺激素(hCG)，隨后在18小時至沈小時后第二次注射純化的或以合成類似物形式的促性 腺激素釋放激素與抗多巴胺能化合物的組合，以對于純化的或以合成類似物形式的促性腺 激素而言4至12 μ g/kg,有利地12 μ g/kg的劑量，和以對于抗多巴能化合物而言2至6mg/ kg，有利地等于6mg/kg的劑量，e)對雄性親魚進行激素處理，通過注射純化的或以合成類似物形式的促性腺激素 釋放激素與抗多巴胺能化合物的組合，以對于純化的或以合成類似物形式的促性腺激素而 言2至10 μ g/kg,有利地等于8 μ g/kg的劑量，和以對于抗多巴能化合物而言1至5mg/kg， 有利地等于細(xì)g/kg的劑量，f)在雌性親魚中通過腹部按摩來采集卵子，這以平均潛伏間隔時間(注射和卵子 的采集之間的間隔時間)來進行，所述平均潛伏間隔時間根據(jù)下述關(guān)系依照在激素處理和 排卵之間的潛伏期期間用于圈養(yǎng)親魚的水的溫度( 至31°C，但有利地沈至)和所 采用的激素處理的性質(zhì)而變化-對于以兩次連續(xù)注射與抗多巴胺能化合物相聯(lián)合的促性腺激素釋放激素來進行 處理Y (潛伏時間，以小時表示)=413. 97-29. 47X+0. 54X2 (R2 = 0. 670)，其中 X =以攝氏度表示的溫度，-對于以注射hCG并隨后注射與抗多巴胺能化合物相聯(lián)合的促性腺激素釋放激素 來進行處理Y(潛伏時間，以小時表示)=771. 51-54. 08X+0. 96X2 ； (R2 = 0. 652)，其中 X =以攝氏度表示的溫度，g)在激素處理后10至48小時，有利地12至M小時，將雄性親魚的精液直接采集 在精子活動抑制溶液中，有利地在鹽水溶液(0.9% NaCl)中，并且保存于陰涼處，有利地在 4°C 下，h)對卵進行體外授精，i)將卵在M至的溫度下，有利地在下，在輕微擾動下進行孵化，直至孵 出，j)收集仔魚，k)飼養(yǎng)仔魚直至幼魚階段。鯉形目(Cypriniforms)包括爬鰍科(Balitoridae)、亞口魚科(Catostomidae)、 鰍科(Cobitidae)、鯉科(Cyprinidae)、雙孔魚科(Gyrinocheilidae)和裸吻魚科 (Psilorhynchidae)。在本發(fā)明的一個有利的實施方案中，所述方法涉及飼養(yǎng)鰍科物種，特 別是大棘多彩沙鰍，其尤其來自蘇門答臘和婆羅洲(加里曼丹)的種群?！拔⒐?p6n0mbre) ”是指其中發(fā)光度為O至20Lux，有利地5至IOLux的條件；因此，親魚可以在部分覆蓋有蓋子的池中或者在具有攝影印相的實驗室類型的紅色光照的封 閉圍殼中進行飼養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明，所述魚在早晨經(jīng)歷本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)飼喂；它們可以尤其 是每周6天進行喂食，在早晨用包含例如35至45%的蛋白質(zhì)和5至15%的脂質(zhì)的復(fù)合飼 料進行喂食；飼喂的選擇屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍，需要的話，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠 調(diào)整該飼喂。晚上供應(yīng)蚯蚓對于獲得良好的親魚來說是必要的要素。在根據(jù)本發(fā)明方法的步驟b)和C)中，有利地將魚放置在小尺寸的圈養(yǎng)設(shè)施(例 如，150至300L的槽)中，以便有助于在激素處理期間和隨后在采集配子時對它們進行操 作。在步驟f)結(jié)束時，在常規(guī)條件下，尤其是在不超過10分鐘的時間段期間，在25至 的溫度下保存卵子直至授精。在步驟g)結(jié)束時將精子保存于陰涼處使得能夠?qū)⑹褂猛七t幾個小時。在根據(jù)本發(fā)明的方法的一個有利的實施方案中，所述促性腺激素釋放激素的合成 類似物選自GnRHa (有利地，D_Arg6，Trp7，Leu8，Pro9, Net)或LHRH-A，并且所述抗多巴能 化合物選自多潘立酮和匹莫齊特。在根據(jù)本發(fā)明的方法的另一個有利的實施方案中，所使用的水為再循環(huán)水，其以 每小時更新占飼養(yǎng)體積的80%至100%的水的流量進行循環(huán)流動。有利地，所使用的水具 有7. 0至8. 0的pH，100至300 μ S/cm的電導(dǎo)率，并且其氧濃度為6. 0至8. Omg/L。在根據(jù)本發(fā)明的方法的另一個有利的實施方案中，步驟i)的卵的孵化步驟在適 度擾動的條件下來進行，所述適度擾動的條件以下述方式來獲得要么通過在水流中卵的 擾動，有利地在漏斗形的孵化器中，所述漏斗形的孵化器在漏斗的狹窄部分處包含底部進 水口，所述進水口具有20至30mm的直徑以允許0. 3L. mrT1至2. 3L. mrT1的進口水流量；要么 在不更新的水的容器中，所述容器放置在以56至88次擺動/分鐘在總幅度為10度(+5，-5) 的角度左右進行搖擺的托架上。“適度擾動”是指這樣的擾動，其足夠強以致將卵維持處于 運動中，但又足夠弱以致既不引起發(fā)育異常也不引起卵殼破裂。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法包括3個基本步驟1-性腺逐步成熟階段或構(gòu)建階段，其可以在相對較高的水溫下，有利地在30至 32 °C下進行，2-性成熟退化階段，如果將魚在延長的時間段期間維持在熱水(> 30°C )中，3-通過將溫度降低至25-26°C來刺激性腺的發(fā)育(向著卵黃發(fā)生完成)。除了水溫之外，飼喂的管理(非常充足地供應(yīng)蚯蚓)和良好水質(zhì)的維持是親魚的 健康良好及它們能夠進行其性腺成熟過程的決定性因素。根據(jù)本發(fā)明的方法具有下列優(yōu)點1.親魚(尤其是大棘多彩沙鰍的親魚)的飼養(yǎng)系統(tǒng)和條件，其使得能夠獲得這些 蓄養(yǎng)的魚的高的存活和良好的性成熟；2.用于選擇親魚的客觀標(biāo)準(zhǔn)，所述親魚能夠?qū)τ跒榱苏T導(dǎo)繁殖而進行的處理作出 應(yīng)答；3.有效的激素處理，其使得能夠在雌魚中誘導(dǎo)卵母細(xì)胞的最終成熟和排卵，并刺 激雄魚的精子排放；
4.確定了對于激素處理作出應(yīng)答的時間，以及采集和保存卵子和精子的方案；5.在人工授精后卵的孵化的可靠方式，其使得能夠獲得高的孵出百分比，其中具 有高比例的能成活的仔魚；6.仔魚的飼養(yǎng)條件，其使得能夠在1個月后獲得高存活率，所述1個月是將魚放置 到預(yù)擴大設(shè)施中時的年齡。在排卵誘導(dǎo)后獲得不太高(甚至為零)的平均孵出率依然是關(guān)于控制飼養(yǎng)的大棘 多彩沙鰍的繁殖的主要問題之一。這是因為，直至2006年，盡管獲得了令人滿意的排卵率 和受精卵百分比，但在卵孵化期結(jié)束后平均孵出率通常是非常低的06.5% 士25.2%)，其 中具有非常大比例的異常仔魚，平均為57. 6 士 25. 2 %。此后，發(fā)明人對于在掌握蓄養(yǎng)的大棘多彩沙鰍的繁殖中的這一關(guān)鍵時期所進行的 研究顯示了對于卵和胚胎的存活來說下述兩個主要因素的重要性卵的擾動和孵化的水溫。下面的實施例1至5和


圖1至9舉例說明了本發(fā)明。
圖1顯示了 根據(jù)水溫，在實施例1的條件下在封閉管路系統(tǒng)中在蓄養(yǎng)下維持的來 自蘇門答臘(A)和加里曼丹(B)的大棘多彩沙鰍的處于卵黃發(fā)生過程中(階段3)和處于 卵黃發(fā)生終末期(階段4)的雌魚的百分比的變化。圖2顯示了 根據(jù)水溫，在封閉管路系統(tǒng)中在蓄養(yǎng)下維持的來自蘇門答臘(A)和加 里曼丹(B)的大棘多彩沙鰍的處于性成熟過程中(階段1)和成為雄性(階段2和幻的雄 魚的百分比的變化。圖3顯示了 2條隔離在2516 °C下的大棘多彩沙鰍雌魚和另外2條隔離在 30-31°C下的大棘多彩沙鰍雌魚的卵母細(xì)胞的眾數(shù)直徑(dian^tremodal)的平均值變化。 在同一池中在處于30-31°C的再循環(huán)水中進行飼養(yǎng)后，將所述四條雌魚隔離在受溫度調(diào)節(jié) 而處于所選溫度下的同樣的槽O50L)中。圖4顯示了 根據(jù)卵母細(xì)胞的初始眾數(shù)直徑而變化的在根據(jù)本發(fā)明的激素處理后 獲得的排卵百分比。所述結(jié)果是兩種類型的激素處理的總體結(jié)果。圖5顯示了 激素處理后的潛伏時間和用于圈養(yǎng)大棘多彩沙鰍親魚的水的溫度之 間的關(guān)系。A 用Ovapr im 的兩次連續(xù)注射進行處理的雌魚；B 用注射hCG并隨后注射 Ovaprim 進行處理的雌魚(淺色圓形來源于蘇門答臘的雌魚；暗色圓形來源于加里 曼丹的雌魚；三角形蘇門答臘的雌魚，對于其來說在第一次注射Ovaprim 后開始了卵 母細(xì)胞的成熟過程)。圖6顯示了 在大棘多彩沙鰍中，卵的擾動對于卵的孵化質(zhì)量的影響。圖7顯示了 漏斗形的且由玻璃纖維制成的孵化器的模型。圖8顯示了 在大棘多彩沙鰍中，孵化溫度對于孵出百分比(A)和能成活的仔魚的 比例⑶的影響。圖9顯示了從孵出至31日齡時大棘多彩沙鰍仔魚的發(fā)育。實施例1 親魚的飼養(yǎng)條件和性成熟1. 1.飼養(yǎng)條件為了能夠研究對于蓄養(yǎng)的大棘多彩沙鰍的性成熟有影響的參數(shù)，設(shè)計了適于對該 物種進行維持的處于封閉管路系統(tǒng)中的飼養(yǎng)設(shè)施，并且在D印ok研究站(印度尼西亞)進行了實施。將來自蘇門答臘的大棘多彩沙鰍的親魚(N = 66 ；70%的雌魚)和來自加里曼 丹的一組(N = 59 ；75%的雌魚)以6至7條魚/m3的密度進行飼養(yǎng)。借助于機械濾器、生物濾器和UV燈(滅菌)向每個飼養(yǎng)槽(IOm3)供給再循環(huán)水 (流量=8. 2m3. IT1)。為了減少應(yīng)激，將魚隔離在陰暗的房間中。該隔熱的房間還使得能夠 在全年中將溫度調(diào)節(jié)到25°C至32°C的所選水平。向每個封閉管路系統(tǒng)供給鉆井水。由于氣 體過飽和，該水應(yīng)當(dāng)在用于飼養(yǎng)前預(yù)先曝氣M小時。在14個月期間月水溫值在30和32°C 之間波動，然后在6個月期間將溫度調(diào)節(jié)到沈至27°C。每周6天對魚進行飼喂；早晨，按照生物量的0. 5至配給顆?；娜斯わ暳?， 而晚上，根據(jù)需要用蚯蚓進行配給(供應(yīng)魚生物量的> 10% )。將飼養(yǎng)池每周虹吸2次， 其中每周供應(yīng)10%的新鮮水。1. 2.結(jié)果結(jié)果在
圖1至3中進行了闡明。在飼養(yǎng)20個月后，飼養(yǎng)設(shè)施中水的主要物理化學(xué)參數(shù)仍然在對于大棘多彩沙鰍 親魚來說有毒性的標(biāo)準(zhǔn)之下；PH在7. 1和7. 7之間，電導(dǎo)率在114和294 μ S/cm之間變動， 和所測定的氧濃度顯示很少的變化(6. 7-8. Img. Γ1)。非離子化氨的含量為0. 0至0. Img. ΙΛ而亞硝酸鹽的濃度在0. 00和0. 03mg. L-1之間變動，和硝酸鹽的濃度在6. 3和20. Omg. L"1之間變動。所采用的飼喂做法非常良好地適于該物種的需要，因為雌魚身體豐滿并且處于完 全的性成熟狀態(tài)(根據(jù)實施例2中所描述的操作方式進行的評價)。在這些飼養(yǎng)條件下，獲 得了高達90%的處于成熟過程中的雌魚，其中具有40-47%的準(zhǔn)備繁殖的雌魚。在這些飼 養(yǎng)中未觀察到任何病理學(xué)狀態(tài)，并且存活保持在85%以上。主動降低飼養(yǎng)水的溫度使得能夠在2個月的低溫Q6-27°C )后獲得80-90%的處 于性成熟過程中的雌魚。在所引起的溫度降低后，準(zhǔn)備產(chǎn)卵的雌魚的比例對于來源于加里 曼丹的種群的魚來說從8%增加至50%，和對于來自蘇門答臘的種群的魚來說從9%增加 至 30% (圖 1)。在這些飼養(yǎng)條件下，獲得了 60至90%的性成熟的(即處于階段3的)雄魚(圖 2)。這些觀察是在四月和七月之間進行的，即在與自然繁殖期相反的季節(jié)，所述自然繁殖期 在蘇門答臘的河流中集中在九月至十二月。平行地，在同一池中在處于30-31°C的再循環(huán)水中進行飼養(yǎng)后，將四條處于相同性 階段的雌魚隔離在受溫度調(diào)節(jié)而處于301或^TC的所選溫度下的同樣的槽Q50L)中。在 觀察2個月后，放置在冷溫度下的雌魚的卵母細(xì)胞顯示出有規(guī)律的生長并且處于卵黃發(fā)生 終末期(具有進行繁殖的能力)，而放置在熱溫度下的雌魚的卵母細(xì)胞則完全退化(圖3)。實施例2 用于繁殖誘導(dǎo)處理的親魚的選擇標(biāo)準(zhǔn)2. 1.操作方式為了有助于個體存活，將每條親魚進行麻醉(在包含0. 3mL. 1^2-苯氧基-乙醇的 浴中)，然后用借助于套針插入到背部肌肉中的電子標(biāo)志(PIT標(biāo)簽)進行標(biāo)記。每45-60 天進行取樣，評價親魚的狀況(比率體重/長度3)及其性成熟。在每次取樣時，捕捉所有 的魚，獨個進行鑒別、測量和稱重，這是為了確定月增重和重新評價日需飼料量。通過借助于軟導(dǎo)管(外徑2mm)的卵巢內(nèi)活組織檢查來抽取五十個左右的卵母細(xì)胞，從而評價每條雌魚的性成熟階段。將卵母細(xì)胞放置在鹽水溶液(0. 9% NaCl)中，并立即 用雙筒放大鏡測量其較大的直徑，以便確定發(fā)育程度最高的那一組卵母細(xì)胞的眾數(shù) 直徑?？紤]下述四個主要的性成熟階段階段1 未成熟的雌魚(不可插套管的)；階段2 具有處于卵黃發(fā)生前的卵母細(xì)胞(眾數(shù)直徑< 0. 4mm)的卵巢；階段3 卵巢發(fā)育和卵母細(xì)胞強烈生長期，存在有眾多處于外源性卵黃發(fā)生期的 卵母細(xì)胞(0. 4mm <眾數(shù)直徑< 1. 02mm)；階段4 存在有占大多數(shù)的(70-90% )卵黃發(fā)生后的卵母細(xì)胞(眾數(shù)卵母細(xì)胞直 徑> 1.02mm)，其能夠在激素處理后進行排卵。根據(jù)下述的任意標(biāo)度，依照在進行魚的腹部按摩后排出的精液的存在和數(shù)量來確 定雄魚的性成熟階段階段0:沒有精液；階段1 排出低數(shù)量的精液，以持久的腹部按壓；階段2 存在有中等數(shù)量的精液，當(dāng)進行腹部按壓時容易地排出；階段3 大量的精液，以輕微的腹部按壓就流出。2.2.結(jié)果結(jié)果在圖4和表1中給出。在卵巢內(nèi)活組織檢查后，基于其豐滿狀況和眾數(shù)卵母細(xì)胞直徑> 1. 02mm(最小眾 數(shù)卵母細(xì)胞直徑，由此可以在激素處理后在大棘多彩沙鰍中成功誘導(dǎo)排卵)而選擇出用于 進行誘導(dǎo)增殖的雌魚(圖4)。雌魚的豐滿狀況(腹部的圓鼓外觀)是第二級標(biāo)準(zhǔn)，其使得 能夠讓用于繁殖的雌魚的選擇更精細(xì)。這根據(jù)3個水平的主觀標(biāo)度來進行評價0-雌魚不 是特別豐滿，I"明顯圓鼓的腹部，2-非常圓鼓的腹部。實際上，具有圓鼓腹部的雌魚導(dǎo)致獲 得比不呈現(xiàn)出明顯豐滿的雌魚顯著更高的卵子數(shù)量(p<0. 05)，并且排卵率也趨于更高(ρ > 0. 05)。相反地，通過授精率來評價的卵子質(zhì)量(品質(zhì))在兩組雌魚之間沒有顯示出明顯 的差異(表1)。表1 根據(jù)其初始豐滿狀況，在大棘多彩沙鰍雌魚中在激素處理(以hCG的預(yù)備注 射)后排卵應(yīng)答以及所采集的卵子的數(shù)量(生殖力)和質(zhì)量(授精)的比較(平均值士 sd)
權(quán)利要求
1.在處于封閉管路系統(tǒng)中的飼養(yǎng)設(shè)施之中大量生產(chǎn)鯉形目，尤其是鰍科的魚的方法， 所述方法包括下列步驟a)在供給以水的飼養(yǎng)槽中，以5至15條魚/m3，有利地6至7條魚/m3的密度，在微光 下飼養(yǎng)雄性和雌性親魚，所述水的溫度在6至15個月的時間段期間，有利地在14個月期間 維持在30至32°C，隨后，將其溫度降至25-29 °C，有利地25-26 °C，并且在1至6個月，有利 地3個月的時間段期間維持在該值，其中在整個飼養(yǎng)時段期間以下述方式飼喂親魚早晨 用按照魚生物量的0. 5至配給的復(fù)合飼料進行飼喂，和晚上用占魚生物量的至少10%， 有利地占所述生物量的5至15%的蚯蚓進行飼喂，b)選擇出卵母細(xì)胞直徑為1.00至1. 32mm的雌性親魚，c)選擇出通過腹部按摩其體內(nèi)精液容易地流出的雄性親魚(性成熟的階段3)，d)對雌性親魚進行激素處理， 要么通過兩次注射純化的或以合成類似物形式的促性腺激素釋放激素與抗多巴胺 能化合物的組合，所述注射以5至8小時，有利地等于6小時的間隔時間而分隔開，第一次 注射的劑量對于促性腺激素釋放激素及其合成類似物而言為2至10μ g/kg，有利地等于 8 μ g/kg，和對于抗多巴能化合物而言為1至5mg，有利地等于％ig，并且第二次注射的劑量 對于純化的或以合成類似物形式的促性腺激素釋放激素而言為8至12μ g/kg，有利地等于 12 μ g/kg,和對于抗多巴能化合物而言為4至6mg，有利地等于6mg， 要么通過第一次按照250至500IU/kg，有利地按照500IU/kg注射人絨毛膜促性腺激 素(hCG)，隨后在18小時至沈小時后第二次注射純化的或以合成類似物形式的促性腺激素 釋放激素與抗多巴胺能化合物的組合，以對于純化的或以合成類似物形式的促性腺激素而 言4至12 μ g/kg,有利地12 μ g/kg的劑量，和以對于抗多巴能化合物而言2至6mg/kg，有 利地等于6mg/kg的劑量，e)對雄性親魚進行激素處理，通過注射純化的或以合成類似物形式的促性腺激素釋放 激素與抗多巴胺能化合物的組合，以對于純化的或以合成類似物形式的促性腺激素而言2 至10 μ g/kg,有利地等于8 μ g/kg的劑量，和以對于抗多巴能化合物而言1至5mg/kg，有利 地等于％ig/kg的劑量，f)在雌性親魚中通過腹部按摩來采集卵子，這以平均潛伏間隔時間(注射和卵子的采 集之間的間隔時間)來進行，所述平均潛伏間隔時間根據(jù)下述關(guān)系依照用于維持親魚的水 的溫度( 至31°C，但有利地沈至)和所采用的激素處理而變化-對于以兩次連續(xù)注射與抗多巴胺能化合物相聯(lián)合的促性腺激素釋放激素來進行處理Y(潛伏時間，以小時表示)=413. 97-29. 47X+0. 54X2(R2 = 0. 670)，其中X =以攝氏度 表示的溫度，-對于以注射hCG并隨后注射與抗多巴胺能化合物相聯(lián)合的促性腺激素釋放激素來進 行處理Y(潛伏時間，以小時表示)=771.51-54. 08X+0. 96X2 ； (R2 = 0. 652)，其中X =以攝氏度表示的溫度，g)在激素處理后10至48小時，有利地12至M小時，將雄性親魚的精液直接采集在精 子活動抑制溶液中，有利地在鹽水溶液(0.9%NaCl)中，并且保存于陰涼處，有利地在4°C下，h)對卵進行體外授精，i)將卵在M至的溫度下，有利地在下，在輕微擾動下進行孵化，直至孵出，j)收集仔魚，k)飼養(yǎng)仔魚直至幼魚階段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述魚為大棘多彩沙鰍，其尤其來自蘇門答臘 和婆羅洲(加里曼丹)的種群。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項的方法，其特征在于，所述促性腺激素釋放激素的合成 類似物選自GnRHa (有利地，D_Arg6，Trp7，Leu8，Pro9, Net)或LHRH-A，并且所述抗多巴能 化合物選自多潘立酮和匹莫齊特。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項的方法，其特征在于，所使用的水為再循環(huán)水，其以每 小時更新占飼養(yǎng)體積的80%至100%的水的流量進行循環(huán)流動。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項的方法，其特征在于，所使用的水具有7.0至8. 0的 pH，100至300 μ S/cm的電導(dǎo)率，并且氧濃度為6. 0至8. Omg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項的方法，其特征在于，步驟i)的卵的孵化在適度擾動 的條件下來進行，所述適度擾動的條件以下述方式來獲得要么通過在水流中卵的擾動，有 利地在漏斗形的孵化器中，所述漏斗形的孵化器在漏斗的狹窄部分處包含底部進水口，所 述進水口具有20至30mm的直徑以允許0. 3L. mrT1至2. 3L. mrT1的進口水流量；要么在不更 新的水的容器中，所述容器放置在以56至88次擺動/分鐘在總幅度為10度(+5，-5)的角 度左右進行搖擺的托架上。
全文摘要
從在封閉管路系統(tǒng)中飼養(yǎng)的親魚開始大量生產(chǎn)鯉形目(Cypriniformes)，尤其是鰍科(Cobitidae)的魚的方法。
文檔編號A01K67/02GK102046005SQ200880129567
公開日2011年5月4日 申請日期2008年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日
發(fā)明者D·塞特亞尼, J·斯萊姆布魯克, K·蘇加馬, L·普約, M·勒讓德爾 申請人:發(fā)育研究院