專利名稱：細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種灌木類經(jīng)濟(jì)植物的組織培養(yǎng)，特別是涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓
的方法，屬于生物工程和灌木類經(jīng)濟(jì)植物的快速繁育技術(shù)。
背景技術(shù)：
樹莓是一種薔薇科懸鉤子屬多年生落葉小灌木，果實(shí)富含氨基丁酸、維生素、水楊 酸、抗氧化物歧化酶鞣酸等防病抗癌藥素，具有降血脂、解熱鎮(zhèn)痛、養(yǎng)筋活血等功效，具有很 高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，我國(guó)已有樹莓栽培面積約3000hm2，據(jù)預(yù)測(cè)，我國(guó)樹莓的發(fā)展空間約為 50000hm2。由于現(xiàn)有繁育苗木方式落后，苗木供不應(yīng)求已經(jīng)成為目前發(fā)展樹莓生產(chǎn)的主要 限制因素。我國(guó)生態(tài)環(huán)境問題日益突出，荒漠化面積很大(如科爾沁沙地等)。樹莓對(duì)干旱 和貧瘠的耐受性強(qiáng)，適應(yīng)性廣。在科爾沁沙地大力發(fā)展樹莓不但對(duì)我國(guó)生態(tài)保護(hù)和恢復(fù)具 有著重要意義，還能擴(kuò)大當(dāng)?shù)氐木蜆I(yè)，促進(jìn)人們?cè)鍪罩赂?。擴(kuò)繁推廣樹莓既具有較高的經(jīng)濟(jì) 效益，又有重大的社會(huì)和生態(tài)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，給出一種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓 的方法，這種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓的方法針對(duì)樹莓繁育苗木方式落后、苗木供不應(yīng)求這一現(xiàn) 實(shí)狀況，采用組培技術(shù)建設(shè)大規(guī)模樹莓苗木基地快速繁育樹莓，加快我國(guó)的荒漠化治理與 生態(tài)恢復(fù)，促進(jìn)地區(qū)經(jīng)濟(jì)建設(shè)發(fā)展。
本發(fā)明給出的技術(shù)解決方案是這種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓的方法，其特點(diǎn)是
選用樹莓幼嫩莖段、莖尖作外植體(以春季為佳)，剪去葉片沖洗，然后在無菌室 用酒精消毒，再用氯化汞溶液浸泡，用無菌水沖洗，剪成帶腋芽莖段，接種到滅過菌的誘導(dǎo) 培養(yǎng)基上，然后在26± 1°C ，光照強(qiáng)度19001x，光照時(shí)間12h/d條件下培養(yǎng)，8 12天后即可 長(zhǎng)出側(cè)芽，當(dāng)側(cè)芽長(zhǎng)至2 3cm時(shí)，可進(jìn)行繼代培養(yǎng)。 將側(cè)芽切成小塊，接種在試管中的培養(yǎng)基上，在溫度26士rC下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度 20001x，光照時(shí)間12h/d。 22 28天后長(zhǎng)出4 7片嫩葉； 將經(jīng)過幾次繼代培養(yǎng)之后的芽苗從試管中取出，接種在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上進(jìn)行 生根培養(yǎng)(繼代次數(shù)越多越易生根)，生根培養(yǎng)溫度為26± rc ，暗培養(yǎng)+光照培養(yǎng)，光照時(shí) 間14h/d，光照強(qiáng)度18001x， 15 20天后，芽體基部就長(zhǎng)出4 6條不定根，敞開培養(yǎng)瓶，在 培養(yǎng)室內(nèi)鍛煉4 6天后，即可移栽到苗床上； 在網(wǎng)室(或大棚)中準(zhǔn)備鋪好基質(zhì)的苗床。將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，放在溫水 (18 22°C)中，將附著在根上的培養(yǎng)基清洗掉(不得傷苗)，再用溫水清洗，將培養(yǎng)基徹底 洗掉，最后將試管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床； 移栽初期，適當(dāng)遮蔭保濕(濕度在85 95% );在苗床上培養(yǎng)22 28天后即可 轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，28 32天后，即可移入大田。 注在移栽入苗床前的所有接種操作均在超凈工作臺(tái)上完成。
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與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為樹莓生長(zhǎng)期短，經(jīng)濟(jì)效益高；易于管理， 病害較少；栽培當(dāng)年即可坐果，第二年即有經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量，3 4年就進(jìn)入盛果期，經(jīng)濟(jì)壽命可達(dá) 15 25年，畝產(chǎn)可達(dá)1000kg，最低市價(jià)5元/kg，即直接經(jīng)濟(jì)效益5000元/畝/年。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體技術(shù)方案做進(jìn)一步說明 選用樹莓幼嫩莖段、莖尖作外植體(以春季為佳)，剪去葉片，放入洗衣粉水(濃 度約5% )浸泡5min后，在自來水下沖洗30 60min (水流不宜過大)，然后在無菌室先 用70 75%酒精消毒10s，再用0. 1%的氯化汞溶液浸泡7 10min，用無菌水沖洗4 5 次，剪成0. 5 1. 5cm的帶腋芽莖段，接種到滅過菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS改^+6-BA 2mg/L+NAA 0.45mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L)上，然后在26± 1°C，光照強(qiáng)度19001x，光照時(shí)間12h/d 條件下培養(yǎng)。約10天后即可長(zhǎng)出側(cè)芽，當(dāng)側(cè)芽長(zhǎng)至2 3cm時(shí)，可進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
將側(cè)芽切成約lmm的小塊，接種在試管中的培養(yǎng)基(2MS s ft +6-BA 2mg/ L+NAAO. 5mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L)上，在溫度26± 1。C下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度20001x，光照 時(shí)間12h/d。約25天后，可長(zhǎng)出4 7片嫩葉。 將經(jīng)過幾次繼代培養(yǎng)之后的芽苗從試管中取出，接種在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基(MSSft +IBAO. 6mg/L+NAA0. 5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂7g/L)上進(jìn)行生根培養(yǎng)(繼代次數(shù)越多越易生 根)。生根培養(yǎng)溫度為26± 1°C ，起初暗培養(yǎng)4 5天，然后光照培養(yǎng)，光照時(shí)間14h/d，光照 強(qiáng)度18001x。 15 20天后，芽體基部就長(zhǎng)出4 6條不定根。敞開培養(yǎng)瓶，在培養(yǎng)室內(nèi)鍛 煉4 6天后，即可移栽到苗床上。 在網(wǎng)室(或大棚)中準(zhǔn)備鋪好基質(zhì)的苗床。將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，放在溫水 (約20°C )中，將附著在根上的培養(yǎng)基清洗掉(不得傷苗)，再用約2(TC的溫水清洗，將培 養(yǎng)基徹底洗掉。最后將試管苗蘸60mg/L的IBA溶液后移栽入苗床。 移栽初期，適當(dāng)遮蔭保濕(濕在90%左右)；在苗床上培養(yǎng)約25天后即可轉(zhuǎn)入營(yíng) 養(yǎng)缽內(nèi)，約30天后，即可移入大田。 注在移栽入苗床前的所有接種操作均在超凈工作臺(tái)上完成。
本發(fā)明所用的培養(yǎng)基(質(zhì))的配制為
—、對(duì)MS培養(yǎng)基的改良(即MS改良)
1、大量元素(母液I): NH萬，16500 ;KN03，7600 ;CaCl2 *2跳2200 ;MgS04 *7跳3700 ;KH2P04， 1700。(單 位mg/U 2、微量元素(母液II):KI ， 85 ;H3B03， 620 ;MnS04 4H20， 2230 ;ZnS04 7H20， 860 ;Na2Mo04 2H20， 25 ; CuS04 5H20， 3 ;CoCl2 6H20， 2。(單位:mg/L)
3、鐵鹽(母液III):FeS04 7H20， 280 ;Na2_EDTA 2H20， 3730。(單位:mg/L)
4、有機(jī)成分(母液IV): 肌醇15000 ;煙酸，IOO ;維生素Be，lOO ;維生素B"IOO ;維生素C，IOO ;甘氨酸，400。
(單位:mg/L)
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以上四種母液均需要單獨(dú)配制，母液I(大量元素)為20倍濃縮液，母液n、ni、
IV均為200倍濃縮液。 二、培養(yǎng)基配制的操作程序 1、加瓊脂和無離子水至定容量的70%左右，加熱使瓊脂溶解； 2、瓊脂溶解后，加入培養(yǎng)基母液(四種)、激素、蔗糖等，稍加熱使糖溶解； 3、蔗糖溶解后，加無離子水定容；充分?jǐn)噭?dòng)，搖勻； 4、用lmol/L NaOH溶液調(diào)pH值至6. 3 (邊攪拌邊滴加NaOH溶液)； 5、將培養(yǎng)基分裝入培養(yǎng)瓶后滅菌。 三、移栽基質(zhì)河沙腐殖土 珍珠巖=3:3: 2(干重之比)。
權(quán)利要求
一種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓的方法，其特征在于選用樹莓幼嫩莖段、莖尖作外植體，剪去葉片沖洗，在無菌室用酒精消毒，再用氯化汞溶液浸泡，用無菌水沖洗，剪成帶腋芽莖段，接種到滅過菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，然后在26±1℃，光照強(qiáng)度1900lx，光照時(shí)間12h/d條件下培養(yǎng)，8～12天后長(zhǎng)出側(cè)芽，當(dāng)側(cè)芽長(zhǎng)至2～3cm時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)；將側(cè)芽切成小塊，接種在試管中的培養(yǎng)基上，在溫度26±1℃下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lx，光照時(shí)間12h/d。22～28天后長(zhǎng)出4～7片嫩葉；將經(jīng)過幾次繼代培養(yǎng)之后的芽苗從試管中取出，接種在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)溫度為26±1℃，暗培養(yǎng)+光照培養(yǎng)，光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度1800lx，15～20天后芽體基部長(zhǎng)出4～6條不定根，敞開培養(yǎng)瓶，在培養(yǎng)室內(nèi)鍛煉4～6天后移栽到苗床上；在網(wǎng)室或大棚中準(zhǔn)備鋪好基質(zhì)的苗床。將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，放在溫水(18～22℃)中，將附著在根上的培養(yǎng)基清洗掉，再用溫水將培養(yǎng)基徹底洗掉，最后將試管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床；移栽初期，遮蔭保濕(濕度在85～95％)；在苗床上培養(yǎng)22～28天后轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，28～32天后移入大田。
全文摘要
一種細(xì)胞培養(yǎng)繁殖樹莓的方法，其特點(diǎn)是選用樹莓幼嫩莖段、莖尖作外植體，消毒后剪成帶腋芽莖段，接種到滅過菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)長(zhǎng)出側(cè)芽，并進(jìn)行繼代培養(yǎng)；將側(cè)芽切成小塊。接種在試管中的培養(yǎng)基上培養(yǎng)直至長(zhǎng)出嫩葉；將芽苗從試管中取出，接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，直至芽體基部長(zhǎng)出不定根，敞開培養(yǎng)瓶鍛煉后即移栽到苗床上；準(zhǔn)備好基質(zhì)的苗床，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，放在溫水中將培養(yǎng)基洗掉，最后將試管苗蘸IBA溶液后移栽入苗床；移栽初期遮蔭保濕，在苗床上培養(yǎng)天后即可轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，直至移入大田。本發(fā)明利用組培技術(shù)快速繁育樹莓苗木，加快我國(guó)的荒漠化治理與生態(tài)恢復(fù)，促進(jìn)地區(qū)經(jīng)濟(jì)建設(shè)發(fā)展。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101766120SQ20081024690
公開日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者馮連春, 孫維厚, 楊家鶴, 韓德昌, 高興安 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)科奧可再生能源研究所