專利名稱：：Stat3的小分子抑制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。尤其是，本發(fā)明涉及作為Stat3抑制劑的小分子。本發(fā)明還涉及這些化合物在誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，和增加細(xì)胞對(duì)抗癌藥引起的細(xì)胞死亡的敏感性中的用途。相關(guān)纟支術(shù)侵襲性癌細(xì)胞表型是各種遺傳和后天改變的結(jié)果，這會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑的反常(Ponder,336(2001))。然而，所有癌細(xì)胞的共同點(diǎn)是它們不能執(zhí)行凋亡程序，由于正常凋亡機(jī)制缺陷而導(dǎo)致的缺乏適當(dāng)?shù)牡蛲龀绦蚴前┌Y的標(biāo)志(Lowe等，(^rc/刀0ge/7eWs27:485(2000))。目前癌癥的大部分治療，包括化療劑、放射和免疫治療，都是通過間接誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡而起作用的。因此，由于正常凋亡機(jī)制缺陷而導(dǎo)致的癌細(xì)胞不能執(zhí)行凋亡程序通常與對(duì)化療、放射或免疫治療引起的凋亡的抵抗增加有關(guān)。由于凋亡缺陷而導(dǎo)致的不同來源的人類癌癥對(duì)目前治療方案的主要抵抗或獲得性5抵抗是目前癌癥治療的主要問題(Lowe等，Carc2'/70ge/7eWs485(2000);Nicholson,N"wreW7:810(2000))。因此，目前和將來對(duì)設(shè)計(jì)和開發(fā)新的分子靶向的特異性抗腫瘤療法以改善癌癥患者的生存和生活質(zhì)量所作的努力必須包括對(duì)抵抗凋亡的癌細(xì)胞有特異性靶向作用的策略。因此，以在直接抑制癌細(xì)胞凋亡中起主要作用的關(guān)鍵負(fù)調(diào)節(jié)子為作用靶點(diǎn)代表了設(shè)計(jì)新抗癌藥物的很有希望的治療策略。信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(STATs)響應(yīng)細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子而被激活(Darnell等，5We腳2":1415(1994))。JAKs、Src和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是Stat3的上游調(diào)節(jié)子(Bromberg等，Ce//.萬7'o7.^:2553(1998);Sartor等，Ca/cer57:978(1997);Garcia等，^coge/e2ft2499(2001))。Stat3蛋白的主要結(jié)構(gòu)域包括N-端的四聚體和亮氨酸拉鏈，DNA結(jié)合域，和羧基端的SH2激活區(qū)。SH2區(qū)負(fù)責(zé)Stat3與酪氨酸-磷?；荏w的結(jié)合和對(duì)DNA結(jié)合和基因表達(dá)很必要的二聚作用(Zhong等，5""'e"ce2":95(1994))。Stat3被Y-705的磷酸化所激活，這導(dǎo)致二聚體形成，核易位，Stat3特異的DNA結(jié)合元素的識(shí)別，和靶基因轉(zhuǎn)錄的激活(Darnell等，Sc/e/ceiW:1415(1994);Zhong等，5We脇2":95(1994))。在乳腺癌細(xì)胞系中經(jīng)常檢測(cè)到Stat3的構(gòu)成激活，而在正常乳腺上皮細(xì)胞中則檢測(cè)不到(Garcia等，"y/Ter.《1267(1997);Bowman等，。/7coge"e":2474(2000))。已經(jīng)報(bào)道了大約有60°/。的乳腺腫瘤含有持續(xù)激活的Stat3(Dechow等，尸roc.^〃.Jcat/.Sci.yW7^:10602(2004))。Stat3已經(jīng)被分類為原癌基因，這是因?yàn)镾tat3可以在培養(yǎng)細(xì)胞中介導(dǎo)致癌性轉(zhuǎn)化和在棵鼠中介導(dǎo)腫瘤形成(Bromberg等，6W"《295(1999))。Stat3可能通過刺激細(xì)胞增殖、促進(jìn)血管發(fā)生、和對(duì)由常規(guī)治療引起的凋亡產(chǎn)生耐藥性而參與腫瘤生成(Catlett-Falcone等，0/^'".。/co厶77:1(1999);Catlett-Falcone等，i/M7"/7〃/105(1999);Alas等，Ca/2cer義316(2003);Wei等，^coge/ze":1517(2003))。Stat3通過它來促進(jìn)腫瘤生成的可能存在的下游靶包括上調(diào)抗凋亡因子(Bcl-2、存活素、Mcl-l和Bcl-Xj，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)子(cyclinDl、MEK5和c-myc)，和肺瘤血管發(fā)生誘導(dǎo)物(VEGF)(Bromberg等，夕《295(1999);Wei等，0腳,e":1517(2003);Real等，。/7coge/ei7:7611(2002);Puthier等，fur,/.//m7"/70人3945(1999);Niu等，6^coge/e27:2000(2002);Kiuchi等，/.fz/.7》義63(1999);Song等，。力cogei7e(2004))。激活的Stat3信號(hào)直接促成癌癥的惡性進(jìn)展。Stat3致癌功能通過前存活蛋白(pro-survivalproteins)如存活素、Mc卜l、Bcl-2和Bc1-Xl而起作用，并導(dǎo)致阻礙凋亡(Real等，toc^e/e^7:7611(2002);Aoki等，5/oM嵌1535(2003);Epling-Burnette等，/.C"/.707:351(2001);Nielsen等,":735(1999))。阻斷Stat3信號(hào)抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，這證明了Stat3對(duì)于腫瘤細(xì)胞的存活或生長(zhǎng)是至關(guān)重要的(Alas等，""cer義316(2003);Aoki等，W。。d遜1535(2003);Epling-Burnette等，/.Z第W.旭351(2001);Burke等，。膽，e2ft7925(2001);Mora等，7e義^:6659(2002);Ni等，Ca/2cer^:1225(2000);Rahaman等，。腳g認(rèn)i7:8404(2002))?！?007]由于Stat3經(jīng)常在乳腺癌中激活(Dechow等，戶roc.vVa〃.《c/.7〃/:10602(2004))，因此有可能通過抑制乳腺癌異常生長(zhǎng)，而將它作為癌癥治療的有吸引力的靶點(diǎn)?；陔牡腟tat3抑制劑，它模擬Stat3SH2區(qū)互補(bǔ)結(jié)合結(jié)構(gòu)，被報(bào)道在體外成功地阻斷了Stat3功能(Turkson等，/.A/oAC力e瓜i76:45443(2001))。也已經(jīng)嘗試去抑制Stat3上游調(diào)節(jié)子，如Janus激酶，尤其是JAK2(Blaskovich等，Ca/7cerWei1.<5J:1270(2003)。已經(jīng)/>開了Stat3同型二聚體的高分辨率X-射線三維結(jié)構(gòu)(Becker等，^&re"《145(1998))。根據(jù)Stat3的X-射線結(jié)構(gòu)，需要開發(fā)具有高細(xì)胞滲透性和穩(wěn)定性，且直接阻斷Stat3活性的Stat3小分子抑制劑。發(fā)明概述公認(rèn)的是，癌細(xì)胞或其支持細(xì)胞失去由于基因損傷或者暴7露于凋亡誘導(dǎo)劑(如抗癌劑和輻射)而經(jīng)歷凋亡的能力是癌癥發(fā)生和進(jìn)展的主要原因。認(rèn)為在癌細(xì)胞或其支持細(xì)胞(如腫瘤脈管系統(tǒng)中的新生血管細(xì)胞)中誘發(fā)凋亡是目前市場(chǎng)上銷售的或處于實(shí)驗(yàn)過程中的實(shí)際上所有有效癌癥治療藥或放射療法的普遍作用機(jī)制。細(xì)胞不能經(jīng)歷凋亡的一個(gè)原因是Stat3的活性增加，這至少要部分歸因于Stat3上調(diào)了抗凋亡因子和/或改變了細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的能力。本發(fā)明打算將患有癌癥的動(dòng)物暴露于治療有效量的藥物(例如小分子)，該藥物通過抑制Stat3和異源結(jié)合配體之間的相互作用和/或從SH2激活區(qū)抑制Stat3的同二聚體形成來降低Stat3功能，這種暴露將徹底抑制癌細(xì)胞或支持細(xì)胞生長(zhǎng)和/或使該細(xì)胞群對(duì)癌癥治療藥或放射療法誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的活性更加敏感。本發(fā)明預(yù)期Stat3抑制劑可滿足對(duì)于多種癌癥的治療所未能滿足的需求，不論是作為單一療法施用誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡和/或細(xì)胞周期停滯，還是在與其它誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的癌癥治療藥或放射療法的臨時(shí)關(guān)系中進(jìn)行給藥(聯(lián)合療法)，以使更大比例的癌細(xì)胞或支持細(xì)胞對(duì)執(zhí)行凋亡程序敏感，相對(duì)于只用癌癥治療藥物或單獨(dú)用》丈射療法治療的動(dòng)物中相應(yīng)比例的細(xì)胞而言。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，用治療有效量的本發(fā)明化合物和抗癌劑或放射療程聯(lián)合治療動(dòng)物會(huì)在這些動(dòng)物中產(chǎn)生更大的腫瘤響應(yīng)和臨床益處，相對(duì)于單獨(dú)用該化合物或抗癌劑/放射治療的那些動(dòng)物而言。另外，由于該化合物會(huì)降低所有細(xì)胞的凋亡闊值，因此響應(yīng)抗癌劑/放射線的凋亡誘導(dǎo)活性而成功地執(zhí)行凋亡程序的細(xì)胞比例將會(huì)加大。可選擇地，本發(fā)明化合物將用于更低劑量、從而更小毒性和更大耐受性的抗癌劑和/或放射線的給藥，以產(chǎn)生與常規(guī)劑量抗癌劑/放射線單獨(dú)給藥相同的腫瘤響應(yīng)/臨床益處。由于所有已批準(zhǔn)的抗癌劑和放射治療的劑量都是已知的，因此本發(fā)明關(guān)注于它們與本發(fā)明化合物的不同組合。另外，由于本發(fā)明化合物可至少部分通過抑制Stat3的抗凋亡活性和/或細(xì)胞周期改變活性而起作用，因此癌細(xì)胞和支持細(xì)胞暴露于治療有效量的該化合物將暫時(shí)與細(xì)胞響應(yīng)抗癌劑或放射療法而執(zhí)行凋亡程序同時(shí)進(jìn)行。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物與某些臨時(shí)關(guān)系聯(lián)合給藥提供了特別有效的治療實(shí)踐。本發(fā)明涉及對(duì)抑制Stat3活性和增加細(xì)胞對(duì)凋亡和/或細(xì)胞周期停滯誘導(dǎo)劑敏感性有用的化合物。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，化合物是STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，Stat3活性抑制劑選自化合物1(STA-21),以及表示為化合物2和3的類似物組成的組。本發(fā)明涉及用STA-21表示的化合物或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽,它是Stat3活性抑制劑。本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物在抑制具有增加的Stat3活性的細(xì)胞生長(zhǎng)中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步涉及本發(fā)明化合物在具有增加的Stat3活性的細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和/或凋亡的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物在增加細(xì)胞對(duì)凋亡和/或細(xì)胞周期停滯誘導(dǎo)劑的敏感性中的應(yīng)用。該化合物對(duì)治療、改善或預(yù)防與Stat3活性增加有關(guān)的疾病是有用的。該化合物還用于治療、改善或預(yù)防響應(yīng)誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞死亡的疾病，例如以凋亡失調(diào)為特征的疾病，包括過度增殖性疾病，如癌癥和銀屑病。在某些實(shí)施方案中，該化合物可以用于治療、改善或預(yù)防以抵抗癌癥治療為特征的癌癥(例如化學(xué)抵抗、放射抵抗、激素抵抗等的那些癌癥)。在其它實(shí)施方案中，該化合物可以用于治療過度增殖性疾病和以Stat3活性增加為特征的其它病癥。本發(fā)明提供了含有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或使細(xì)胞對(duì)凋亡誘導(dǎo)劑敏感的治療有效量的STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽的藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了含有STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽以及對(duì)動(dòng)物施用該化合物的說明書的藥盒。該藥盒可任選含有其它治療劑，如抗癌劑、凋亡調(diào)節(jié)劑。繪圖/附圖的簡(jiǎn)要說明本發(fā)明或申請(qǐng)文件含有至少一張用顏色繪制的附圖。該帶彩色附圖的專利或?qū)＠暾?qǐng)公開文本的副本將通過提出請(qǐng)求和支付必要的費(fèi)用由專利局提供。圖1A-1D顯示了基于結(jié)構(gòu)的虛擬數(shù)據(jù)篩選的模型示意圖。(A)STAT3p蛋白的SH2區(qū)二聚體形成界面。結(jié)構(gòu)基于PDBentry1BG1。這兩個(gè)SH2區(qū)顏色不同。圓形區(qū)域表示用于虛擬篩選研究的靶PTR結(jié)合位點(diǎn)。(B)STA-21對(duì)STAT3PSH2區(qū)的預(yù)期結(jié)合才莫型。STA-21用球棍模型表示。STAT3PSH2區(qū)的分子表面用靜電勢(shì)著色紅色表示正電荷最多的區(qū)域，藍(lán)色表示負(fù)電荷最多的區(qū)域。(C)STAT3PSH2區(qū)和STA-21之間形成的特殊氫鍵。用DOCK程序預(yù)期結(jié)合模型。只有與STA-21形成氫鍵的殘基顯示在明顯的原子模型中。(D)STA-21結(jié)構(gòu)。所有圖片都是用Sybyl程序產(chǎn)生的。〖0018]圖2A-2B顯示了STA-21對(duì)癌細(xì)胞中Stat3依賴性螢光素酶活性的抑制。(A)將被pLucTKS3SUt3-依賴性螢光素酶受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Caov-3癌細(xì)胞的克隆用于啟動(dòng)Sat3小分子抑制劑篩選。用20STA-21以及其它小分子化合物處理克隆細(xì)胞48h，然后采集細(xì)胞進(jìn)行螢光素酶活性分析。(B)用20pMSTA-21處理被pLucTKS3SUt3-lo依賴性螢光素酶受體或SV40安光素酶受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-MB-435s細(xì)胞的克隆48h。根據(jù)制造商的說明，用Promega螢光素酶試劑盒檢測(cè)螢光素酶活性。結(jié)果基于三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。圖3A-3B顯示了STA-21對(duì)Stat3DNA結(jié)合活性和Stat3-調(diào)節(jié)的抗凋亡因子的抑制。(A)在室溫下用30pMSTA-21培養(yǎng)MDA-MB-435s細(xì)胞核提取物30min,然后用r-32P-ATP標(biāo)記的一致結(jié)合序列室溫培養(yǎng)20min。將反應(yīng)混合物在8%聚丙烯酰胺凝膠上分離開。(B)將來自經(jīng)標(biāo)示濃度STA-21處理了48h的MDA-MB-468細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物在10%SDS-PAGE上分離開，然后按照說明用抗體進(jìn)行免疫印跡?！?020]圖4A-4B顯示了STA-21抑制在組成上具有Stat3信號(hào)的乳腺癌細(xì)胞的存活，但不抑制在組成上不具有SUt3信號(hào)的乳腺癌細(xì)胞的存活。(A)不同細(xì)胞系中Y-705處的Stat3磷酸化。(B)按照說明的濃度用STA-21處理細(xì)胞系48h,然后采集細(xì)胞，并分析Sub-Gl曲線，該曲線在FACScan流式細(xì)月包儀(BectonDickinson,SanJose，CA)上可指示凋亡細(xì)胞。結(jié)果基于三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。圖5A-5H顯示STA-21抑制乳腺癌細(xì)胞Stat3易位和二聚體形成。(A)未轉(zhuǎn)染和未經(jīng)處理的MDA-MB-435s細(xì)胞。(B和E)用抗-flagIgG-羅丹明將被pCMV-Stat3-Flag和pCMV-Stat3-HA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞免疫染色。(B)未經(jīng)處理的細(xì)胞和(E)STA-21處理的細(xì)胞。(C和F)用抗-HAIgG-FITC將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞免疫染色。(C)未經(jīng)處理的細(xì)胞和(F)STA-21處理的細(xì)胞。(D和G)用抗-HAIgG-FITC和抗-flagIgG-羅丹明將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞共同免疫染色。(D)未經(jīng)處理的細(xì)胞顯示亮橙色。(G)STA-21處理的細(xì)胞顯示淡橙色和單獨(dú)的綠色和紅色。(H)MDA-MB-435s細(xì)胞被pCMV-Sta13-F1ag和pCMV-Sta13-HA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，并暴露于20pMSTA-2124h，然后用抗-HA或抗-Flag抗體使細(xì)胞溶胞產(chǎn)物免疫沉淀。在10%SDS-PAGE上將免疫沉淀物拆分，然后用抗-HA、抗-Flag或抗-Stat3抗體進(jìn)行免疫印跡。發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涉及作為Stat3活性抑制劑的STA-21或其衍生物、ii類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽。通過抑制Stat3,這些化合物抑制具有增加的Stat3活性的細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)。這些化合物也增加細(xì)胞對(duì)凋亡和/或細(xì)胞周期停滯誘導(dǎo)劑的敏感性，在一些情況下，它們本身也會(huì)引起凋亡和/或細(xì)胞周期停滯。因此，本發(fā)明涉及抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，增加細(xì)胞對(duì)凋亡和/或細(xì)胞周期停滯誘導(dǎo)劑敏感性的方法，和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和/或細(xì)胞周期停滯的方法，包括將細(xì)胞與STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽單獨(dú)接觸，或連同凋亡誘導(dǎo)劑一起接觸。本發(fā)明進(jìn)一步涉及治療、改善或預(yù)防動(dòng)物病癥的方法，該病癥與增加的Stat3活性有關(guān)或響應(yīng)誘導(dǎo)凋亡，包括給動(dòng)物施用STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽和任選的凋亡誘導(dǎo)劑。這些病癥包括以凋亡失調(diào)為特征的那些病癥，和以具有增加的Stat3活性的細(xì)胞增殖為特征的那些病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，Stat3活性抑制劑選自化合物1(STA-21)、2和3。oh212術(shù)語"抗癌劑"和"抗癌藥"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是用于過度增殖性疾病如癌癥(例如在哺乳動(dòng)物中)治療的任何治療劑(例如化療化合物和/或分子治療化合物)、反義療法、放射療法或手術(shù)干預(yù)。術(shù)語"前藥"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是母體"藥物"分子的藥理學(xué)無活性的衍生物，它在目標(biāo)生理學(xué)體系中需要進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化(例如自發(fā)的或酶的)，以釋放或?qū)⑶八庌D(zhuǎn)化(例如酶的、機(jī)械的、電磁的)成活性藥物。設(shè)計(jì)前藥以克服與穩(wěn)定性、毒性、缺乏特異性或有限的生物利用度有關(guān)的問題。示例性的前藥包括活性藥物分子本身和化學(xué)修飾基團(tuán)(例如可逆地隱藏藥物活性的基團(tuán))。一些優(yōu)選的前藥是在代謝條件下具有可裂解基團(tuán)的化合物的變體或衍生物。示例性的前藥在體內(nèi)或體外變得有藥學(xué)活性，當(dāng)它們?cè)谏項(xiàng)l件下進(jìn)行溶劑分解或進(jìn)行酶解或其它生化轉(zhuǎn)化(例如磷酸化、氫化、脫氫、糖基化)時(shí)。前藥經(jīng)常提供溶解度、組織相容性或哺乳動(dòng)物器官內(nèi)延遲釋放方面的優(yōu)點(diǎn)(參見例^(口Bundgard，DesignofProdrugs,7—9，21—24，Elsevier,Amsterdam(1985);和Silverman,TheOrganicChemistryofDrugDesignandDrugAction,pp.352—401,AcademicPress,SanDiego，CA(1992))。通常的前藥包括酸衍生物，如將母體酸與適當(dāng)?shù)拇?例如低級(jí)醇)反應(yīng)制得的酯，將母體酸化合物與胺反應(yīng)制得的酰胺，或與堿性基團(tuán)反應(yīng)形成?；膲A衍生物(例如低級(jí)酰胺)。術(shù)語"藥學(xué)可接受的鹽"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是在目標(biāo)動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物)中生理學(xué)耐受的本發(fā)明化合物的任何鹽(例如通過與酸或堿反應(yīng)而獲得的)。本發(fā)明化合物的鹽可衍生自無機(jī)或有機(jī)酸和堿。酸的實(shí)例包括但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、羥乙酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對(duì)甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、曱磺酸、乙磺酸、曱酸、苯曱酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸和苯磺酸等。其它酸，如草酸，雖然它們本身不是藥學(xué)可接受的，但也可用于制備作為中間體有用的鹽，以獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)可接受的酸加成鹽。堿的實(shí)例包括但不限于堿金屬(例如鈉)氬氧化物，堿土金屬(例如鎂)氫氧化物，銨，和式冊(cè)4+化合物，其中W是Cw烷基等。鹽的實(shí)例包括但不限于醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、重硫酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、flucoheptanoate、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、2-幾基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、palmoate、果膠脂酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氛酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽等。鹽的實(shí)例包括本發(fā)明化合物陰離子與適當(dāng)?shù)年栯x子如Na+、NH4+和鼎4+(其中W是C卜4烷基)等化合形成的鹽。為了治療有用，本發(fā)明化合物的鹽打算是藥學(xué)可接受的。然而，非藥學(xué)可接受的酸和堿的鹽也可找到用處，例如，在制備或純化藥學(xué)可接受的化合物中使用。術(shù)語"治療有效量"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是足以導(dǎo)致病癥的一個(gè)或多個(gè)癥狀改善、或防止病癥進(jìn)行、或引起病癥退化的治療劑的量。例如，關(guān)于癌癥的治療，治療有效量?jī)?yōu)選指的是降低腫瘤生長(zhǎng)速度、減少腫瘤塊、減少轉(zhuǎn)移的數(shù)量、增加進(jìn)行性腫瘤的時(shí)間、或延長(zhǎng)存活期至少5%、優(yōu)選至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60°/。、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%的治療劑的量。術(shù)語"使敏感(sensitize)，，和"增加敏感(sensitizing)"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是通過施用第一治療劑(例如式I化合物)，使動(dòng)物或動(dòng)物的細(xì)胞對(duì)第二治療劑的生物效應(yīng)(例如促進(jìn)或延遲細(xì)胞功能的某個(gè)方面，包括但不限于細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、侵入、血管發(fā)生或凋亡)更敏感或更易起反應(yīng)。第一治療劑對(duì)靶細(xì)胞的增敏效果可以通過施用第二治療劑連同或不連同施用第一治療劑所觀察到的預(yù)期生物效應(yīng)(例如促進(jìn)或延遲細(xì)胞功能的某個(gè)方面，包括但不限于細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、侵入、血管發(fā)生或凋亡)之間的區(qū)別來衡量。在缺乏第一治療劑響應(yīng)的情況下，增敏細(xì)胞的響應(yīng)可以增加至少10%、至少20°/。、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100°/。、至少150%、至少200°/。、至少250%、至少300%、至少350%、至少400%、至少450%或至少500%。術(shù)語"凋亡失調(diào)"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是細(xì)胞經(jīng)由凋亡而經(jīng)歷細(xì)胞死亡的能力(例如遺傳因素)的任何畸變。凋亡失調(diào)與多種病癥有關(guān)或由多種病癥引起，包括例如自身免疫性疾病(例如系統(tǒng)性紅斑《良癡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移才直物抗宿主疾病、重癥肌無力或Sj6gren's綜合征)，慢性炎癥性疾病(例如銀屑病、哮喘或克羅恩病)，過度增殖性疾病(例如腫瘤、B細(xì)胞淋巴瘤或T細(xì)胞淋巴瘤)，病毒感染(例如皰滲、乳頭狀瘤或HIV)，和其它病癥，如骨關(guān)節(jié)炎和動(dòng)脈粥樣硬化。應(yīng)當(dāng)注意的是，當(dāng)失調(diào)是由病毒感染引起或與病毒感染有關(guān)時(shí)，在失調(diào)發(fā)生時(shí)或觀察到失調(diào)時(shí)有可能檢測(cè)到病毒感染，也可能檢測(cè)不到。也就是說，即使在病毒感染的癥狀消失以后，病毒引起的失調(diào)也可以發(fā)生。術(shù)語"Stat3"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的Stat3的任何形式，包括但不限于Stat3cc和Stat3(3。術(shù)語"具有增加的Stat3活性的細(xì)胞"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是其中Sta13被組成性激活的細(xì)胞(例如磷酸化)，或與正常(即非患病的)細(xì)胞相比，其中Stat3被激活更長(zhǎng)時(shí)間或更大程度的細(xì)胞。術(shù)語"其衍生物或類似物"當(dāng)用于本文中與STA-21有關(guān)時(shí)，指的是抑制Stat3活性和以STA-21的總體結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的任何化合物。術(shù)語"過度增殖性疾病"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是其中動(dòng)物增殖細(xì)胞的某個(gè)局部群體不受正常生長(zhǎng)的通常限制支配的任何病癥。過度增殖性疾病的實(shí)例包括腫瘤、贅生物和淋巴瘤等，和非癌疾病，如自身免疫性疾病(例如銀屑病)。據(jù)說如果贅生物不侵入或轉(zhuǎn)移的話，它就是良性的，如果它發(fā)生侵入或轉(zhuǎn)移，就是惡性的。"轉(zhuǎn)移"15細(xì)胞的意思是細(xì)胞可以侵入和破壞相鄰的身體結(jié)構(gòu)。增生是細(xì)胞增殖的一種形式，包括組織或器官中細(xì)胞數(shù)量增多，而不顯著改變結(jié)構(gòu)或功能?；鞘芸丶?xì)胞生長(zhǎng)的一種形式，其中，一種類型的完全分化的細(xì)胞取代另一種類型的分化細(xì)胞。病或慢性炎癥性病癥。當(dāng)用于本文中時(shí)，術(shù)語"自身免疫性疾病"指的是其中器官產(chǎn)生可識(shí)別器官自身分子、細(xì)胞或組織的抗體或免疫細(xì)胞的任何病癥。自身免疫性疾病的非限制性實(shí)例包括自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、Berger，s病或IgA腎病、口炎性腹瀉、慢性疲乏綜合征、克羅恩病、皮肌炎、纖維肌痛、移植物抗宿主病、Grave's病、Hashimoto's甲狀腺炎、自發(fā)性血小板減少性紫癜、扁平苔蘚、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、銀屑病、風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、Sjiigren's綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、l型糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎和白癲風(fēng)等。術(shù)語"胂瘤性疾病"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是良性(非癌性)或惡性(癌性)細(xì)胞的任何異常生長(zhǎng)。術(shù)語"抗腫瘤劑"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是延遲目標(biāo)(例如惡性的)贅生物增殖、生長(zhǎng)或擴(kuò)散的任何化合物。術(shù)語"預(yù)防(prevent)"、"預(yù)防(preventing)"和"預(yù)防(prevention)"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是減少動(dòng)物病態(tài)細(xì)胞(例如過度增殖細(xì)胞或贅生細(xì)胞)出現(xiàn)。預(yù)防可以是完全的，例如使患者完全缺乏病態(tài)細(xì)胞。預(yù)防也可以是部分的，例如患者存在的病態(tài)細(xì)胞比未經(jīng)本發(fā)明處理存在的病態(tài)細(xì)胞少。術(shù)語"凋亡調(diào)節(jié)劑"當(dāng)用于本文中時(shí)，指的是參與調(diào)節(jié)(例如抑制、減少、增加、促進(jìn))凋亡的藥劑。凋亡調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括含死亡結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，例如但不限于，F(xiàn)as/CD95、TRAMP、TNFRI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。凋亡調(diào)節(jié)劑的其它實(shí)例包括但不限于TNFot、Fas配體、Fas/CD95和其它TNF家族受體的抗體、TRAIL、TRAILR1或TRAILR2的抗體、Bel-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。調(diào)節(jié)劑在廣義上包括TNF家族受體和TNF家族配體的激動(dòng)劑和拮抗劑。凋亡調(diào)節(jié)劑可為溶解的或膜結(jié)合的(例如配體或受體)。優(yōu)選的凋亡調(diào)節(jié)劑是凋亡誘導(dǎo)劑，如TNF或TNF-相關(guān)配體，尤其是TRAMP配體，F(xiàn)as/CD95配體，TNFR-1配體或TRAIL。本發(fā)明的Stat3活性抑制劑是STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽。某些本發(fā)明化合物可以立體異構(gòu)體形式存在，包括旋光異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有的立體異構(gòu)體，既包括這些立體異構(gòu)體的外消旋混合物，又包括單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員/〉知的方法分離?？捎帽绢I(lǐng)域公知的常規(guī)方法分離本發(fā)明化合物。本發(fā)明的一個(gè)重要方面是STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽可以通過引起細(xì)胞周期停滯和/或凋亡至少部分地抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，還可以響應(yīng)凋亡誘導(dǎo)信號(hào)加強(qiáng)引起細(xì)胞周期停滯和/或凋亡。因此，預(yù)期這些化合物可增加細(xì)胞對(duì)凋亡誘導(dǎo)劑的敏感性，包括對(duì)這些誘導(dǎo)劑有抵抗力的細(xì)胞。本發(fā)明的SUt3活性抑制劑可以用于在任何病癥中誘導(dǎo)凋亡，所述病癥是可以通過誘導(dǎo)凋亡而治療、改善或預(yù)防的病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抑制劑可以用于誘導(dǎo)具有增加的Stat3活性的細(xì)胞凋亡。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)狀況，該狀況與一種或多種凋亡調(diào)節(jié)劑相關(guān)。凋亡調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于，F(xiàn)as/CD95、TRAMP、TNFRI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFot、Fas配體、TRAIL、TRAILR1或TRAILR2抗體、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。參與凋亡的起始、決定和降解階段的其它試劑也包括在內(nèi)。凋亡調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括其活性、存在或濃度變化可以調(diào)節(jié)受試者凋亡的試劑。優(yōu)選的凋亡調(diào)節(jié)劑是凋亡誘導(dǎo)劑，如TNF或TNF-相關(guān)配體，尤其是TRAMP配體，F(xiàn)as/CD95配體，TNFR-1配體或TRAIL。17在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物和方法被用于治療動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物患者，包括但不限于人類和獸醫(yī)動(dòng)物)的患病細(xì)胞、組織、器官或病癥和/或疾病狀況。在這方面，各種疾病和病理學(xué)可用本發(fā)明方法和組合物治療或預(yù)防。這些疾病和病癥的非限制性實(shí)例列表包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮膚癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、黑素瘤、惡性黑素瘤、卵巢癌、腦癌、原發(fā)性腦癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌、頭或頸癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、維爾姆斯腫瘤、宮頸癌、睪丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、泌尿生殖器癌、甲狀腺癌、食管癌、骨髓瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎上腺癌、腎細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質(zhì)癌、惡性胰腺胰島素瘤、惡性類癌性癌、絨毛膜癌、蕈樣肉芽腫病、惡性高鈣血癥、宮頸增生、白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病、急性粒細(xì)胞性白血病、毛細(xì)胞性白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、卡波濟(jì)肉瘤、真性紅細(xì)胞增多、原發(fā)性血小板增多(essentialthrombocytosis),何杰金病、非何杰金淋巴痛、軟組織肉瘤、骨肉瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等，T和B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾??；炎性疾?。桓腥?；過度增殖性疾病；AIDS;變性病癥、血管疾病等。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌是乳腺癌或卵巢癌。在一些實(shí)施方案中，所治療的癌細(xì)胞是轉(zhuǎn)移的。在其它實(shí)施方案中，所治療的癌細(xì)胞對(duì)抗癌劑耐藥。在一些實(shí)施方案中，適合用本發(fā)明組合物和方法治療的感染包括但不限于由病毒、細(xì)菌、真菌、支原體、和朊病毒等引起的感染。本發(fā)明的一些實(shí)施方案提供了施用有效量的本發(fā)明組合物和至少一種另外的治療劑(包括但不限于化療抗腫瘤劑、凋亡調(diào)節(jié)劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗炎劑)和/或治療技術(shù)(例如外科干預(yù)和/或放射療法)的方法。很多合適的抗癌劑都可用于本發(fā)明的方法。事實(shí)上，本發(fā)18明關(guān)注于，但不限于很多抗癌劑的給藥，例如誘導(dǎo)凋亡的藥劑；多核苷酸(例如反義核苷酸、核酶、siRNA);多肽(例如酶和抗體)；生物^=莫擬物(例如棉酴或BH3模擬物)；與Bcl-2家族蛋白如Bax結(jié)合的試劑(例如寡聚體或復(fù)合物)；生物堿類；烷化劑；抗腫瘤抗生素；抗代謝物；激素類；鉑類化合物；單克隆或多克隆抗體(例如抗癌藥、毒素、防御素結(jié)合的抗體)，毒素；放射性核素；生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑(例如干擾素類(例如IFN-a)和白介素類(例如IL-2));過繼免疫治療刑；造血生長(zhǎng)因子；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的藥劑(例如全反式維甲酸)；基因治療劑(例如反義治療劑和核苷酸)；腫瘤疫苗；血管生成抑制劑；蛋白體抑制劑；NF-KB調(diào)節(jié)劑；抗-CDK化合物；和HDAC抑制劑等。適合于與公開的化合物一起給藥的化療化合物和抗癌療法的很多其它實(shí)例是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗癌劑包括誘導(dǎo)或刺激凋亡的試劑。誘導(dǎo)凋亡的試劑包括但不限于放射線(例如X-射線、y射線、UV);腫瘤壞死因子(TNF)-相關(guān)因子(例如TNF家族受體蛋白、TNF家族配體、TRAIL、對(duì)TRAILR1或TRAILR2的抗體)；激酶抑制劑(例如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)激酶抑制劑、血管生長(zhǎng)因子受體(VGFR)激酶抑制劑、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)激酶抑制劑、血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)激酶抑制劑和Bcr-Abl激酶抑制劑(如GLEEVEC));反義分子；抗體(例如赫賽汀、B細(xì)胞單克隆抗體、ZEVALIN和AVASTIN);抗雌激素類(例如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素類(例如氟他胺、比卡魯胺、非那雄胺、氨魯米特、酮康唑和皮質(zhì)激素類)；環(huán)氧化酶2(C0X-2)抑制劑(例如塞來考昔、美洛昔康、NS-398和非齒體抗炎藥(NSAIDs));抗炎藥(例如保泰松、地卡特隆、去氫可的松、地塞米松、氟甲去氫氫化可的松、intensol、地塞米松磷酸鈉、甲氟烯索、羥氯喹、潑尼松、氟美松、潑尼松制劑、羥布宗、潑尼松磷酸鈉制劑、保泰松、硫酸羥氯喹、潑尼松龍、潑尼松、PREL0NE和坦特利爾)；和癌癥化學(xué)治療藥(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-ll、氟達(dá)拉濱(FLUDARA)、達(dá)卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽硯、MYL0TARG、VP-16、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、5-FU、多柔比星、吉西他濱、bortezomib、gefitinib、貝伐單抗、泰索帝或泰素)；細(xì)胞信號(hào)分子；神經(jīng)酰胺和細(xì)胞因子；和十字孢堿等。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供了式I化合物和至少一種抗增殖劑或抗腫瘤劑，其選自烷化劑、抗代謝物和天然產(chǎn)物(例如草藥和其它植物和/或動(dòng)物來源的化合物)。適用于本發(fā)明組合物和方法的烷化劑包括但不限于1)氮芥類(例如氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖(L-沙可來新)；和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶和曱基密胺(例如六甲蜜胺和塞替派)；3)磺酸烷基酯(alkylsulfonates)(例如白消安)；4)亞硝基脲類(例如卡莫司汀(BCNU);洛莫司汀(CCNU);司莫司汀(甲基-CCNU);和鏈佐星(鏈脲霉素))；和5)三氮烯類(例如達(dá)卡巴嗪(DTIC;二甲基三氮烯基咪峻甲酰胺(dimethyltriazenoimid-azolecarboxamide))。在一些實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的抗代謝物包括但不限于1)葉酸類似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟尿嘧啶脫氧核苷；FudR)和阿糖胞苷(阿糖胞苷))；和3)嘌呤類似物(例如巰嘌呤(6-巰嘌呤；6-MP)、硫鳥嘌呤(6-硫?yàn)踵堰剩籘G)和噴司他丁(2'-脫氧柯福霉素))。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的化療劑包括但不限于1)長(zhǎng)春花堿類(例如長(zhǎng)春堿(VLB)、長(zhǎng)春新堿)；2)鬼臼乙叉戒類(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如放線菌素(放線菌素D)、柔紅霉素(柔紅審素；紅比霉素)、多柔比星、博來霉素、普卡霉素(光輝霉素)和絲裂霉素(絲裂霉素C));4)酶類(例如L-門冬酰胺酶)；5)生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑(例如干擾素-ot);6)鉑配位絡(luò)合物(例如順鉑(順-DDP)和卡鉑)；7)蒽二酮類(例如米托蒽醌)；8)取代的脲類(例如羥基脲)；9)甲肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-甲肼；MIH));10)腎上腺皮質(zhì)抑制劑(例如米托坦(o，p，-DDD)和氨魯米特)；11)腎上腺皮質(zhì)類固醇類(例如潑尼松)；l2)黃體酮(例如己酸羥孕酮、醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚20和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素藥(例如他莫昔芬)；15)雄激素類(例如丙酸睪丸酮和氟甲睪酮)；16)抗雄激素類(例如氟他胺)；和17)促性腺激素釋放激素類似物(例如醋酸亮丙瑞林)。常規(guī)用于癌癥治療的任何溶瘤細(xì)胞劑都可在本發(fā)明組合物和方法中發(fā)揮作用。例如，美國(guó)食品與藥品管理局維持了批準(zhǔn)用于美國(guó)的溶瘤細(xì)胞劑的處方集。U.S.F.D.A.的國(guó)際對(duì)應(yīng)機(jī)構(gòu)(Internationalcounterpartagencies)維持了類似的處方集。表1提供了批準(zhǔn)用于美國(guó)的示例性抗腫瘤劑的列表。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到在所有美國(guó)批準(zhǔn)的化療劑上都必需具備的"產(chǎn)品標(biāo)簽"描述了示例性藥劑的批準(zhǔn)適應(yīng)癥、給藥信息和毒性數(shù)據(jù)等。表1.<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>BCGLive(牛分才支^于菌(丑ac/Z/usCa/邁efte~GuJir/;2[BCG]，次代林Montreal)減毒菌抹的凍干制劑)TICEBCG0rganonTeknika,Corp.,Durham,NC貝沙羅汀膠嚢(4-[l-(5'6，7,8-四氫-3，5，5，8，8-五曱基-2-萘基)乙烯基]苯曱酸)TargretinLigandPharmaceutica1s貝沙羅汀凝膠TargretinLigandPharmaceuticals博來霉素(輪絲鏈霉菌產(chǎn)生的細(xì)胞毒素糖肽類抗生素；博來霉素A:和博來霉素B2)BlenoxaneBristol-MyersSquibbCo.，NY,NY卡培他濱(5'-去氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞啶)XelodaRoche卡鉑(4白，二胺[1,1-環(huán)丁烷二羧酸合(2-)-O,0']-,(SP-4-2))ParaplatinBristo卜MyersSquibb卡莫司汀(1，3-雙(2-氯乙基)-1-亞硝基脲)BCNU，BiCNUBristol-MyersSquibb卡莫司汀與聚苯丙生20植入劑GliadelWaferGuilfordPharmaceutica1s，Inc.，Ba11imore,MD塞來考昔(作為4-[5-(4-甲苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-l-基]苯磺酰胺)CelebrexSearlePharmaceuticaIs,England苯丁酸氮芥(4-[雙(2-氯乙基)氨基]苯丁酸)LeukeranGlaxoSmithKline順柏(PtCl2線)PlatinolBristol-MyersSquibb克拉屈濱(2-氯-2'-去氧-b-D-阿糖腺苷)Leustatin,2-CdAR.W.JohnsonPharmaceuticalResearchInstitute,Raritan,NJ環(huán)磷酰胺(2-[雙(2-氯乙基)氨基]四氫-2H-13，2-氧氮雜膦2-氧化物一水合物)Cytoxan,Bristol-MyersSquibb阿糖胞苷(l-b-D-阿糖吹喃糖胞瘞啶，C9H13N305)Cytosar-UPharmacia&UpjohnCompany22<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>usinjection多柔比星脂質(zhì)體DoxilSequusPharmaceutica1s，Inc.,Menlopark,CA丙酸屈他雄酮(17b-羥基-2a-甲基-5a-雄甾烷-3-酮丙酸鹽)DromostanoloneEliLilly&Company,Indianapolis,IN丙酸屈他雄酮MasteroneinjectionSyntex,Corp.,PaloAlto,CAElliott'sB溶液Elliott'sBSolutionOrphanMedical,Inc表柔比星((8S-順式)-10-[(3-氨基-2，3,6-三脫氧-a-L-阿拉伯糖-己p比喃基)氧代]-7，8，9,10-四氫-6，8,11-三羥基-8-(輕基乙?；?-1-曱氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽)EllencePharmacia&UpjohnCompany阿法依伯汀(重組肽)EpogenAmgen,Inc雌莫司汀(雌-1,3,5(10)-三烯-3,17-二醇(17(P))-,3-[雙(2-氯乙基)氨基曱酸酯]17-(二氫磷酸酯)，二鈉鹽，一水合物，或雌二醇3-[雙(2-氯乙基)氨基曱酸酯]17-(二氫磷酸酯)，二鈉鹽，一水合物)EtncytPharmacia&UpjohnCompany磷酸依托泊苷(4'-去曱基表鬼臼毒素9-[4,6-0-(R)-亞乙基-(P)-D-吡喃葡萄糖苷],4'-(二氫磷酸酯))EtopophosBristol-MyersSquibb依托泊苷，VP-16(4'-去曱基表鬼臼毒素9-[4，6-0-(R)-亞乙基-((3)-D-吡喃葡萄糖苷])VepesidBristol-MyersSquibb依西美坦(6-亞曱基雄-1,4-二烯-3，17-二酮)AromasinPharmacia&UpjohnCompany非格司亭(r-metHuG-CSF)NeupogenAmgen，Inc24氟尿苷(動(dòng)脈內(nèi))(2'-去氧-5-氟尿苷)FUDRRoche氟達(dá)拉濱(抗病毒劑阿糖腺芬，9-b-D-阿糖呔喃糖腺嘌呤(ara-A)的氟化核苷酸類似物)FludaraBerlexLaboratories,Inc.，CedarKnoUs，NJ氟尿嘧啶，5-FU(5-氟-2,4(lH，3H)-嘧啶二酮)Adruci1ICNPharmaceuticals,Inc.,Humacao，PuertoRico氟維司群(7-a-[9-(4,4,5，5，5-五氟戊基亞磺?；?壬基]雌-1，3，5-(10)-三烯-3，17-卩-二醇)FaslodexIPRPharmaceuticals,Guayama，PuertoRico吉西他濱(2'-去氧-2',2'-二氟胞苷單鹽酸鹽(b-異構(gòu)體))GsmzarEliLilly吉姆單抗奧佐米星(抗-CD33hP67.6)MylotargWyethAyerst醋酸戈舍瑞林([D-Ser(But)6,Azgly'。]LHRH的醋酸鹽；pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2醋酸鹽[C5,H84Nu014ZoladexImplantAstraZenecaPharmaceutica1s羥基脲HydreaBristol-MyersSquibb替伊莫單抗(由單克隆抗體Ibritumomab和聯(lián)結(jié)子-螯合劑tiuxetan[N-[2-二(羧基曱基)氨基]-3-(對(duì)-異氰硫基苯基)-丙基]-[N-[2-二(羧基甲基)氨基]-2-(曱基)-乙基]甘氨酸之間的疏脲共價(jià)鍵產(chǎn)生的免疫軛合物)ZevalinBiogenIDEC，Inc.，CambridgeMA伊達(dá)比星(5,12-并四苯二酮，9-乙?；?7-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧-(a)-L-來蘇-己吡喃糖基)氧基]-7，8，9,10-四氫-6,9，11-三羥基鹽酸鹽，(7S-順式))IdamycinPharmacia&UpjohnCompany異環(huán)磷酰胺(3-(2-氯乙基)-2-[(2-氯乙基)氨基]四氫-2H-1,3，2-氧氮雜膦2-氧化物)IFEXBristol-MyersSquibb甲碌酸伊馬替尼(ImatinibMesUate)(4-[(4-曱基-l-哌嗪基)曱基]-N-[4-甲基GleevecNovartisAG,Basel,Switzerland25-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]-苯基]苯曱酰胺曱磺酸鹽)干擾素a-2a(重組肽)Roferon-AHoffmann-LaRoche,Inc.，NuUey，NJ干擾素a-2b(重組肽)IntronA(Lyophi1izedBetaseron)ScheringAG,Berlin,Germany伊立替康HC1((4S)-4，11-二乙基-4-羥基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰氧基]-1H-吡喃并[3，，4':6,7]吲。桊并[1,2-b]喹啉-3，14(4H，12H)二酮鹽酸鹽三水合物)CamptosarPharmacia&UpjohnCompany來曲唑(4,4，-(1H-1，2，4-三唑-1-基亞甲基)二節(jié)腈)FsmaraNovartis亞葉酸4丐(L-谷氨酸，N[4[[(2氨基-5-曱?；?1，4，5,6，7，8六氫4氧代6-蝶啶基)甲基]氨基]苯曱?；鵠，鈣鹽(l:l))Weilcovorin,LeucovorinImmunex，Corp.,Seattle,WA左旋咪唑HC1((-)-(S)-2，3，5，6-四氫-6-苯基咪唑并[2,1-b]p塞唑單鹽酸鹽CUH12N2S.HC1)ErgamisolJanssenResearchFoundation,Titusville,NJ羅莫司汀(1-(2-氯-乙基)-3-環(huán)己基-1-亞硝基脲)Cee冊(cè)BristoI-MyersSquibbMeclorethamine,氮芥(2-氯-N-(2-氯乙基)-N-甲基乙胺鹽酸鹽)dustargenMerck醋酸曱地孕酮17cc(乙酰氧基)-6-甲基孕-4,6-二烯-3，20-二酮MegaceBristol-MyersSquibb美法侖，L-PAM(4-[二(2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸)AlkeranGlaxoSmithKline巰基嘌呤，6-MP(1,7-二氫-6H-嘌呤-6-硫酮單水合物)Purinetho1GlaxoSmithKline美司鈉(2-巰基乙烷磺酸鈉)AstaMedica26曱氨蝶呤(N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)曱基]甲基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸)MethotrexateLederleLaboratories曱氧沙林(9-甲氧基-7H-furo[3,2-g][1]-苯并呋喃-7-酮)UvadexTherakos,Inc.,WayExton，Pa絲裂霉素cMutamycinBristol-MyersSquibb絲裂霉素cMitozytreXSuperGen，Inc.，Dublin,CA米托坦(1，1-二氯-2-(鄰-氯苯基)-2-(對(duì)-氯苯基)乙烷)LysodrenBristol-MyersSquibb米托蒽醌(1,4-二羥基-5，8-二[2-[(2-羥基乙基)氨基]乙基]氨基)-9，10-蒽二酮二鹽酸鹽)NovantronImmunexCorporation笨丙酸諾龍Durabolin-50Organon，Inc.，WestOrange,NJ諾非單抗VerlumaBoehringerIngelheimPharmaKG，Germany奧普瑞白介素(IL-ll)NeumegaGeneticsInstitute，Inc.，Alexandria,VA奧沙利鉑(順式-[(IR，2R)-1，2-環(huán)己烷二胺-N,N，][oxalato(2-)-0，0，]鉑)EloxatinSanofiSynthelabo，Inc.，NY，NY紫杉醇(具有(2R，3S)-N-苯甲酰基-3-苯基異絲氨酸的5|3，20-環(huán)氧-1，2a，4，7(3，10P,13a-六羥基紫杉-11-烯_9-酮4，10-二醋酸2-苯甲酸13-酯)TAX0LBristol-MyersSquibb氨羥二膦酸二鈉(膦酸(3-氨基-1-羥基亞丙基)二-，二鈉鹽，五水合物，(APD))ArediaNovartis培力口酵((單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞氨基)11-17-腺苷脫氨基酶)Adagen(PegademaBovine)EnzonPharmaceutica1s，Inc.，Bridgewater，NJ培力口巾白酵Oncaspar27<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>放射免疫療法等。所述動(dòng)物可以任選地接受放射致敏劑(例如甲硝唑、米索硝唑、動(dòng)脈內(nèi)Budr、靜脈內(nèi)碘脫氧嘧啶核苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑類、2H-異吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-lH-咪唑-l-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-affinic低氧選擇性細(xì)胞毒素、卣化DNA配體、1，2，4苯并三溱氧化物、2-硝基咪唑衍生物、包含氟的硝基吡咯衍生物、苯曱酰胺、煙酰胺、吖啶-插入劑、5-硫代四喳(thiotretrazole)衍生物、3-硝基-l，2，4-三唑、4，5-二硝基咪唑衍生物、羥基化texaphrins、順鉑、絲裂霉素、替拉扎明(tiripazamine)、亞硝基脲、巰基噪呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、博來霉素、長(zhǎng)春新堿、卡鉑、表柔比星、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春地辛、依托泊苷、紫杉醇、熱(過熱)等)、輻射防護(hù)劑(例如巰乙胺、氨基烷基二氫疏代磷酸酯、阿米斯丁(WR2721)、IL-I、IL-6等)。放射致敏劑增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的殺滅。放射防護(hù)劑包括健康組織不受輻射有害作用的影響?？梢越o患者使用任何類型的輻射，只要輻射劑量可以被患者耐受并且不產(chǎn)生不可接受的消極副作用即可。適宜的放療類項(xiàng)目包括例如電離(電磁)放療(例如，X-射線或Y射線)或粒子束輻射治療(例如高線性能量輻射(highlinearenergyradiation)).電離輻射被定義為包含具有足以產(chǎn)生電離(即獲得或損失電子)的能量的微?；蚬庾拥妮椛?如例如US5,770,581中所述，其本文被全部引入作為參考)。臨床醫(yī)師可以至少部分控制輻射的作用。為了荻得最大靶細(xì)胞接觸和降低毒性，優(yōu)選地對(duì)輻射的劑量進(jìn)行分級(jí)給藥。被給藥于動(dòng)物的輻射的總劑量?jī)?yōu)選地為約0,01戈瑞(Gy)至約100Gy。在治療過程中，更優(yōu)選地使用約10Gy至約65Gy(例如，約15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、或60Gy)。雖然在一些實(shí)施方案中，可以在一天過程中給予輻射的全部劑量，但是理想地將該總刑量分成幾部分并將其在幾天內(nèi)進(jìn)行給藥。令人希望地是在至少約3天，例如，至少5、7、10、H、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52、或56天(約1-8周)的31過程中進(jìn)行放療。因此，輻射的日劑量將包含約1-5Gy(例如，約1Gy、1,5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy、或4.5Gy),優(yōu)選1-2Gy(例如，1.5-2Gy)。所述輻射的日劑量應(yīng)足以誘導(dǎo)所靶向細(xì)胞的破壞。如果在一定時(shí)期內(nèi)擴(kuò)張(stretched)，則優(yōu)選地不每天進(jìn)行輻射，從而使得動(dòng)物可以進(jìn)行休息和實(shí)現(xiàn)該治療的作用。例如，對(duì)于各治療周而言，理想地連續(xù)5天進(jìn)行輻射，然后兩天不進(jìn)行治療，從而使得每周休息2天。但是，根據(jù)動(dòng)物的響應(yīng)和任何可能的副作用，輻射可以被l天/周、2天/周、3天/周、4天/周、5天/周、6天/周地進(jìn)行或者一周7天都進(jìn)行?？梢栽谥委熤芷诘娜魏螘r(shí)間開始輻射治療。優(yōu)選地在第1或2周開始輻射，并且在該治療周期的其余持續(xù)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行輻射。例如，在包含對(duì)例如實(shí)體瘤治療6周的治療時(shí)期內(nèi)，在該時(shí)期的1-6周或2-6周內(nèi)進(jìn)行輻射。或者，在包含5周的治療時(shí)期的1-5周或2-5周內(nèi)進(jìn)行輻射。但是，并不是要用這些實(shí)例性放療給藥時(shí)間表對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。還可以用抗微生物的治療劑作為本發(fā)明的治療劑。可以使用可以殺死、抑制或者減弱微生物功能的任何物質(zhì)以及認(rèn)為具有該類活性的任何物質(zhì)?？刮⑸飫┓窍拗菩缘匕▎为?dú)或聯(lián)合使用的天然和合成抗生素、抗體、抑制性蛋白(例如防御素)、反義核酸、破裂劑等。實(shí)際上，可以使用任何類型的抗生素，非限制性地包括抗菌劑、抗細(xì)菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑等。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽和一種或多種治療劑或抗癌劑在下述一個(gè)或多個(gè)條件下施用于動(dòng)物不同的周期性、不同的持續(xù)時(shí)間、不同的濃度、不同的給藥途徑等。在一些實(shí)施方案中，化合物在治療劑或抗癌劑之前施用，如施用治療劑或抗癌劑之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時(shí)，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周。在一些實(shí)施方案中，化合物在治療劑或抗癌劑之后前施用，如施用抗癌劑之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時(shí)，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周。在一些實(shí)施方案中，化合物和治療劑或抗癌劑同時(shí)32施用，但給藥方案不同，例如，化合物每日施用，而治療劑或抗癌劑每周、每?jī)芍堋⒚咳芑蛎克闹苁┯?次。在其它實(shí)施方案中，化合物每周施用l次，而治療劑或抗癌劑每日、每周、每?jī)芍?、每三周或每四周施?次。包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)的組合物包括所有的組合物，這些組合物包含有效實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的量的本發(fā)明化合物。雖然個(gè)體需求不同，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定各組分有效量的最佳范圍。典型地，化合物可口服施用于哺乳動(dòng)物，如人類，以0.0025到50mg/kg劑量，或藥學(xué)可接受鹽的相當(dāng)?shù)牧?，每天，被治療響?yīng)誘導(dǎo)凋亡病癥的動(dòng)物的體重。優(yōu)選地，口服施用約0.01到約10mg/kg來治療、改善或預(yù)防這些病癥。對(duì)于肌內(nèi)注射來說，劑量通常約為口服劑量一半。例如，適宜的肌內(nèi)劑量是約0.0025到約25mg/kg，最優(yōu)選地，是約0.01到約5mg/kg。單位口服劑量可包含約0.01到約1000mg,優(yōu)選約0.1到約lOOmg的化合物。單位劑量可作為一個(gè)或多個(gè)片劑或膠嚢每曰施用1次或多次，每個(gè)片劑或膠嚢包含約0.1到約10mg，方便地約0.25到50mg的化合物或其溶劑化物。在局部用制劑中，化合物的濃度可為約0.01到100mg每克載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物的濃度為約0.07-1.0mg/ml，更有選地，約O.1-0.5mg/ml，最優(yōu)選地，約0.4mg/ml。除了作為未加工化學(xué)品施用化合物外，本發(fā)明化合物可以作為包含適宜藥學(xué)可接受載體的藥物制劑的一部分而施用，藥學(xué)可接受的載體包括賦形劑和輔劑，它們使得從化合物到藥學(xué)上可以使用的制劑的處理變得容易。優(yōu)選地，這些制劑，特別是可以口服或局部施用和可以用作優(yōu)選給藥類型的那些制劑，例如片劑、糖衣片、緩釋錠劑和膠嚢、口腔清洗劑和口腔洗劑、凝膠劑、液體混懸劑、洗發(fā)劑、發(fā)膠、洗發(fā)香波和可以直腸施用的制劑，如栓劑，和通過注射施用的適宜液體，局部或口服，包含約0.01到99%,優(yōu)選約0.25到75°/。的活性化合物，和賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物可施用于可感受本發(fā)明化合物有益效果的任何動(dòng)物。盡管本發(fā)明不打算被限制成這樣，但這些動(dòng)物中最重要的是哺乳動(dòng)物，如人。其它動(dòng)物包括牲畜動(dòng)物(奶牛、綿羊、豬、馬、狗、貓等)?；衔锖推渌幬锝M合物可通過實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的任何方式施用。例如，可通過胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、面頰、鞘內(nèi)、顱內(nèi)、鼻內(nèi)或局部途徑施用。任選地，或同時(shí)，可通過口服途徑施用。施用的劑量取決于受試者的年齡、健康狀態(tài)和體重，同時(shí)治療的種類，如果還有的話，治療的頻率和所需要效果的性質(zhì)。本發(fā)明的藥物制劑都以本身已知的方式制備，例如，通過常規(guī)的混合、制粒、包糖衣、溶解或凍干方法制備。因此，口服使用的藥物制劑可以通過將活性化合物與固體賦形劑混合，任選地研磨所得混合物和處理顆?；旌衔?，加入適宜的輔劑之后，如果希望或需要，獲得片劑或糖衣片核心而獲得。特別地，適宜的賦形劑是填充劑如糖類，例如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇，纖維素制品和/或磷酸鈣，例如磷酸三4丐或磷酸氫鈣，和粘合劑如淀粉糊，使用，例如，玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果期望，可加入崩解劑，如前述的淀粉和羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。輔劑為，尤其是，流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如硅石、滑石、硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。如果希望，為糖衣片核心提供了抵抗胃液的適宜的包衣。為此目的，可使用濃縮的糖溶液，糖溶液可任選地包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、硝基漆溶液和適宜的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了制備抵抗胃液的包衣，使用了適宜纖維素制品如鄰苯二曱酸乙酰纖維素或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯的溶液。染色原料或色素可加入到片劑或糖衣片包衣中，例如，為了鑒定或?yàn)榱吮碚骰钚曰衔飫┝康慕M合。34可以用于口服的其它藥物制劑包括由明膠制備的推入配合的膠嚢，和由明膠和諸如甘油或山梨醇制備的軟的、密封膠嚢。推入配合的膠嚢可以包含顆粒形式的活性化合物，這些化合物可與填充劑如乳糖，粘合劑如淀粉，和/或潤(rùn)滑劑如滑石或硬脂酸鎂和，任選地穩(wěn)定劑混合。在軟膠嚢中，活性化合物優(yōu)選溶解或混懸于適宜的液體當(dāng)中，例如脂肪油，或液體石蠟。此外，可加入穩(wěn)定劑?？梢灾蹦c使用的可能的藥物制劑包括，例如，栓劑，其由一種或多種活性化合物與栓劑基質(zhì)聯(lián)合組成。適宜的栓劑基質(zhì)是，例如天然或合成的甘油三酯或鏈烷烴。另外，還可能使用明膠直腸膠嚢，其包括活性化合物和基質(zhì)的聯(lián)合?？赡艿幕|(zhì)材料包括，例如液體甘油三酯、聚乙二醇或鏈烷烴。用于胃腸外給藥的適宜制劑包括水溶性形式的活性化合物，例如水溶性鹽形式的化合物的水溶液和堿性溶液。此外，還可以使用適宜的油性注射混懸液的形式的活性化合物的混懸液。適宜的親脂性溶劑或基質(zhì)包括脂肪油，例如芝麻油、或合成的脂肪酸酯類，例如油酸乙酯或甘油三酯類或聚乙二醇-400。含水注射混懸液可以包含增加該混懸液粘度的物質(zhì)，所述物質(zhì)包括例如羧曱基纖維素鈉、山梨醇、和/或葡聚糖。所述混懸液還可任選地包含穩(wěn)定劑。通過選擇適宜的栽體，本發(fā)明的局部組合物優(yōu)選地被制備為油狀物、乳膏、洗劑、軟膏等形式。適宜的栽體包括植物油或礦物油、白凡士林(白軟石蠟)、支鏈脂類或油類、動(dòng)物脂類和高分子量醇(高于C12)。優(yōu)選的載體是這些活性成分在其中可溶的載體。如果需要的話，其還可以包含乳化劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑和抗氧劑以及賦予其顏色或香味的物質(zhì)。此外，在這些局部制劑中還可以使用經(jīng)皮滲透增強(qiáng)劑。在US專利3，989，816和4，444，762中可以找到該類增強(qiáng)劑的實(shí)例。乳膏優(yōu)選地是由礦物油、自乳化的蜂蠟和水制成的，將溶解于少量油如杏仁油中的活性成分混合于該混合物中。該類乳膏的一種典型實(shí)例是一種包含約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油的乳膏。35軟膏可通過將活性成分在植物油如杏仁油中的溶液與溫?zé)岬能浭灮旌?，然后使該混合物冷卻來進(jìn)行制備。該類軟膏的一種典型實(shí)例是一種包含約30%重量杏仁油和約70%重量白軟石蠟的軟膏。洗劑可方便地通過將活性成分溶解于適宜的高分子量醇如丙二醇或聚乙二醇中來進(jìn)行制備。下列實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的方法和組合物進(jìn)行的舉例說明，而不是限制。在臨床治療中通常會(huì)遇到對(duì)許多情況和參數(shù)進(jìn)行其它適宜改變和調(diào)整的情況，其對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言都是顯而易見的并且也被包括在本發(fā)明的主旨和范圍中。實(shí)施例1基于結(jié)構(gòu)對(duì)STAT3抑制劑進(jìn)行的虛擬篩選STAT3P同型二聚體的三維結(jié)構(gòu)顯示，Stat3P的二聚體形成發(fā)生在兩個(gè)SH2區(qū)之間(圖1A)(Becker等，^Mre"《145(1998);Berman等，2》235(2000))。這兩個(gè)SH2區(qū)通過來自各自單體的環(huán)片段(loopsegment)(Ala702-Phe716)連接在一起。對(duì)Stat3P的生物學(xué)功能至關(guān)重要的磷酰酪氨酸(Y-705)位于該環(huán)片段內(nèi)，它將四個(gè)相鄰的氨基酸殘基與另一個(gè)單體的SH2區(qū)上的空腔結(jié)合在一起。為了鑒別可妨礙Stat3(3二聚體形成過程的小分子，將以2.25A分辨率分辨的Stat3P的晶體結(jié)構(gòu)用于此項(xiàng)研究(將1BG1輸入到ProteinDataBank中)。從Dr.C.W.Muller處直接獲得了與DNA結(jié)合的Stat3同型二聚體的三維結(jié)構(gòu)。在虛擬篩選工作中使用的化學(xué)數(shù)據(jù)庫包4舌國(guó)立癌癥研究所(NationalCancerInstitute)(NCI)數(shù)據(jù)庫、默克索引(theMerckIndex)、Aldrich-Sigma產(chǎn)品目錄和RyanScientific產(chǎn)品目錄?？偟恼f來，這四個(gè)數(shù)據(jù)庫提供了總共將近429,000個(gè)有機(jī)化合物。公眾可獲得的NCI數(shù)據(jù)庫本身在其內(nèi)容中就提供了化合物的三維結(jié)構(gòu)模型。其它三個(gè)化學(xué)產(chǎn)品目錄只提供了它們的化合物的二維化學(xué)結(jié)構(gòu)。為了解決這個(gè)問題，釆用CORINA程序(2.6版本，MolecularNetworksGmbHInc.,Erlangen，Germany)來生成這三個(gè)數(shù)據(jù)庫中的化合物的三維結(jié)構(gòu)模型。在該過程中釆用CORINA程序中的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置。使用分子對(duì)接程序DOCK(4.0版本)(Ewing等，/,Co/^W,紐":411(2001))來進(jìn)行虛擬篩選。將Stat3PSH2區(qū)上的結(jié)合腔定義為對(duì)接分子的靶區(qū)。使用Sybyl軟件(6.9版本，TriposInc，St.Louise,MO)來將標(biāo)準(zhǔn)AMBER(指的是生物分子才莫擬的一組分子機(jī)械力字段)原子部分電荷賦值到Stat3蛋白和Gasteiger-Huckel原子部分電荷賦值到要對(duì)接的各個(gè)配體分子上。將分子量落在200到700之間的數(shù)據(jù)庫中的各個(gè)分子對(duì)接，變成目標(biāo)結(jié)合位點(diǎn)。將各個(gè)數(shù)據(jù)庫中評(píng)分在前10%的化合物，如DOCK程序挑選出的那些，提取出來，結(jié)合在一起得到總共將近35,000個(gè)化合物。根據(jù)DOCK程序建議的這些化合物的結(jié)合模型，進(jìn)一步應(yīng)用X-評(píng)分程序(1.1版本)(Wang等，/.Coyz7/W.j/c^d#0人"e義11(2002))以更好地估算這些化合物的結(jié)合親和力。然后通過X-評(píng)分程序所預(yù)測(cè)的結(jié)合親和力重新劃分預(yù)先選出的35,000個(gè)化合物的等級(jí)。在X-評(píng)分程序從該化合物池挑選出的評(píng)分最好的200個(gè)化合物中，從NCI獲得或從Aldrich-SigmaCorp.(St.Louis,MO)和RyanScientificInc.(IsleofPalms，SC)購(gòu)買其中的100個(gè)化合物。用體外細(xì)胞螢光素酶試驗(yàn)(參見下面)篩選所有得到的化合物。在測(cè)試的IOO個(gè)化合物中，最有希望的化合物是從NCI獲得的STA-21(NCINo:628869)。STA-21是天然產(chǎn)物提取物，是分子量為306Da(。1404)的angucycline抗生素四角霉素類似物(圖ID)。用DOCK程序給出STA-21的原始預(yù)期結(jié)合模型。然后用在Sybyl軟件6.9版本中應(yīng)用的AMBER力字段在結(jié)合位點(diǎn)的系統(tǒng)規(guī)定參數(shù)內(nèi)通過結(jié)構(gòu)最佳化進(jìn)行改善。改善的模型顯示在圖IB和1C中。該模型預(yù)期STA-21在PTR殘基結(jié)合的同一個(gè)位點(diǎn)結(jié)合，并且它可與數(shù)個(gè)臨近的殘基，包括Arg595、Arg609和Ile634，形成特定的氫鍵(圖1C)。根據(jù)這個(gè)結(jié)合模型，X-評(píng)分程序預(yù)期STA-21對(duì)Stat3PSH2區(qū)具有Kd337的結(jié)合親和力。實(shí)施例2STA-21對(duì)STAT3轉(zhuǎn)錄活性的影響用Stat3營(yíng)光素酶報(bào)道子系統(tǒng)評(píng)價(jià)100個(gè)選出的抑制劑。MDA-MB-435s乳腺癌細(xì)胞和Caov-3卵巢癌細(xì)胞都表達(dá)組成性激活的Stat3(Song等，M/.W:1017(2004);Song等，S/oc力e瓜We義CoyM7i/","々143(2004))。通過Stat3-依賴性螢光素酶報(bào)道子pLucTKS3的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，從這兩個(gè)細(xì)胞系中建立克隆細(xì)胞(Turkson等，W.Ce/人萬/o人7《2545(1998))。質(zhì)粒pLucTKS3在TK最小啟動(dòng)子中含有Stat3-結(jié)合位點(diǎn)的7個(gè)拷貝，它的激活特異性地依賴于細(xì)胞環(huán)境中的Stat3狀態(tài)。用Lipofectamine2000試劑將pLucTKS3和pLucSV40螢光素酶(缺乏Stat3結(jié)合位點(diǎn)的對(duì)照質(zhì)粒)報(bào)道子質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Caov-3和MDA-MB-435s細(xì)胞系中。選擇顯示出高螢光素酶活性的穩(wěn)定的克隆，以篩選Stat3抑制劑。以20MM的最終濃度將所選擇的克隆暴露于Stat3抑制劑48h，用Promega螢光素酶試劑盒(Madison，WI)測(cè)量螢光素酶活性。在所測(cè)試的100個(gè)小分子中，STA-21對(duì)Caov-3克隆細(xì)胞中Stat3誘導(dǎo)的螢光素酶活性顯示出了顯著的抑制作用(圖2A)。用被pLucTKS3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-MB-435s克隆細(xì)胞進(jìn)一步證實(shí)STA-21對(duì)Stat3活性的抑制作用(圖2B)。對(duì)MDA-MB-435s克隆細(xì)胞來說，暴露于20uMSTA-2148h以后，螢光素酶活性降低超過5倍(圖2B)。這表明STA-21可阻止Stat3結(jié)合到TK啟動(dòng)子區(qū)，并抑制克隆細(xì)胞中的螢光素酶活性。STA-21不影響不含Stat3DNA結(jié)合位點(diǎn)的被SV40螢光素酶報(bào)道子轉(zhuǎn)染的克隆內(nèi)的螢光素酶活性，這表明在缺乏Stat3DNA結(jié)合位點(diǎn)的情況下，STA-21本身不會(huì)降低螢光素酶活性(圖2B)。作為對(duì)照，不抑制Stat3-依賴性螢光素酶活性的數(shù)個(gè)化合物顯示在圖2A。實(shí)施例3STA-21對(duì)STAT3的因子上游區(qū)和下游區(qū)的影響接下來使用已報(bào)道的電泳遷移率變動(dòng)分析來驗(yàn)證STA-21是否會(huì)降低Stat3DNA結(jié)合活性(Turkson等，/.C力e瓜"^45443(2001))。在具有組成性Stat3信號(hào)的MDA-MB-435s乳腺癌細(xì)胞中觀察Stat3DNA高結(jié)合活性(圖3A)。相反，在無組成性Stat3信號(hào)的MCF10A和TERT乳腺細(xì)胞沒有顯示出Stat3DNA結(jié)合活性。STA-21(30yM)抑制Stat3DNA結(jié)合活性(圖3A)。在無組成性Stat3信號(hào)的MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞中，STA-21(20或30juM)也抑制下游區(qū)抗凋亡效應(yīng)子Bcl-X"如蛋白印跡分析所顯示的那樣(圖3B)。有趣的是，Stat3上游區(qū)調(diào)節(jié)子JAK2(P-JAK2)、Src(P-Src)和EGFR(P-EGFR)的磷酸化不受STA-21的影響(圖3B)。結(jié)合MDA-MB-435s細(xì)胞中Stat3而不是Statl和Stat5DNA結(jié)合活性的STA-21抑制結(jié)果(圖3A)，STA-21對(duì)Stat3的抑制可通過Stat3蛋白的直接異常而達(dá)到，而不是通過抑制Stat3上游調(diào)節(jié)子。同時(shí)，STA-21不影響AKT(P-AKT)或ERK(P-ERK)的磷酸化(圖3B)。實(shí)施例4STA-21對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活的影響既然STA-21抑制Stat3-依賴性螢光素酶和DNA結(jié)合活性,因此接下來驗(yàn)證STA-21是否抑制具有組成性Sta13信號(hào)的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。將細(xì)胞在20pM或30^M的STA-21中暴露48小時(shí)之后，如在細(xì)胞循環(huán)表示的凋亡細(xì)胞的亞-Gl階段中細(xì)胞積聚作用所顯示的，STA-21對(duì)具有組成性激活Stat3的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和MDA-MB-468的存活顯示了顯著的抑制活性(圖4B)。然而，STA-21對(duì)不具有組成性Stat3信號(hào)的MCF7和MDA-MB-453乳腺癌細(xì)胞和人皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)具有極小的抑制作用(圖4B)。通過測(cè)量磷酸化Stat3來確認(rèn)細(xì)胞系的Stat3狀態(tài)(圖4A)。結(jié)合來自于使用MTT進(jìn)行的細(xì)胞生存能力分析的數(shù)據(jù)，STA-21顯示了強(qiáng)有效地抑制包含組成性活性Stat3的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。實(shí)施例5STA-21對(duì)STAT3易位和二聚體形成的影響39將用于表達(dá)Stat3-Flag和Stat3-HA靶向蛋白的質(zhì)粒pCMV-Stat3-Flag和pCMV-Stat3-HA共轉(zhuǎn)染到MDA-MB-435乳腺癌細(xì)胞中。將被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞暴露于STA-21(20mM)24小時(shí)，然后在-20°C下用100%甲醇固定30分鐘。接著用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)洗滌3次，將抗-HA(家兔，SantaCruzBiotechnology)和/或抗-Flag(小鼠，Sigma)抗體加入到細(xì)胞中，在37°C下培養(yǎng)細(xì)胞1小時(shí)。用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞3次，將抗-家兔IgG-異硫氰酸熒光素(FITC)或/和抗-小鼠IgG-羅丹明(RHOD)的第二抗體加入，培養(yǎng)細(xì)胞1小時(shí)。接著用PBS洗滌3次，使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。結(jié)果顯示Stat3-Flag和Stat3-HA蛋白的核易位被STA-21阻斷(圖5A-5G)。用FITC(綠色)和羅丹明(紅色)分別染色，如圖5E和5F所示，STA-21抑制了Stat3-Flag或Stat3-HA核易位。在未使用STA-21處理的細(xì)胞中，使用聯(lián)合的FITC和羅丹明染色觀察到了強(qiáng)烈的橙色染色，表明Stat3-Flag和Stat3-HA靶向的蛋白局限于細(xì)胞核中，兩種顏色合并變?yōu)槌壬?圖5D)。然而，當(dāng)所有的細(xì)胞都使用20pM的STA-21處理時(shí)，整個(gè)細(xì)胞表現(xiàn)出更弱的橙色染色(圖5G)，暗示STA-21阻斷了Stat3-Flag和Stat3-HA蛋白的核易位。作為對(duì)照，DMSO用作溶劑顯示對(duì)細(xì)胞沒有作用。還研究了STA-21對(duì)乳腺癌MDA-MB-435細(xì)胞中Stat3體內(nèi)二聚作用的影響。暴露于20pM的STA-2124小時(shí)后，采集細(xì)胞，將源自表達(dá)Stat3-Flag和Stat3-HA靶向蛋白的細(xì)胞的溶解產(chǎn)物分別與抗-Flag或抗-HA抗體進(jìn)行免疫沉淀。將免疫沉淀反應(yīng)混合物在10%SDS-PAGE上分離開，分別用抗-HA、抗-Flag或抗-Stat3抗體進(jìn)行免疫印跡分析。結(jié)果顯示在MDA-MB-435癌細(xì)胞中STA-21取消了Stat3-Flag和Stat3-HA蛋白間的二聚作用(圖5H)?，F(xiàn)在已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了充分描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到其同樣可以在不影響本發(fā)明范圍以及其任何實(shí)施方案的情況下，在一些病癥、制劑和其它參數(shù)的很寬的等同范圍內(nèi)來進(jìn)行。本文所列舉的所有專利、專利申請(qǐng)和公開物在這里都被全部引入作為參考。權(quán)利要求1.抑制細(xì)胞中Stat3活性的方法，包括將細(xì)胞與STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽接觸。2.抑制具有增加的Stat3活性的細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包括將細(xì)胞與STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽接觸。3.治療、改善或預(yù)防哺乳動(dòng)物與增加的Stat3活性有關(guān)的病癥的方法，包括對(duì)所述動(dòng)物給藥治療有效量的STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽。4.誘導(dǎo)細(xì)胞中凋亡和/或細(xì)胞周期停滯的方法，包括將細(xì)胞與STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽接觸。5.使細(xì)胞對(duì)凋亡誘導(dǎo)劑敏感的方法，包括將細(xì)胞與STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽接觸。6.權(quán)利要求5的方法，進(jìn)一步包括將細(xì)胞與凋亡誘導(dǎo)劑接觸。7.權(quán)利要求6的方法，其中，所述凋亡誘導(dǎo)劑是化療劑。8.權(quán)利要求6的方法，其中，所述凋亡誘導(dǎo)劑是輻射。9.治療、改善或預(yù)防動(dòng)物中響應(yīng)凋亡誘導(dǎo)的病癥的方法，包括對(duì)所述動(dòng)物給藥治療有效量的STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽。10.利要求9的方法，進(jìn)一步包括施用凋亡誘導(dǎo)劑。11.權(quán)利要求10的方法，其中，所述凋亡誘導(dǎo)劑是化療劑。12.權(quán)利要求10的方法，其中，所述凋亡誘導(dǎo)劑是輻射。13.權(quán)利要求9的方法，其中，所述響應(yīng)凋亡誘導(dǎo)的病癥是過度增殖性疾病。14.權(quán)利要求13的方法，其中，所述過度增殖性疾病是癌癥。15.權(quán)利要求14的方法，其中，所述癌癥是乳腺癌或卵巢癌。16.權(quán)利要求13的方法，其中，所述過度增殖性疾病是銀屑病。17.權(quán)利要求10的方法，其中，所述STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽在所述凋亡誘導(dǎo)劑之前施用。18.權(quán)利要求10的方法，其中，所述STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽在所述凋亡誘導(dǎo)劑之后施用。19.權(quán)利要求10的方法，其中，所述STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽與所述凋亡誘導(dǎo)劑同時(shí)施用。20.任一權(quán)利要求1-5和9的方法，其中，所述STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽選自化合物1(STA-21)、2和3組成的組。OH1OH221.包含STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽和藥學(xué)可接受的栽體的藥物組合物。22.包含STA-21或其衍生物、類似物、前藥或藥學(xué)可接受的鹽和對(duì)動(dòng)物施用所述化合物的"i兌明書的藥盒。23.權(quán)利要求22的藥盒，進(jìn)一步包含凋亡誘導(dǎo)劑。24.權(quán)利要求23的藥盒，其中，所述凋亡誘導(dǎo)劑是化療劑。25.權(quán)利要求22的藥盒，其中，所述說明書是為了將所述化合物施用給患有過度增殖性疾病的動(dòng)物。26.權(quán)利要求25的藥盒，其中，所述過度增殖性疾病是癌癥。27.權(quán)利要求26的藥盒，其中，所述癌癥是乳腺癌或卵巢癌。28.權(quán)利要求25的藥盒，其中，所述過度增殖性疾病是銀屑病。全文摘要本發(fā)明涉及作為Stat3抑制劑的小分子。本發(fā)明還涉及這些化合物在誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，和增加細(xì)胞對(duì)抗癌藥引起的細(xì)胞死亡的敏感性中的用途。文檔編號(hào)A01N35/00GK101511179SQ200680012375公開日2009年8月19日申請(qǐng)日期2006年2月24日優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日發(fā)明者H·宋,J·林,R·王,S·王申請(qǐng)人:密執(zhí)安州立大學(xué)董事會(huì)