專利名稱：大蒜莖尖培養(yǎng)結(jié)合冷處理生產(chǎn)脫毒種苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體是一種大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法。
背景技術(shù)：
大蒜是營養(yǎng)繁殖作物，在生產(chǎn)上是靠鱗莖進行無性繁殖的，體內(nèi)病毒積累逐年增加，病毒病發(fā)生嚴(yán)重。據(jù)報道，帶毒大蒜產(chǎn)量損失可達50％。同時，鱗莖變小，花莖褪綠，商品形狀受到很大影響，難以達到國際市場的消費要求。感病蒜，瓣蒜小，出苗細弱，生長較慢，葉片窄，即使多施幾次肥，一般也難以達到大瓣種蒜的生長速度；因而致使蒜頭變小，單位產(chǎn)量下降。大蒜病毒病是影響大蒜生產(chǎn)的主要病害，目前還沒有藥劑可以治理。因此，應(yīng)用組織培養(yǎng)和病毒檢測技術(shù)培育、繁育脫毒種苗用于生產(chǎn)是防治病毒病的有效途徑。由于組織培養(yǎng)獲取大蒜無病毒苗排除了化學(xué)藥劑的防治，所以對減少污染，防止公害，保護環(huán)境，增進健康也有積極的意義。
經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利申請?zhí)朇N99114259.4，名稱為一種大蒜脫毒種苗快速繁殖的方法，該專利自述為提供了一種大蒜脫毒種苗快速繁殖的方法，專用于大蒜脫毒種苗的快速繁殖。該方法取未熟蒜薹為外植體，通過對不同培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間的選擇、糖種類及濃度、激素配比的改變、新型植物激素茉莉酸及水楊酸的應(yīng)用，可同時獲得大量脫毒試管苗，繁殖基數(shù)達50-70；試管鱗莖誘導(dǎo)率達80％以上，鱗莖鮮重300mg以上。所形成的鱗莖可直接移栽田間生長，省工省力，速度快，脫毒效果好，適合工廠化育苗，可商品化生產(chǎn)。該項技術(shù)不足之處在于要培養(yǎng)出大蒜小鱗莖后才應(yīng)用于生產(chǎn)，增加了培養(yǎng)步驟，費時費工，增加了成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種大蒜莖尖培養(yǎng)結(jié)合冷處理生產(chǎn)脫毒種苗的方法，使其提高了脫毒效率，并且不用誘導(dǎo)小鱗莖，直接形成完整植株，建立一套簡單、高效、穩(wěn)定的生產(chǎn)大蒜脫毒種苗的體系，脫除病毒。本發(fā)明簡化了大蒜脫毒過程，降低了生產(chǎn)脫毒苗的成本。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，本發(fā)明包括以下步驟(1)蒜瓣冷藏處理把收獲的種蒜頭放入冰箱內(nèi)，低溫貯藏。
(2)取材滅菌將經(jīng)過冷處理的蒜瓣，加入自來水，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以打破蒜瓣的休眠，誘導(dǎo)其萌發(fā)成苗。然后用該萌發(fā)的大蒜幼苗作為外植體進行滅菌處理。
(3)莖尖培養(yǎng)在雙筒解剖鏡下剝?nèi)∏o尖，將切下的莖尖生長點接種到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培養(yǎng)基中，在25℃、光強30μmol·m2·ws-1、光照時間16hr/天的條件下培養(yǎng)，使莖尖成活并生長。
(4)繼代增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)出的大蒜健壯幼苗轉(zhuǎn)接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培養(yǎng)基上，進行繼代培養(yǎng)。
(5)試管苗生根經(jīng)過幾代增殖培養(yǎng)后，將生長健壯的試管苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基MS+IBA0.5mg/L上生根。
(6)練苗移栽試管苗生根后，要在嚴(yán)格隔離的防蟲網(wǎng)室中馴化培養(yǎng)，提高試管苗成活率。
本發(fā)明采用以莖尖培養(yǎng)結(jié)合冷處理的方法進行脫毒。大蒜組培脫毒技術(shù)的主要依據(jù)是病毒在植物體內(nèi)分布并不均勻，某些器官或組織如莖尖等不帶或少帶病毒。其一，病毒在植物體內(nèi)是通過微管系統(tǒng)傳播的，而分生組織內(nèi)部不存在微管系統(tǒng)；其二，分生組織內(nèi)源生長激素含量較高，對病毒有鈍化作用；其三，分生組織細胞分裂速度超過病毒的繁殖速度。因此，通過莖尖分生組織組培可以獲得脫毒苗，在大蒜生產(chǎn)中通過這種方式都得到了較為理想的脫毒效果。應(yīng)用這種方法，可以在實驗室生產(chǎn)大量大蒜脫毒種苗，不受季節(jié)的限制，脫毒種苗可直接應(yīng)用于生產(chǎn)，省時省力。
本發(fā)明獲得的大蒜試管苗，用電子顯微鏡鑒定，電鏡觀察不到有病毒，脫毒完全。大田生產(chǎn)試驗表明利用脫毒種苗進行生產(chǎn)，比直接蒜頭作種苗的生產(chǎn)田蒜頭產(chǎn)量高出25％-30％，蒜薹產(chǎn)量高出20％以上，并且品質(zhì)有明顯改善。
具體實施例方式
結(jié)合本發(fā)明的內(nèi)容提供以下實施例，具體實施如下1.蒜瓣冷藏處理 把收獲的種蒜頭裝在塑料袋中，放入冰箱內(nèi)，4℃低溫貯藏，處理時間為14天。
2.取材滅菌 將經(jīng)過冷處理的蒜瓣，置于托盤中，加入自來水，置于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，以打破蒜瓣的休眠，誘導(dǎo)其萌發(fā)成苗。選擇生長健壯的蒜苗切去嫩葉及大部分蒜瓣，剝?nèi)ニ庖?，用自來水沖洗2h后，在超凈臺上用70％酒精快速處理30s，用飽和漂白精液浸泡15min，然后用無菌水沖洗3遍。
3.莖尖培養(yǎng) 在超凈工作臺上，將經(jīng)過外植體消毒的蒜瓣、蒜苗切除外層鱗片，露出的基盤頂芽置于雙目解剖鏡下，由外向內(nèi)逐層剝?nèi)ビ兹~及葉原基，直至閃亮半圓球的頂端分生組織充分暴露出來，切取莖尖生長點0.2mm大小接種于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上，光照31.25μmol·m-2·s-1，14h/d，溫度25℃，培養(yǎng)30d。
4.繼代增殖培養(yǎng) 將分化的試管苗轉(zhuǎn)接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)過程中每隔30d繼代一次。
5.試管苗生根 經(jīng)過幾代增殖培養(yǎng)后，將生長健壯的試管苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基MS+IBA0.5mg/L上生根，培養(yǎng)3周。生根率可達94.44％，平均單株生根數(shù)達20條，平均根長為2.0cm。
6.練苗移栽 將生根試管苗瓶口打開，培養(yǎng)室內(nèi)放置3天后取出，洗凈其根部的培養(yǎng)基，移栽到嚴(yán)格隔離的防蟲網(wǎng)室中，在2/3珍珠巖加1/3泥炭的煉苗基質(zhì)上種植，溫度保持在25℃，相對濕度90％，適當(dāng)遮蔭，后期逐漸通風(fēng)，增加光照，常規(guī)管理。
大蒜脫毒種苗在上海嘉定大蒜生產(chǎn)基地進行試種，結(jié)果表明脫毒種苗生產(chǎn)田的蒜頭產(chǎn)量達到320公斤/畝，蒜薹產(chǎn)量達到600公斤/畝，分別比用普通蒜頭的生產(chǎn)田增產(chǎn)28％和20％。
權(quán)利要求
1.一種大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)蒜瓣冷藏處理把收獲的種蒜頭放入冰箱內(nèi)，低溫貯藏；(2)取材滅菌將經(jīng)過冷處理的蒜瓣，加入自來水，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以打破蒜瓣的休眠，誘導(dǎo)其萌發(fā)成苗，然后用該萌發(fā)的大蒜幼苗作為外植體進行滅菌處理；(3)莖尖培養(yǎng)在雙筒解剖鏡下剝?nèi)∏o尖，將切下的莖尖生長點接種到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培養(yǎng)基中，在25℃、光強30μmol·m2·ws-1、光照時間16hr/天的條件下培養(yǎng)，使莖尖成活并生長；(4)繼代增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)出的大蒜健壯幼苗轉(zhuǎn)接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培養(yǎng)基上，進行繼代培養(yǎng)；(5)試管苗生根經(jīng)過幾代增殖培養(yǎng)后，將生長健壯的試管苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基MS+IBA0.5mg/L上生根，培養(yǎng)3周；(6)練苗移栽試管苗生根后，在嚴(yán)格隔離的防蟲網(wǎng)室中馴化培養(yǎng)，提高試管苗成活率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(1)，蒜瓣冷藏處理，具體為把收獲的種蒜頭裝在塑料袋中，放入冰箱內(nèi)，4℃低溫貯藏，處理時間為14天。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(2)，取材滅菌，具體為將經(jīng)過冷處理的蒜瓣，置于托盤中，加入自來水，置于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，以打破蒜瓣的休眠，誘導(dǎo)其萌發(fā)成苗，選擇生長健壯的蒜苗切去嫩葉及大部分蒜瓣，剝?nèi)ニ庖拢米詠硭疀_洗2h后，在超凈臺上用70％酒精快速處理30s，用飽和漂白精液浸泡15min，然后用無菌水沖洗3遍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(3)，莖尖培養(yǎng)，具體為在超凈工作臺上，將經(jīng)過外植體消毒的蒜瓣、蒜苗切除外層鱗片，露出的基盤頂芽置于雙目解剖鏡下，由外向內(nèi)逐層剝?nèi)ビ兹~及葉原基，直至閃亮半圓球的頂端分生組織充分暴露出來，切取莖尖生長點0.2mm大小接種于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上，光照31.25μmol·m-2·s-1，14h/d，溫度25℃，培養(yǎng)30d。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(4)，繼代增殖培養(yǎng)，具體為將分化的試管苗轉(zhuǎn)接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)過程中每隔30d繼代一次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(5)，試管苗生根，具體為經(jīng)過幾代增殖培養(yǎng)后，將生長健壯的試管苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基MS+IBA0.5mg/L上生根，培養(yǎng)3周，生根率達94.44％，平均單株生根數(shù)達20條，平均根長為2.0cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大蒜莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒苗的方法，其特征是，所述的步驟(6)，練苗移栽，具體為將生根試管苗瓶口打開，培養(yǎng)室內(nèi)放置3天后取出，洗凈其根部的培養(yǎng)基，移栽到嚴(yán)格隔離的防蟲網(wǎng)室中，在2/3珍珠巖加1/3泥炭的煉苗基質(zhì)上種植，溫度保持在25℃，相對濕度90％，適當(dāng)遮蔭，后期逐漸通風(fēng)，增加光照，常規(guī)管理。
全文摘要
一種農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域的大蒜莖尖培養(yǎng)結(jié)合冷處理生產(chǎn)脫毒種苗的方法，步驟為(1)蒜瓣冷藏處理；(2)取材滅菌；(3)莖尖培養(yǎng)在雙筒解剖鏡下剝?nèi)∏o尖，將切下的莖尖生長點接種到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培養(yǎng)基中，在25℃、光強30μmol·m
文檔編號A01G1/00GK1775003SQ20051011150
公開日2006年5月24日 申請日期2005年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月15日
發(fā)明者蔡潤, 潘俊松, 何歡樂 申請人:上海交通大學(xué)