專利名稱：利用甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是一種農(nóng)業(yè)技術領域的方法，具體是一種利用甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法。
背景技術：
甜瓜雜種一代具有明顯的雜種優(yōu)勢，產(chǎn)量一般較親本品種增產(chǎn)20％-99％，甚至可達300％以上，而且通常還使果實的含糖量、干物質(zhì)含量和貯藏性等都得到提高。在日本的甜瓜栽培中，基本上都是雜種一代。我國甜瓜的生產(chǎn)和科研，在八十年代中期就已經(jīng)注意了這個問題，近年，主要產(chǎn)區(qū)已以雜種一代形式應用于生產(chǎn)?？傊鸸想s種一代的利用，已經(jīng)成為國際甜瓜的生產(chǎn)的新趨勢。雖然，雜交種優(yōu)勢明顯，但是雜交種生產(chǎn)麻煩，其每年的制種需要投入大量的工作和資金，要設置隔離區(qū)防止種質(zhì)混雜，又要注意親本的繁殖與維持其原有的特性。正是由于制種工作的煩瑣，不可能很快滿足市場的需求，再者，目前甜瓜的生產(chǎn)用種大多是從國外引進，導致了甜瓜種植戶付出大量的資金用于購種。為了能夠減少甜瓜種子用戶的經(jīng)濟負擔，育種工作者在培育新品種的同時努力研究雜種優(yōu)勢的固定，使之代代相傳，不至于衰退。在甜瓜上建立快速、高效、穩(wěn)定的再生系統(tǒng)，其中利用組織培養(yǎng)技術進行植物克隆，來固定雜交種優(yōu)良性狀是有效的途徑之一。甜瓜的繁殖最主要依靠的是種子繁殖，目前很少有人研究其無性繁殖方法。近幾年，也有報道采用組織培養(yǎng)的方法繁殖種苗。
經(jīng)對現(xiàn)有技術的文獻檢索發(fā)現(xiàn)，孫天國等在《北方園藝》2005(2)64-65上發(fā)表的“薄皮甜瓜子葉組織培養(yǎng)的研究”一文中報道了甜瓜子葉為外植體的培養(yǎng)方案，利用子葉直接誘導不定芽。但是這種方法仍然存在一些很難解決的問題。外植體培養(yǎng)10天左右就可看到“芽”的出現(xiàn)，再培養(yǎng)10天，外植體表面可出現(xiàn)30-50個“芽”，然而在繼代到伸長培養(yǎng)基后，這么多芽只產(chǎn)生相對很少的可伸長的芽苗，導致最終的繁殖系數(shù)很低，不能應用于生產(chǎn)實踐。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足和缺陷，提供一種利用甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，使其建立一個快速、高倍數(shù)、微芽繁殖體系，獲得原品種優(yōu)良特性的甜瓜快繁體系，以減少甜瓜生產(chǎn)用種的資金投入，降低成本，解決優(yōu)良品種的退化和混雜現(xiàn)象，且達到快速繁殖優(yōu)良種苗的目的。
本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的，本發(fā)明包括以下步驟(1)取材滅菌將甜瓜種子剝?nèi)シN殼，進行常規(guī)滅菌；(2)預培養(yǎng)用滅好菌的甜瓜種子培養(yǎng)出無菌苗；(3)啟動培養(yǎng)將無菌苗子葉剪下，在啟動培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后切去頂芽，再在原培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)；(4)不定芽誘導和伸長培養(yǎng)培養(yǎng)一段時間后，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見有芽點出現(xiàn)時將外植體轉(zhuǎn)接入伸長培養(yǎng)基；(5)繼代培養(yǎng)待叢生芽伸長到3cm時，將伸長芽利用扦插的方法(一分為二)進行繼代培養(yǎng)，繼代繁殖一次后即可進行生根培養(yǎng)；(6)生根培養(yǎng)不定芽在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)生根；(7)再生植株的馴化將生根的再生苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基并作適當修剪后，種植到馴化基質(zhì)中。
本發(fā)明用甜瓜子葉節(jié)先去掉具有頂端優(yōu)勢的頂芽，再用細胞高濃度的培養(yǎng)基誘導叢生芽，在誘導出的叢生芽長到3cm高時，即可切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，使其生根，最后馴化成健壯的再生植株。采用切去頂芽的甜瓜子葉節(jié)進行培養(yǎng)，消除了頂端優(yōu)勢的影響，使不定芽引導率更高。本發(fā)明進行甜瓜克隆苗生產(chǎn)，繁殖系數(shù)比其他繁殖方法更高，苗健壯，長勢強。移栽到大田，生長勢絲毫不差于實生苗。
具體實施例方式
結(jié)合本發(fā)明的內(nèi)容提供以下實施例，具體實施如下(1)取材滅菌將甜瓜種子剝?nèi)ず?，?0％的酒精滅菌30s，再用經(jīng)過濾的飽和漂白粉溶液滅菌15min，在超凈工作臺上用無菌水沖洗3次，并在無菌水中浸泡6h；(2)預培養(yǎng)將滅好菌的甜瓜種子接種于MS培養(yǎng)基中(其中包含蔗糖35g/L，瓊脂7g/L，pH值調(diào)整為5.8，下同)，每150ml三角瓶內(nèi)接4粒種子，培養(yǎng)溫度為25℃，光照時間為16h/d，光照強度18.75μmol·m-2·s-1；(3)啟動培養(yǎng)當無菌苗子葉展開時，切去下胚軸(子葉節(jié)處留1.5cm)，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接到MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2天后切去頂芽，再在原培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)；(4)不定芽誘導和伸長培養(yǎng)培養(yǎng)4天后，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接入MS+BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見有芽點出現(xiàn)時可將外植體轉(zhuǎn)接入伸長培養(yǎng)基MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培養(yǎng)；(5)繼代培養(yǎng)待叢生芽伸長到3cm后，將伸長芽利用扦插的方法(一分為二)進行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)基是MS+BA0.05mg/L+IAA0.02mg/L，繼代繁殖一次后即可進行生根培養(yǎng)；(6)生根培養(yǎng)不定芽轉(zhuǎn)接在MS+NAA0.2mg/L生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)14天即可生根；(7)再生植株的馴化將生根的再生苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基并作適當修剪后，選擇整齊一致的材料分別栽在珍珠巖∶草炭土為1∶1的基質(zhì)中，注意保溫保濕，3周后即可與實生苗長勢相同。
甜瓜克隆苗在上海交大農(nóng)生院農(nóng)場進行試種，結(jié)果表明甜瓜克隆苗前期長勢略遜于實生苗，栽培3周后即可跟上，并逐漸超過實生苗。甜瓜成熟比實生苗早5天左右。
權利要求
1.一種利用甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)取材滅菌將甜瓜種子剝?nèi)シN殼，進行滅菌；(2)預培養(yǎng)用滅好菌的甜瓜種子培養(yǎng)出無菌苗；(3)啟動培養(yǎng)將無菌苗子葉剪下，在啟動培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后切去頂芽，再在原培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)；(4)不定芽誘導和伸長培養(yǎng)培養(yǎng)一段時間后，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見有芽點出現(xiàn)時將外植體轉(zhuǎn)接入伸長培養(yǎng)基；(5)繼代培養(yǎng)待叢生芽伸長到3cm時，將伸長芽利用扦插的方法進行繼代培養(yǎng)，繼代繁殖一次后即進行生根培養(yǎng)；(6)生根培養(yǎng)不定芽在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)生根；(7)再生植株的馴化將生根的再生苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基并作修剪后，種植到馴化基質(zhì)中。
2.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(1)，取材滅菌，具體如下將甜瓜種子剝?nèi)ず螅?0％的酒精滅菌30s，再用經(jīng)過濾的飽和漂白粉溶液滅菌15min，在超凈工作臺上用無菌水沖洗3次，并在無菌水中浸泡6h。
3.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(2)，預培養(yǎng)，具體如下將滅好菌的甜瓜種子接種于MS培養(yǎng)基中，每150ml三角瓶內(nèi)接4粒種子，培養(yǎng)溫度為25℃，光照時間為16h/d，光照強度18.75μmol·m-2·s-1。
4.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(3)，啟動培養(yǎng)，具體如下無菌苗子葉展開時，切去下胚軸，子葉節(jié)處留1.5cm，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接到MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2天后切去頂芽，再在原培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)。
5.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(4)，不定芽誘導和伸長培養(yǎng)，具體如下培養(yǎng)4天后，將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接入MS+BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見有芽點出現(xiàn)時將外植體轉(zhuǎn)接入伸長培養(yǎng)基MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培養(yǎng)。
6.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(5)，繼代培養(yǎng)，具體如下待叢生芽伸長到3cm后，將伸長芽利用扦插的方法進行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基是MS+BA0.05mg/L+IAA0.02mg/L，繼代繁殖一次后即進行生根培養(yǎng)。
7.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(6)，生根培養(yǎng)，是指不定芽轉(zhuǎn)接在MS+NAA0.2mg/L生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)14天生根。
8.根據(jù)權利要求3-7任意一項所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的MS培養(yǎng)基，其中包含蔗糖35g/L，瓊脂7g/L，pH值為5.8。
9.根據(jù)權利要求1所述的甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步驟(7)，再生植株的馴化，具體如下將生根的再生苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基并作修剪后，選擇整齊一致的材料分別栽在珍珠巖∶草炭土為1∶1的基質(zhì)中，注意保溫保濕，3周后即與實生苗長勢相同。
全文摘要
一種農(nóng)業(yè)技術領域的利用甜瓜子葉節(jié)繁殖克隆苗的方法。步驟為(1)取材滅菌；(2)預培養(yǎng)用滅好菌的甜瓜種子培養(yǎng)出無菌苗；(3)啟動培養(yǎng)將無菌苗子葉剪下，在啟動培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后切去頂芽，再在原培養(yǎng)基上誘導培養(yǎng)；(4)不定芽誘導和伸長培養(yǎng)將子葉節(jié)轉(zhuǎn)接芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見有芽點出現(xiàn)時將外植體轉(zhuǎn)接入伸長培養(yǎng)基；(5)繼代培養(yǎng)待叢生芽伸長到3cm時，將伸長芽利用扦插的方法進行繼代培養(yǎng)；(6)生根培養(yǎng)；(7)再生植株的馴化將生根的再生苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基并作修剪后，種植到馴化基質(zhì)中。本發(fā)明進行甜瓜克隆苗生產(chǎn)，繁殖系數(shù)比其他繁殖方法更高，苗健壯，長勢強。移栽到大田，生長勢絲毫不差于實生苗。
文檔編號A01H3/00GK1775004SQ20051011150
公開日2006年5月24日 申請日期2005年12月15日 優(yōu)先權日2005年12月15日
發(fā)明者潘俊松, 蔡潤, 何歡樂 申請人:上海交通大學