專利名稱：一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法。屬于蔬菜種苗生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，專用于蓮藕種苗的脫毒快繁。
蓮藕(Nelumbo nucifera Gaertn)是我國(guó)南方地區(qū)的傳統(tǒng)特色水生蔬菜，具有很好的營(yíng)養(yǎng)保健功能，也是我國(guó)主要的出口創(chuàng)匯蔬菜。因長(zhǎng)期采用無(wú)性繁殖而使病毒積累。目前各產(chǎn)區(qū)均發(fā)生嚴(yán)重，因此而致的“僵藕”問(wèn)題造成種性嚴(yán)重退化，根狀莖(藕)變小，僵硬，品質(zhì)變劣，產(chǎn)量嚴(yán)重下降，影響了其出口創(chuàng)匯及其在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。努力改善球莖質(zhì)量和產(chǎn)量，提高繁殖系數(shù)，解決目前生產(chǎn)上“僵藕”問(wèn)題是當(dāng)務(wù)之急。目前普遍采用每年均進(jìn)行嚴(yán)格的大田選種的方法來(lái)改善或緩解上述問(wèn)題的發(fā)生，但勞動(dòng)強(qiáng)度大，技術(shù)要求高，效果不顯著，不能真正徹底解決上述實(shí)踐問(wèn)題。
目前許多無(wú)性繁殖作物都使用莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)脫毒苗，并快繁脫毒種苗應(yīng)用生產(chǎn)。但至今未見(jiàn)有蓮藕莖尖脫毒快繁的研究報(bào)道。
本發(fā)明的目的是提供一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法，提出快速獲得大量脫毒苗，試管苗健壯生長(zhǎng)，誘導(dǎo)試管苗大量生根的最佳培養(yǎng)方案，適合工廠化育苗，適于移栽田間生長(zhǎng)。
本發(fā)明所提供的一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法實(shí)施方案如下1.取蓮藕莖尖為外植體，將莖尖外包葉鞘剝除后接種在附加0.01-8.0mg/l6-BA或ZRs和0-10mg/l NAA的MS或B5培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60-80d后，取試管苗帶節(jié)部位進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
2.繼代快繁將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加0.01-6.4mg/l 6-BA，0-8.0mg/l NAA，30-100g/l糖的MS或B5培養(yǎng)基中，30-60d即可形成大量的試管苗。
3.生根培養(yǎng)將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加0.01-4.0mg/l 6-BA，1.0-20.0mg/lNAA，30-150mg/l糖的MS或B5培養(yǎng)基中，20-50d后即可形成大量根系，培養(yǎng)苗移栽田間成活率達(dá)80％以上。
上述蓮藕脫毒種苗快速繁殖方法中，pH5.6-7.2，光照強(qiáng)度1800-2500lx，光照時(shí)間10-14h/d，所用糖指蔗糖、白糖，以蔗糖為好。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)1.與目前采用的以成熟根莖(藕)作種相比，本發(fā)明利用蓮藕莖尖為外植體，建立蓮藕脫毒快繁體系，繁殖系數(shù)達(dá)8-20，可獲大量脫毒苗，且不會(huì)發(fā)生變異，脫毒苗移栽成活率達(dá)80％以上，生長(zhǎng)勢(shì)旺，可大大減少用種量，便于種苗運(yùn)輸，從而解決了現(xiàn)有技術(shù)中的蓮藕種苗繁殖系數(shù)低，用種量大、運(yùn)輸和生產(chǎn)成本高，不利于優(yōu)良品種的快速大面積推廣應(yīng)用的問(wèn)題。
2.與目前普遍采用的從生長(zhǎng)期即開(kāi)始一直到種藕采收持續(xù)進(jìn)行的長(zhǎng)時(shí)間選留種相比，本發(fā)明通過(guò)培育脫毒苗，勞動(dòng)強(qiáng)度小，持續(xù)時(shí)間短，脫毒效果好。
3.本發(fā)明所提供的蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法適用于各種藕蓮品種。
實(shí)施例11)脫毒試管苗的獲得供試品種為寶應(yīng)美人紅(Nelumbo mucifera Gaertn)。取美人紅莖尖為外植體，自來(lái)水沖洗后，用70％乙醇表面消毒1分鐘，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分種，無(wú)菌水沖洗4-5遍后，剝?nèi)ネ獍~鞘，切取莖尖后接種于三角瓶中，以MS為基本培養(yǎng)基，附加3.2mg/l 6-BA和4.0mg/l NAA培養(yǎng)70d后，可獲帶12芽的培養(yǎng)苗。
2)繼代快繁將上述試管苗切割或帶節(jié)個(gè)體接種于MS基本培養(yǎng)基中，附加2.0mg/l 6-BA，1.0mg/l NAA，80g/l蔗糖的MS培養(yǎng)基中，50d即可形成帶14芽的培養(yǎng)苗。
3)生根培養(yǎng)苗將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加1.0mg/l 6-BA，6.0mg/l NAA，50g/l蔗糖的MS培養(yǎng)基中，30d后形成大量根系，培養(yǎng)苗移栽田間成活率達(dá)88％。實(shí)施例21)脫毒試管苗的獲得供試品種為“揚(yáng)藕一號(hào)”(Nelumbo nucifera Gaertn)。取揚(yáng)藕一號(hào)莖尖為外植體，自來(lái)水沖洗后，用70％乙醇表面消毒1分種，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分種，無(wú)菌水沖洗4-5遍后，剝?nèi)ネ獍~鞘，切取莖尖后接種于三角瓶中，以B5為基本培養(yǎng)基，附加3.0mg/l ZRs和4.0mg/l NAA，培養(yǎng)80d后，可獲得帶14芽的培養(yǎng)苗。
2)繼代快繁將上述試管苗切割成帶節(jié)個(gè)體，接種于B5基本培養(yǎng)基中，附加8.0mg/l ZRs，2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖的B5培養(yǎng)基中，50d即可形成帶18芽的培養(yǎng)苗。
3)生根培養(yǎng)將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加2.0mg/l ZRs，10mg/l NAA，90g/l蔗糖的B5培養(yǎng)基中，30d后即形成大量根系，培養(yǎng)苗移栽大田成活率92％。實(shí)施例3供試蓮藕品種為寶應(yīng)大紫紅，取莖尖為外植體，按照以上方法，調(diào)整培養(yǎng)基成份后實(shí)施結(jié)果如下1)試管苗培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+3.2mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖；40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)15；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l 6-BA+8.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，30d后生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率87％。
2)試管苗培養(yǎng)基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+5.0mg/l 6-BA+3mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)14；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l 6-BA+8.0mg/l NAA80g/l白糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率90％。
3)試管苗培養(yǎng)基MS+6.0mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+6.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)16；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l 6-BA+18.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率91％。
4)試管苗培養(yǎng)基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)；生根培養(yǎng)基B5+0.02mg/l6-BA+12.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率89％。
5)試管苗培養(yǎng)基B5+7.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)13；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率92％。
6)試管苗培養(yǎng)基B5+3.2mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+6.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)15；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率93.5％。
7)試管苗培養(yǎng)基MS+6.0mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)14；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l6-BA+18.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率89％。
8)試管苗培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)數(shù)13；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l6-BA+16.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后，培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率93％。
9)試管苗培養(yǎng)基B5+7.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+5.0mg/l6-BA+30mg/l NAA，60g白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)17；生根培養(yǎng)基B5+0.02mg/l6-BA+12.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率95％。
10)試管苗培養(yǎng)基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+6.0mg/lZRs+3.0mg/l NAA，60g蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)13；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l6-BA+8.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率93％/11)試管苗培養(yǎng)基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+3.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)16；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l6-BA+8.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率90％。
12)試管苗培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)17；生根培養(yǎng)基MS+0.4mg/l 6-BA+12.0mg/l NAA，80g/l蔗糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率95％。
13)試管苗培養(yǎng)基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+6.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA，50g蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)17；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l 6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率95％。
14)試管苗培養(yǎng)基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+4.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)15；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后培養(yǎng)苗生根，培養(yǎng)苗移栽大田成活率94％。
15)試管苗培養(yǎng)基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基MS+3.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)15；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l 6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率93％。
16)試管苗培養(yǎng)基B5+3.2mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；繼代增殖培養(yǎng)基B5+6.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖，40d后統(tǒng)計(jì)繁殖系數(shù)16；生根培養(yǎng)基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后試管苗生根，試管苗移栽大田成活率94％。
權(quán)利要求
1.一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法，其實(shí)施步驟如下1.1)取蓮藕莖尖為外植體，將莖尖外包葉鞘剝除后接種在附加0.01-8.0mg/l6-BA或ZRs和0-10mg/l NAA的MS或B5培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60-80d后，取試管苗帶節(jié)部位進(jìn)行繼代培養(yǎng)。1.2)繼代快繁將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加0.01-6.4mg/l 6-BA，0-8.0mg/lNAA，30-100g/l糖的MS或B5培養(yǎng)基中，30-60d即可形成大量的試管苗。1.3)生根培養(yǎng)將上述試管苗轉(zhuǎn)接于附加0.01-4.0mg/1 6-BA，1.0-20.0mg/lNAA，30-150mg/l糖的MS或B5培養(yǎng)基中，20-50d后即可形成大量根系，培養(yǎng)苗移栽田間成活率達(dá)80％以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法，其特征在于各階段的培養(yǎng)條件為，pH5.6-7.2，光照強(qiáng)度1800-2500lx，光照時(shí)間10-14h/d。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法，其特征在于所用糖指的是蔗糖、白糖，以蔗糖為好。
全文摘要
本發(fā)明一種蓮藕脫毒種苗快速繁殖的方法,屬于蔬菜種苗生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。專用于蓮藕脫毒種苗的快速繁殖。包括:取蓮藕莖尖為外植體,接種在附加:0.01—8.0mg/l6－BA或ZRs和0—10mg/lNAA的MS或B
文檔編號(hào)A01H4/00GK1258435SQ9912063
公開(kāi)日2000年7月5日 申請(qǐng)日期1999年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月22日
發(fā)明者李良俊, 曹碚生, 何小弟, 趙有為, 丁存明, 江解增 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)