專利名稱：一種綠僵菌銀紋夜蛾亞種及其殺蟲培育使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種真菌，尤其是一種可以導(dǎo)致多種農(nóng)作物害蟲僵病死亡的綠僵菌銀紋夜蛾亞種，同時本發(fā)明還涉及其殺蟲培育使用方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)申請人了解，夜蛾科害蟲是多數(shù)農(nóng)作物、尤其是蔬菜類作物的害蟲。
長期以來，抑制和消滅害蟲一直是人類爭取農(nóng)業(yè)增收的主要措施。近年來，害蟲的生物防治研究取得了明顯進(jìn)展。根據(jù)2005年4月中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社發(fā)行的《邁入二十一世紀(jì)的中國生物防治》一書中介紹，目前我國推廣的真菌生物農(nóng)藥主要是白僵菌及綠僵菌系列產(chǎn)品，如防治蠐螬的白僵菌及蝗蟲綠僵菌等。
這些真菌殺蟲制劑雖有一定的殺蟲效果，但殺蟲范圍較窄。尤其是對蔬菜危害較重的夜蛾科害蟲防效較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對目前蔬菜生產(chǎn)中危害性較大、抗藥性較強(qiáng)、一般藥劑防效較差的鱗翅目夜蛾科害蟲，給出一種可以高效殺滅多種農(nóng)作物害蟲，并且使用安全，對動植物無毒害作用，不污染環(huán)境的綠僵菌銀紋夜蛾亞種，同時給出其殺蟲培育使用方法。
本發(fā)明的金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種于2004年12月5日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)的保藏，保藏編號為CCTCCNOM204078拉丁學(xué)名為Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8(下文簡稱MaGXW26-8)。
其個體形態(tài)特征為菌落(PDA培養(yǎng)基)3.5μm，絨毛狀，表面顏色為白色→橄欖綠色，無分泌色素，氣生菌絲豐茂，有分隔，無核，無足細(xì)胞，氣生菌絲有分枝，分生胞子梗單生，瓶梗柱狀單生，菌絲末端產(chǎn)生分生胞子，外生胞子長串鏈狀，橢圓形，大小3-4μm×5-8μm，表面光滑，連狀形式，無分散與對稱。
生理生化特性為能利用多種碳水化合物，包括a-D葡萄糖、D-果糖、吐溫80、阿東糖醇、D-阿拉伯糖、D-阿拉伯醇、半乳糖、m-肌醇、D-乳糖、麥芽糖、麥芽三糖、蜜二糖，能利用少量的D-纖維二糖和甘油，不能利用D-半乳糖醛酸、琥珀酸、癸二酸、L-鼠李糖和D-棉子糖。
GXW26-8 18S RNA sequence(序列)為CCGATAGTCCCTCTAAGAAGCCCGCGTACTGCCATAGCAATACTGACTATTTAGCAGGTTAAGGTCTCGTTCGTTATCGCAATTAAGCAGACAAATCACTCCACCAACGAAGAACGGCCATGCACCACCACCCACAAAATCAAGAAAGAGCTCTCAATCTGTCAATCCTCATTGTGTCTGGACCTGGTGAGTTTCCCCGTGTTGAGTCAAATTAAGCCGCAGGCTCCACCCCTGGTGGTGCCCTTCCGTCAATTTCTTTAAGTTTCAGCCTTGCGACCATACTCCCCCTGGAGCCCAAGCACTTTGATTTCTCGTAAGGTGCCGAACGAGTCAACTAAATAACATCGTCCGATCCCTAGTCGGCATAGTTTATGGTTAATACTACGACGGTATCTGATCGTCTTCGATCCCCTAACTTTCGTTCCTGATTAATGAAAACATCCTTGGCAAATGCTTTCGCAGTAGTTAGTCTTCAGTAGATCCAAGAATTTCACCTCTGACAACTGAATACTGATGCCCCCGACTGTCCCTATTCATCATTACGGCGGTCCTGG
AAACA本發(fā)明MaGXW26-8培育使用方法可采取三級培養(yǎng)法，步驟如下A.將分離、篩選、純化的MaGXW26-8菌株用試管或菌種瓶進(jìn)行斜面培養(yǎng)，溫度27-28℃，光照3000Lx，時間120-130小時，PH值6.8-6.9；B.挑選斜面上生活率高的優(yōu)良菌株，接種到液體培養(yǎng)罐內(nèi)，進(jìn)行液體培養(yǎng)；C.再將液體菌種罐內(nèi)的菌種按固體發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)料的5-15％加入到發(fā)酵罐內(nèi)，在27-28℃環(huán)境下進(jìn)行120-130小時的培養(yǎng)，當(dāng)料面長出豐茂的菌絲和孢子，由白轉(zhuǎn)綠色時，進(jìn)行恒溫干燥處理，使含水量低于5％。
D.粉碎、包裝，粉劑細(xì)度小于60目，每克基質(zhì)中的孢子含量達(dá)1.5×1010。
E.使用時將菌劑稀釋后灑到害蟲取食生活的環(huán)境中。稀釋倍數(shù)以(0.5-1)×107為宜。
觀察發(fā)現(xiàn)，接觸菌劑的害蟲12-24小時取食漸減，36-42小時蟲體軟而放松，達(dá)最長，藥后44-50小時蟲體背面出現(xiàn)大小不等的黑斑，頭部上仰，并漸停止運(yùn)動，56-60小時，蟲體趨向僵化并死亡。分析證明MaGXW26-8菌劑害蟲接觸和服食后，孢子萌發(fā)，分泌溶解酶，菌絲穿越體壁，并很快發(fā)育，充滿體腔，同時被害蟲服食的MaGXW26-8菌劑在體內(nèi)產(chǎn)生一種橢圓形狀的孢子，分泌粘稠狀黃白色的毒素(如蛋白質(zhì)酶、幾丁質(zhì)酶、脂酶等)阻止和破壞害蟲的生理生化及代謝過程，從而導(dǎo)致和加速害蟲的死亡。因此具有獨(dú)特的殺蟲機(jī)理和效果。對動植物和生態(tài)環(huán)境無任何影響，所以可作為新一代綠色生物殺蟲劑來開發(fā)。
有關(guān)專家認(rèn)為金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種，是綠僵菌中唯一的夜蛾科害蟲的病原真菌，根據(jù)Sovokin1883年建立的綠僵菌屬后依據(jù)形態(tài)學(xué)，先后認(rèn)定和發(fā)表了12個種或變種(而金龜子綠僵菌被TuHoeh分為2個變種即大孢和小孢變種，只能表明對金龜子有病原性)，而金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種是2004年4月從銀紋夜蛾高齡細(xì)蟲尸體上分離出來的，為首次發(fā)現(xiàn)的菌株。試驗對多種夜蛾類科害蟲及同翅目害蟲有效的病原物，并經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化、RNA序列測定，鑒定命名為金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種。再加之MaGXW26-8菌株的個體特征、致病特點(diǎn)、生理生化反應(yīng)特性以及對鱗翅目夜蛾科害蟲有別現(xiàn)有的生物致病效果和獨(dú)特之處，值得進(jìn)行加快開發(fā)推廣應(yīng)用。
具體實施例方式
實施例本實施例的金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種提取于2004年12月5日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)的保藏，保藏編號為CCTCCNOM204078拉丁學(xué)名為Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8相同的菌種，經(jīng)下列步驟培育并用于殺滅鱗翅目夜蛾科及其它害蟲。
A.將分離、篩選、純化的MaGXW26-8菌株用試管或菌種瓶進(jìn)行斜面培養(yǎng)，溫度27-28℃，光照3000Lx，時間120-130小時PH值6.8-6.9。
B.挑選斜面上生活率高的優(yōu)良菌株，接種到液體培養(yǎng)罐內(nèi)，進(jìn)行液體培養(yǎng)，時間控制在48小時±2小時為宜。
C.再將液體菌種罐內(nèi)的菌種按固體發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)料的10％加入到發(fā)酵罐內(nèi)，在27-28℃環(huán)境下進(jìn)行120-130小時的培養(yǎng)，當(dāng)料面長出豐茂的孢子，由白轉(zhuǎn)綠色時，進(jìn)行恒溫干燥處理，溫度控制在35℃±3℃±為宜，使含水量低于5％。
D.粉碎、包裝，粉劑細(xì)度小于60目，每克基質(zhì)中的孢子含量達(dá)1.5×1010。
E.使用時將保存的菌劑稀釋(0.5-1)×107后灑到害蟲取食生活的環(huán)境中。
金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種的殺蟲試驗效果如下對鱗翅目夜蛾科和螟蛾科2-5齡幼蟲致病死亡率藥后時間(t)銀紋夜蛾斜紋夜蛾大豆卷葉螟24 - - -72 85％75％87％120100％ 100％ 100％注試驗時溫度為27-28□，相對濕度80-85％，光照強(qiáng)度3000-3500Lx。
2004年10月2日-10月9日，為了解MaGXW26-8對天敵類和數(shù)量影響，在包菜田噴灑濃度為1×108孢子/ml，調(diào)查面積為1平方尺。結(jié)果見后面附表。
由附表可見MaGXW26-8對天敵無不良影響。
試驗表明，MaGXW26-8對害蟲和殺滅效果十分理想，對其它動植物無任何影響。由此證明MaGXW26-8能夠作為新一代綠色農(nóng)藥——生物殺蟲劑開發(fā)。
附表

權(quán)利要求
1.金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種，于2004年12月5日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號為CCTCCNOM204078，拉丁學(xué)名為Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述綠僵菌銀紋夜蛾亞種的殺蟲培育使用方法，其步驟為A.將分離、篩選、純化的MaGXW26-8菌株用試管或菌種瓶進(jìn)行斜面培養(yǎng)，溫度27-28℃，光照3000Lx，時間120-130小時，PH值6.8-6.9；B.挑選斜面上生活率高的優(yōu)良菌株，接種到液體培養(yǎng)罐內(nèi)，進(jìn)行液體培養(yǎng)；C.再將液體菌種罐內(nèi)的菌種按固體發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)料的5-15％加入到發(fā)酵罐內(nèi)，在27-28℃環(huán)境下進(jìn)行120-130小時的培養(yǎng)，當(dāng)料面長出豐茂的菌絲和孢子，由白轉(zhuǎn)綠色時，進(jìn)行恒溫干燥處理，使含水量低于5％；D.粉碎、包裝，粉劑細(xì)度小于60目，每克基質(zhì)中的孢子含量達(dá)1.5×1010；E.將菌劑稀釋后灑到害蟲取食生活的環(huán)境中。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述綠僵菌銀紋夜蛾亞種的殺蟲培育使用方法，其特征在于所述步驟B中的液體培養(yǎng)時間為48小時±2小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述綠僵菌銀紋夜蛾亞種的殺蟲培育使用方法，其特征在于所述步驟C進(jìn)行恒溫干燥處理的溫度為35℃±3℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述綠僵菌銀紋夜蛾亞種的殺蟲培育使用方法，其特征在于所述步驟E中的稀釋倍數(shù)為(0.5-1)×107。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述綠僵菌銀紋夜蛾亞種作為生物殺蟲劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可以導(dǎo)致多種農(nóng)作物害蟲僵病死亡的綠僵菌銀紋夜蛾亞種，同時本發(fā)明還涉及其殺蟲培育使用方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的金龜子綠僵菌銀紋夜蛾亞種于2004年12月5日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號為CCTCC NO.M204078，拉丁學(xué)名為Metarhizium anisopliae var.argyrogramma agnata GXW26－8。試驗表明，本發(fā)明對害蟲及其殺滅效果十分理想，對其它動植物無任何影響。由此證明MaGXW26－8能夠作為新一代綠色農(nóng)藥——生物殺蟲劑開發(fā)。
文檔編號A01N63/04GK1840652SQ200510094629
公開日2006年10月4日 申請日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者高小文 申請人:高小文