專利名稱：培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝的制作方法
本生產(chǎn)工藝屬于一種生物制藥方法，它是以牛膽汁或以一定比例的牛、豬混合膽汁作原料，在特制的培養(yǎng)器里模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養(yǎng)出天然牛黃。
牛黃就是牛的膽囊結石，是一種名貴中藥材，自古就開始入藥，但由于天然牛黃產(chǎn)量極少，所以自古至今從來沒有滿足過醫(yī)療的需要，為此，從50年代起，國內(nèi)一些研究單位和制藥廠通過分析天然牛黃的各種成分及藥理作用，研制成功了人工牛黃，并投入了生產(chǎn)。人工牛黃在鎮(zhèn)靜、抗驚厥、解熱等方面，經(jīng)藥理和臨床證實與天然牛黃具有相同的作用，但在心、腦血管性疾病、健康長壽以及在治療癌癥的科學研究中天然牛黃已顯示出它的特色。為了獲得更多的天然牛黃，國內(nèi)從70年代后期又開始了牛體內(nèi)培植牛黃的研究，一直到今天已有了突破性進展，但從目前搞的較好的一份報告(即山西省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所武駿秀等同志搞的牛體內(nèi)培植天然牛黃)，最高產(chǎn)量17.6克，最低4克，平均8.6克，時間一年(中藥材科技1983年6月第15頁)一頭牛一年產(chǎn)黃8.6克，價值688元(按每克80元計算)，而一頭牛一年的草料費就價值600-800元，所以經(jīng)濟效益不顯著。在這種情況下我們發(fā)明了體外培養(yǎng)天然牛黃的方法，經(jīng)中國醫(yī)學科學院情報研究所進行國內(nèi)文獻檢索和專家訪問，截止88年5月29日沒有發(fā)現(xiàn)這方面的報道和研究單位，經(jīng)中國科技情報研究所進行國際聯(lián)機檢索，檢索了六個數(shù)據(jù)庫(九個文檔)未見與本發(fā)明有關的國外文獻資料。
生產(chǎn)工藝大腸桿菌的分離、鑒別與誘變→菌種→接種種子培養(yǎng)基→接種膽汁→離心沉降→干燥→成品。
一、菌種的分離、誘變1、大腸桿菌分離來源(1)從牛、豬、雞膽汁中直接分離大腸桿菌。
(2)從牛、豬、雞、人糞便中分離大腸桿菌。
2、誘變鑒別培養(yǎng)基(1)配方a、3DM蛋白胨2克NaCl0.35克瓊脂2克乳糖1克1%中性紅水溶液0.5毫升蒸餾水70毫升膽汁30毫升b、5DMc、6DM在3DM配方基礎上將膽汁含量分別改為50%和60%。
(2)配制方法a、將蛋白胨、NaCl、瓊脂加入70毫升水中加熱溶解。
b、然后加入乳糖、膽汁。
c、紗布過濾。
d、調(diào)PH值7.4-7.6。
e、加1%中性紅水溶液0.5毫升。
f、10磅20分鐘高壓滅菌。
g、冷至50℃傾注成平板。
3、菌種保藏培養(yǎng)基即在6DM基礎上除去中性紅。
4、分離誘變方法膽汁(牛、豬、雞) (4000轉(zhuǎn)/分)/(離心) 沉淀物或糞便(牛、豬、雞、人) (接種)/() 3DM (37℃24小時)/(選紅色菌落) 5DM (37℃24小時)/(同時作細菌學鑒定) 6DM→菌種斜面保存。
二、接種種子培養(yǎng)基1、配方蛋白胨1.2克NaCl0.35克牛肉膏0.4克乳糖0.3克蒸餾水70毫升膽汁30毫升2、配制方法(1)將蛋白胨、NaCl、牛肉膏加入70ml水中加熱溶解(2)加乳糖、膽汁
(3)紗布過濾(4)調(diào)PH值7.4-7.6(5)10磅20分鐘高壓滅菌3、接種方法從菌種斜面或6DM構取大腸桿菌菌落，接種種子培養(yǎng)基，37℃24小時即可作種子使用。
三、接種膽汁1、膽汁來源(1)活體牛引流膽汁(2)屠宰后的新鮮牛膽汁(3)60%以上牛膽汁與豬膽汁混合(4)羊膽汁亦可2、膽汁質(zhì)量要求(1)取膽汁要無菌操作(2)新鮮無變質(zhì)3、牛黃培養(yǎng)罐的材料要求培養(yǎng)罐內(nèi)壁可用玻璃、陶瓷、乳膠等材料構成。在實驗室里可用500或1000毫升的三角瓶代替。
4、添加成份為乳糖、蔗糖、麥芽糖、牛肉膏、CaCl2、MgSO4，其比例隨膽汁質(zhì)量而變，以下為常用比例。
乳糖0.1%牛肉膏0.05%蔗糖 0.05% CaCl20.005%麥芽糖 0.05% MgSO40.003%5、培養(yǎng)溫度在15-42℃均能長出牛黃，以34-39℃為最佳。
6、在一個大氣壓下培養(yǎng)。
7、培養(yǎng)時間接種24小時至26天內(nèi)均有牛黃產(chǎn)生，以4-13天為佳。
8、PH值控制在6.3-8.0之間。
四、離心沉降一般培養(yǎng)4-16天，當培養(yǎng)罐底牛黃沉淀達一定量后，用離心機離心沉降(4000轉(zhuǎn)/分)。
五、干燥將離心沉降物置于普通干燥箱60℃以下干烤至干(真空干燥更好)，然后研磨成粉末，并除去大的雜質(zhì)顆粒即得牛黃成品。
用本生產(chǎn)工藝生產(chǎn)出來的產(chǎn)品為橙黃色或棕黃色疏松粉末，味先苦后甜，按中藥鑒定學(任仁安主編)1986年版顯微鑒別于天然牛黃組織特征相同，按中國藥典(1985年版)與天然牛黃對照檢驗，掛甲試驗，糠醛-硫酸反應;氯仿-硫酸-過氧化氫反應均與天然牛黃一致。薄層層析，與膽酸、去氧膽酸、膽紅素對照品的相應位置上顯相同顏色的斑點，與天然牛黃一致。
本發(fā)明的目的就是為了生產(chǎn)更多的天然牛黃，以滿足醫(yī)療和科研的需要，同時也是脫貧致富的一條門路，用一頭牛通過膽囊或總膽管與十二指腸體外接橋手術取膽汁，平均每頭每天可取膽汁700毫升，可連續(xù)取100天(3個月以上)，每1000毫升膽汁可產(chǎn)牛黃1克(平均值)，目前我們的最高產(chǎn)量已達到1000毫升膽汁產(chǎn)3.85克牛黃(質(zhì)量合格)，這樣一頭牛一次手術應用3個月可產(chǎn)牛黃70克，3個月后將此牛賣掉再換新牛，一年可輪換三頭牛，即同樣消耗一頭牛一年的草料，用體外培養(yǎng)可得到210克牛黃，而牛體內(nèi)培植一年僅得8.6克，其年經(jīng)濟效益是牛體內(nèi)培植牛黃的24.4倍?；铙w引流膽汁連續(xù)使用3個月，對牛健康沒有明顯的影響，吃喝正常，體重有增有減，與飼養(yǎng)管理相關，膽汁的質(zhì)量與飼養(yǎng)管理也相關，使用后的牛賣價與買價基本相同。
實施例菌種 (接種)/() 100毫升種子培基(三角瓶) (37℃)/(24小時) 接種1000毫升牛膽汁(乳糖1克;蔗糖0.5克;麥芽糖0.5克;牛肉膏0.5克;CaCl20.05克;MgSO40.03克) (37℃)/(6天) 離心沉降并放于白的確良布上，放在普通干燥箱里55℃干燥至干，研磨成粉末即可。
權利要求
1.一種培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征是在牛體外用牛、豬、羊膽汁模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養(yǎng)生產(chǎn)出天然牛黃。
2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于用大腸桿菌接種于膽汁進行培養(yǎng)而生產(chǎn)天然牛黃。
3.根據(jù)權利要求2所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于所用的膽汁中添加了乳糖、蔗糖、麥芽糖、牛肉膏、CaCl2、MgSO4。
4.根據(jù)權利要求3所述的培養(yǎng)的生產(chǎn)工藝，其特征在于膽汁中添加的物質(zhì)重量比分別是乳糖0.1%、蔗糖0.05%、麥芽糖0.05%、牛肉膏0.05%、CaCl20.005%、MgSO40.003%。
5.根據(jù)權利要求1、2、3、4所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于完成牛黃培養(yǎng)后采取離心沉降，提取天然牛黃。
6.根據(jù)權利要求1、2、3、4所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于培養(yǎng)溫度在15-42℃。
7.根據(jù)權利要求1、2、3、4所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征是培養(yǎng)時氣壓為一個大氣壓。
8.根據(jù)權利要求1、2、3、4所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于膽汁的PH值為6.3-8.0。
9.根據(jù)權利要求1、2、3、4所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于大腸桿菌菌種的培養(yǎng)基中含有乳糖和膽汁。
10.根據(jù)權利要求9所述的培養(yǎng)天然牛黃的生產(chǎn)工藝，其特征在于大腸桿菌的菌種培養(yǎng)基配方為蛋白胨 1.2克 NaCl 0.35克牛肉膏 0.4克 乳糖 0.3克蒸餾水 70毫升 膽汁 30毫升
全文摘要
本發(fā)明是在體外培養(yǎng)天然牛黃，它是以牛膽汁或一定比例的牛、豬混合膽汁為原料，在一個特制的培養(yǎng)器里模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養(yǎng)出天然牛黃，其產(chǎn)品符合中國藥典(85年版)的規(guī)定，其性狀、成分和藥理作用等均與天然牛黃類同。用牛活體取膽汁來體外培養(yǎng)天然牛黃，其年經(jīng)濟效益是牛體內(nèi)培植天然牛黃的24.4倍。
文檔編號A61K35/413GK1041105SQ88106429
公開日1990年4月11日 申請日期1988年9月12日 優(yōu)先權日1988年9月12日
發(fā)明者郝滿良, 王志君, 周世貞, 陳富海, 李鐵栓 申請人:河北農(nóng)業(yè)大學