一種片段縮合制備曲普瑞林的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種片段縮合制備曲普瑞林的方法，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列；液相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列并脫除其氨基端保護(hù)基；液相中，脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與第一肽片段序列縮合，得到全保護(hù)的曲普瑞林；脫去全保護(hù)的曲普瑞林的側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗肽，高效液相純化換鹽得到醋酸曲普瑞林；其中，所述的第一肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1～7位氨基酸，所述的第二肽片段序列為曲普瑞林序列中的第8～10位氨基酸。本發(fā)明利用固液相結(jié)合片段縮合的方法制備曲普瑞林，提高了產(chǎn)率和純度，成本低，利于大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種片段縮合制備曲普瑞林的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及一種片段縮合制備曲普瑞林的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 曲普瑞林，英文名：Triptorelin，商品名：達(dá)菲林、達(dá)必佳，肽序列為：H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pr〇-Gly-NH2，分子式：C64H82N18013，分子量：1310. 63。
[0003] 曲普瑞林作為一種促性腺激素釋放激素類似物，主要作用于垂體前葉，臨床用于 治療相關(guān)性激素病癥，包括晚期前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、體外受精、中樞性性早 熟癥等。
[0004]目前曲普瑞林的制備方法主要以逐個(gè)縮合為主。例如專利US4010125使用 Benzhydrylamine樹(shù)脂為起始原料，以Boc保護(hù)的氨基酸為單體，專利CN200710044419. 7 和CN201310013712.2 以及CN201310014882.2,均以RinkAmideMBHA樹(shù)脂或者RinkAmide AM樹(shù)脂為起始原料，以Fmoc保護(hù)的氨基酸為單體，依次逐個(gè)接上氨基酸，裂解獲得曲普瑞 林粗品，最后HPLC進(jìn)行分尚純化，獲得目標(biāo)廣物。
[0005] 以上方法有如下一些問(wèn)題：a)曲普瑞林序列中存在Arg-Pro,在常規(guī)條件下用固 相方法縮合需要過(guò)量氨基酸，且縮合效率低，容易出現(xiàn)缺陷肽。這是由于氨基酸自身結(jié)構(gòu)導(dǎo) 致的立體位阻使得縮合反應(yīng)極為困難。b)使用Rink樹(shù)脂羧基端氨基酸取代值不能太高，合 成不經(jīng)濟(jì)；并且相對(duì)于2-氯-三苯甲基氯樹(shù)脂價(jià)格不菲。c)全液相合成時(shí)，需要良好的后 處理技術(shù)。
[0006] 所以本領(lǐng)域技術(shù)人員仍然期待以高收率、低成本獲得具有良好品質(zhì)的產(chǎn)品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有制備方法收率低，而且產(chǎn)品純化困難，不易得到高純度的曲普瑞 林的問(wèn)題，提供一種固液相結(jié)合片段縮合的方法制備曲普瑞林，提高產(chǎn)率和純度；由于采用 2_氯-三苯甲基氯樹(shù)脂使得成本降低，利于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0008] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0009]方案一：
[0010] 一種片段縮合制備曲普瑞林的方法，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序 列；液相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列并脫除其氨基端保護(hù)基；液相中，脫除 了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與第一肽片段序列縮合，得到全保護(hù)的曲普瑞 林；脫去全保護(hù)的曲普瑞林的側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗肽，高效液相純化換鹽得到醋酸 曲普瑞林；
[0011] 其中，
[0012] 所述的第一肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1?7位氨基酸，
[0013] 所述的第二肽片段序列為曲普瑞林序列中的第8?10位氨基酸。
[0014] 上述片段縮合制備曲普瑞林的方法優(yōu)選包括以下步驟：
[0015] (1)固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列樹(shù)脂，
[0016] 所述的全保護(hù)第一肽片段序列為：
[0017] Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D~Trp(Boc)-Leu-〇H,
[0018] 將全保護(hù)第一肽片段序列從固相載體上裂解；
[0019] ⑵液相合成曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列，
[0020] 所述的全保護(hù)的第二肽片段序列為：
[0021] Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-NH2 ；
[0022] 脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基；
[0023] (3)液相中將步驟⑵得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與 步驟（1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林；
[0024] (4)將全保護(hù)曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品；
[0025] (5)曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
[0026] 步驟⑴中，全保護(hù)的第一肽片段序列樹(shù)脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲 得；其中，所用的固相載體為酸敏感樹(shù)脂，優(yōu)選為2-氯-三苯甲基氯樹(shù)脂。
[0027] 固相制備曲普瑞林全保護(hù)第一肽片段序列樹(shù)脂的過(guò)程中，所使用的氨基脫保護(hù)試 劑為體積百分含量為20 %的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1 %的DBU的DMF溶液； 優(yōu)選體積百分含量為20 %哌啶的DMF溶液。
[0028] 所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者DIC與HOBt按 摩爾比1:1的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合。優(yōu)選HBTU與HOBt 與DIEA按摩爾比1:1:2的組合；待偶聯(lián)的氨基酸與HOBt的摩爾比是1:1。
[0029] 使用的裂解劑為體積百分含量為0. 5?1 %的TFA的DCM溶液、體積百分含量為 20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1:2:7的混合物。優(yōu)選體積百 分含量為〇. 5?1 %TFA的DCM溶液。
[0030] 步驟（2)中，液相合成全保護(hù)的第二肽片段序列的方法是，首先Fmoc-Pro-OH與 H_Gly_NH2反應(yīng)得到Fmoc-Pr〇-Gly-NH2,脫去Fmoc保護(hù)后與Fmoc-Arg(Pbf)-〇H反應(yīng)得到 Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly_NH2。
[0031] 所述脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基也就是脫去 Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly_NH2 的Fmoc保護(hù)，得到H_Arg(Pbf)-Pr〇-Gly_NH2。
[0032] 氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量16 %的哌啶的DMF溶液，或者體積百分含量為 1 %的DBU的DMF溶液，或者體積百分含量為50 %的二乙胺的DCM溶液；優(yōu)選體積百分含量 為50 %二乙胺的DCM溶液?？s合反應(yīng)使用的縮合劑為HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2 的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者DIC與HOBt按摩爾比1:1 的組合、或者EDC與HOBt按摩爾比1:1的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2 的組合，優(yōu)選DIC與HOBt按摩爾比1:1的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為T(mén)HF、DMF、DCM、NMP和 DMS0中的任意一種或幾種的組合，優(yōu)選THF。
[0033] 步驟（3)中，將步驟⑵得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列 與步驟（1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林過(guò)程中，使用的縮合 劑為HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA按摩爾比 1:1:2的組合、或者EDC與HOBt按摩爾比1:1的組合、或者DIC與HOBt按摩爾比1:1的組 合、或者PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合，優(yōu)選HBTU與HOBt與DIEA按摩爾 比1:1:2的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為T(mén)HF、DMF、DCM、NMP和DMS0中的任意一種或幾種的組 合，優(yōu)選DMF。
[0034] 步驟⑷中，全保護(hù)曲普瑞林裂解使用的裂解液為T(mén)FA與H20按體積比95:5的混 合溶液、或者TFA與EDT與TIS與PhOH與H20按體積比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA與EDT與TIS與H20按體積比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。優(yōu)選TFA與EDT與TIS與 H20按體積比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。
[0035] 步驟（5)中，純化為反相高效液相色譜純化換鹽，即色譜柱為C18柱；流動(dòng)相為 0. 25%v/v醋酸水溶液和80%v/v乙腈水溶液。
[0036]方案二：
[0037] -種片段縮合制備曲普瑞林的方法，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序 列樹(shù)脂，然后將全保護(hù)的第三肽片段序列從樹(shù)脂上裂解下來(lái)，液相中與H-Gly_NH2縮合得到 全保護(hù)的曲普瑞林，然后脫去側(cè)鏈保護(hù)得到曲普瑞林粗品，純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林；
[0038] 其中，所述的第三肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1-9位氨基酸。
[0039] 上述片段縮合制備曲普瑞林的方法，優(yōu)選包括以下步驟：
[0040] (a)固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂，
[0041] 所述的曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列為：
[0042] Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D~Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-〇 H,
[0043] 將全保護(hù)的第三肽片段序列從固相載體上裂解；
[0044] (b)液相中全保護(hù)第三肽片段序列與H-Gly_NH2縮合得到全保護(hù)的曲普瑞林；
[0045] (c)將全保護(hù)的曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品；
[0046] (d)曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
[0047] 步驟（a)中，曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固 相載體上獲得肽樹(shù)脂；其中，所用的固相載體為酸敏感樹(shù)脂，優(yōu)選為2-氯-三苯甲基氯樹(shù) 脂。
[0048] 固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂的過(guò)程中，所使用的氨基脫保 護(hù)試劑為體積百分含量為20%的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1 %的DBU的DMF溶液；優(yōu)選體積百分含量為20 %哌啶的DMF溶液。
[0049] 所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者DIC與HOBt按 摩爾比1:1的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合。優(yōu)選HBTU與HOBt 與DIEA按摩爾比1:1:2的組合；待偶聯(lián)的氨基酸與HOBt的摩爾比是1:1。
[0050] 使用的裂解劑為體積百分含量為0. 5?1 %的TFA的DCM溶液、體積百分含量為 20 %的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1:2:7的混合物。優(yōu)選體積百 分含量為〇. 5?1 %TFA的DCM溶液。
[0051] 步驟（b)中曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列與H-Gly_NH2縮合的縮合劑為 HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA按摩爾比1:1:2的 組合、或者DIC與HOBt按摩爾比1:1的組合、或者EDC與HOBt按摩爾比1:1的組合、或者 PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合，優(yōu)選HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2 的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為T(mén)HF、DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一種或幾種的組合，優(yōu)選DMF。待偶聯(lián)的羧基端與HOBt的摩爾比是1:1。
[0052] 步驟（c)中，全保護(hù)曲普瑞林裂解使用的裂解液為T(mén)FA與H20按體積比95:5的混 合溶液、或者TFA與EDT與TIS與PhOH與H20按體積比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA 與EDT與TIS與H20按體積比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。優(yōu)選TFA與EDT與TIS與 H20按體積比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。
[0053] 步驟（d)中，純化為反相高效液相色譜純化換鹽，即色譜柱為C18柱；流動(dòng)相為醋 酸水溶液和乙腈水溶液。
[0054] 有益效果：本發(fā)明相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0055] 1、本發(fā)明利用較高荷載量的酸敏感樹(shù)脂為起始原料，先采用標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成技 術(shù)合成選定結(jié)構(gòu)的高純度肽片段，液相合成困難序列，再采用液相偶聯(lián)技術(shù)使肽片段縮合， 從而獲得高純度（>98. 5% )、高收率（>40% )的目標(biāo)肽。
[0056] 2、在合成存在"困難序列"的多肽時(shí)，往往采用片段縮合法。相比較連續(xù)固相與全 液相合成曲普瑞林的工藝，本發(fā)明：
[0057] a. 2-氯-三苯甲基氯樹(shù)脂重復(fù)使用方法簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉；每個(gè)片段可使用高荷載 量（>0. 8mmol/g樹(shù)脂）的固相載體，物料通量增加；
[0058] b.避開(kāi)困難序列的肽片段合成中氨基酸及試劑投量為1. 5-2倍量，遠(yuǎn)低于固相肽 合成常規(guī)的3-4倍甚至5倍、6倍過(guò)量，節(jié)約物料成本；
[0059] c.相比較全液相合成，固液相結(jié)合片段縮合技術(shù)取二者之優(yōu)點(diǎn)，兼有固相合成工 藝簡(jiǎn)便和液相合成的低物料投入。
[0060] 3、采用超酸敏感型樹(shù)脂合成的較短氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)肽片段序列純度非常高，不 必用色譜技術(shù)純化，只需要進(jìn)行沉淀、研磨即可使用；片段液相偶合，其雜質(zhì)主要為未偶合 的片段，而不是缺少一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸的缺陷肽，在最終高效液相色譜純化中容易得多，從 而減少制備次數(shù)，降低了曲普瑞林的制備成本，有利于實(shí)現(xiàn)規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0061] 圖1為本發(fā)明制備的曲普瑞林純肽分析色譜圖；
[0062] 圖2為本發(fā)明制備的曲普瑞林純肽質(zhì)譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0063] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本 發(fā)明。
[0064] 本發(fā)明中，合成曲普瑞林所涉及的目的肽及中間體的肽片段氨基酸序列見(jiàn)表1。本 發(fā)明中肽片段組合方式見(jiàn)表2。所使用的物料縮寫(xiě)的含義見(jiàn)表3。
[0065] 表1曲普瑞林相應(yīng)的編碼氨基酸序列
[0066]

【權(quán)利要求】
1. 一種片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第 一肽片段序列；液相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列并脫除其氨基端保護(hù)基；液 相中，脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與第一肽片段序列縮合，得到全保 護(hù)的曲普瑞林；脫去全保護(hù)的曲普瑞林的側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗肽，高效液相純化換 鹽得到醋酸曲普瑞林； 其中， 所述的第一肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1?7位氨基酸， 所述的第二肽片段序列為曲普瑞林序列中的第8?10位氨基酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，它包括以下步 驟： (1) 固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列樹(shù)脂， 所述的全保護(hù)第一肽片段序列為： Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-〇H, 將全保護(hù)第一肽片段序列從固相載體上裂解； (2) 液相合成曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列， 所述的全保護(hù)的第二肽片段序列為： Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-NH2 ； 脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基； (3) 液相中將步驟（2)得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與步驟 (1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林； (4) 將全保護(hù)曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品； (5) 曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（1)中，全 保護(hù)的第一肽片段序列樹(shù)脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲得；其中，所用的固相載 體為酸敏感樹(shù)脂； 固相制備曲普瑞林全保護(hù)第一肽片段序列樹(shù)脂的過(guò)程中，所使用的氨基脫保護(hù)試劑為 體積百分含量為20%的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1 %的DBU的DMF溶液； 所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者PyBOP與 HOBt與DIEA的組合； 使用的裂解劑為體積百分含量為〇. 5?1%的TFA的DCM溶液、體積百分含量為20% 的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1:2:7的混合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（2) 中，液相合成全保護(hù)的第二肽片段序列的方法是，首先Fmoc-Pro-OH與H-Gly-NH2反應(yīng)得到Fmoc-Pro_Gly-NH2,脫去Fmoc保護(hù)后與Fmoc-Arg(Pbf)-〇H反應(yīng)得至lj Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-NH2 ； 所述脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基也就是脫去 Fmoc-Arg (Pbf)-Pr〇-Gly_NH2 的 Fmoc 保護(hù)，得到 H_Arg (Pbf)-Pr〇-Gly_NH2 ; 氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量16%的哌啶的DMF溶液，或者體積百分含量為1%的 DBU的DMF溶液，或者體積百分含量為50 %的二乙胺的DCM溶液；縮合反應(yīng)使用的縮合劑為 HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、 或者EDC與HOBt的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；縮合反應(yīng)使用的反應(yīng)溶劑為 THF、DMF、DCM、NMP和DMS0中的任意一種或幾種的組合。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（3)中，將 步驟（2)得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與步驟（1)得到的全保護(hù) 的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林過(guò)程中，使用的縮合劑為HBTU與HOBt與DIEA 的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者EDC與HOBt的組合、或者DIC與HOBt的組 合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為T(mén)HF、DMF、DCM、NMP和DMS0中的 任意一種或幾種的組合。
6. -種片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，固相制備曲普瑞林的全保護(hù) 的第三肽片段序列樹(shù)脂，然后將全保護(hù)的第三肽片段序列從樹(shù)脂上裂解下來(lái)，液相中與 H-Gly-NH2縮合得到全保護(hù)的曲普瑞林，然后脫去側(cè)鏈保護(hù)得到曲普瑞林粗品，純化轉(zhuǎn)鹽得 到醋酸曲普瑞林； 其中，所述的第三肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1-9位氨基酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，它包括以下步 驟： (a) 固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂， 所述的曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列為： Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-〇H, 將全保護(hù)的第三肽片段序列從固相載體上裂解； (b) 液相中全保護(hù)第三肽片段序列與H-Gly-NH2縮合得到全保護(hù)的曲普瑞林； (c) 將全保護(hù)的曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品； (d) 曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（a)中，曲 普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲得肽樹(shù)脂；其 中，所用的固相載體為酸敏感樹(shù)脂； 固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列樹(shù)脂的過(guò)程中，所使用的氨基脫保護(hù)試 劑為體積百分含量為20 %的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1 %的DBU的DMF溶液； 所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者PyBOP與 HOBt與DIEA的組合； 使用的裂解劑為體積百分含量為〇. 5?1 %的TFA的DCM溶液、體積百分含量為20% 的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1:2:7的混合物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（b)中曲普 瑞林的全保護(hù)的第三肽片段序列與H-Gly-NH2縮合的縮合劑為HBTU與HOBt與DIEA的組 合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者EDC與HOBt的組合、 或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為T(mén)HF、DMF、DCM、NMP和DMS0中的任 意一種或幾種的組合。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的片段縮合制備曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟（c)中，全 保護(hù)曲普瑞林裂解使用的裂解液為T(mén)FA與H20按體積比95:5的混合溶液、或者TFA與EDT 與TIS與PhOH與H20按體積比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA與EDT與TIS與H20按體 積比92. 5:2. 5:2. 5:2. 5的混合溶液。
【文檔編號(hào)】C07K1/02GK104387454SQ201410743707
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】彭雅麗, 常民, 王銳, 薛宏祥, 賀真 申請(qǐng)人:蘭州大學(xué)