本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的涉及銀杏內(nèi)酯和冰片的藥物組合物。以及該藥物組合物在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。其中所述冰片為天然冰片(右旋龍腦)、艾片(左旋龍腦)或冰片(合成龍腦)或其混合物；銀杏內(nèi)酯組合物為銀杏二萜內(nèi)酯、銀杏倍半萜內(nèi)酯或其混合物。
背景技術(shù)：
隨著銀杏葉研究的發(fā)展，現(xiàn)已證實(shí)：銀杏葉的活性成分主要是黃酮和內(nèi)酯類化合物。銀杏內(nèi)酯是僅在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的一類具有特殊結(jié)構(gòu)及顯著藥理活性的重要成分，迄今尚未發(fā)現(xiàn)存在于其他任何植物中。更重要的是他們具有獨(dú)特的藥理作用和治療價(jià)值。銀杏內(nèi)酯類化合物有：銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯M、銀杏內(nèi)酯J、銀杏內(nèi)酯K及白果內(nèi)酯等，已證明銀杏內(nèi)酯均為強(qiáng)血小板活化因子受體拮抗劑。銀杏內(nèi)酯包括銀杏倍半萜內(nèi)酯和銀杏二萜內(nèi)酯?，F(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的銀杏內(nèi)酯化合物中，除白果內(nèi)酯屬于銀杏倍半萜化合物，其余銀杏內(nèi)酯化合物均屬于銀杏二萜內(nèi)酯類化合物。
銀杏內(nèi)酯是迄今為止自然界存在的生理活性最強(qiáng)的血小板活化因子(PAF)拮抗劑。銀杏內(nèi)酯中銀杏內(nèi)酯B的生理活性最強(qiáng)，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板活化因子拮抗劑，可在臨床上用于治療血栓、急性胰腺炎和心血管疾病，還可用于轉(zhuǎn)移性癌癥的治療，對(duì)損傷神經(jīng)元也有保護(hù)作用，同時(shí)具有抗氧化，延緩衰老的作用。銀杏內(nèi)酯A對(duì)應(yīng)激性潰瘍有顯著的預(yù)防作用，對(duì)膽堿能損傷記憶功能具有恢復(fù)作用，能防止ChAT活力降低,緩解和改善心肌缺血作用，可阻抑DAD的發(fā)生,并有抗焦慮作用。而白果內(nèi)酯則被認(rèn)為具有很強(qiáng)的促進(jìn)神經(jīng)生長的作用，可以防止腦、脊髓神經(jīng)脫髓鞘作用，其神經(jīng)營養(yǎng)、神經(jīng)保護(hù)作用比目前的銀杏二萜內(nèi)酯都強(qiáng)。
目前市場已有成都百?？萍贾扑幱邢薰镜你y杏內(nèi)酯注射液以及江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司的銀杏二萜內(nèi)酯葡胺注射液兩個(gè)銀杏內(nèi)酯類注射液產(chǎn)品上市。銀杏內(nèi)酯注射液：
【藥品名稱】銀杏內(nèi)酯注射液
【成份】銀杏內(nèi)酯。
【規(guī)格】每支裝2ml(含萜類內(nèi)酯10毫克)。
【功能主治】活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)，用于瘀血阻絡(luò)所致的缺血性中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)。癥見頭暈?zāi)垦?，口舌歪斜，言語蹇澀，肢體麻木，頭痛，半身不遂，適用于急性期腦梗死和恢復(fù)期腦梗死見上述表現(xiàn)者。
【用法用量】靜脈滴注。每次5支，臨用前加于5％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液250毫升中緩慢靜滴，一日1次。用藥期間須嚴(yán)格控制滴速，滴注速度不高于40～60滴/分鐘，療程為14天。
【生產(chǎn)企業(yè)】成都百?？萍贾扑幱邢薰?/p>
銀杏二萜內(nèi)酯葡胺注射液：
【藥品名稱】銀杏二萜內(nèi)酯葡胺注射液
【成份】主要成分為銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯K等。
【規(guī)格】每支裝5ml(含銀杏二萜內(nèi)酯25毫克)。
【功能主治】活血通絡(luò)。用于中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)(輕中度腦梗死)恢復(fù)期痰瘀阻絡(luò)證，癥見半身不遂，口舌歪斜，言語蹇澀，肢體麻木等。
【用法用量】一次1支(25毫克)，一日一次。加入到0.9％氯化鈉注射液250毫升中稀釋，靜脈滴注。
【生產(chǎn)企業(yè)】江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
作為傳統(tǒng)常用中藥，冰片在中藥中常作為“引藥”應(yīng)用，其本身具有開竅醒神，清熱止痛的功效。在中國藥典2010年版一部中，收錄有天然冰片(右旋龍腦)、艾片(左旋龍腦)或冰片(合成龍腦)，三者均作為冰片正品使用。
現(xiàn)有技術(shù)中未見將銀杏內(nèi)酯和冰片作為活性成分同時(shí)使用的報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
在尋找一種強(qiáng)效的治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物時(shí)，發(fā)明人驚喜的發(fā)現(xiàn)，將銀杏內(nèi)酯、冰片兩者進(jìn)行配伍，具有良好的療效，兩者聯(lián)合使用，療效遠(yuǎn)高于單獨(dú)使用銀杏內(nèi)酯或冰片。于是發(fā)明人經(jīng)過大量的創(chuàng)造性勞動(dòng)，反復(fù)推理、驗(yàn)證、改進(jìn)完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的一方面在于提供一種藥用組合物，其包括銀杏內(nèi)酯、冰片和藥學(xué)上可接受的載體。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述冰片為天然冰片(右旋龍腦)、艾片(左旋龍腦)或冰片(合成龍腦)。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述銀杏內(nèi)酯為銀杏二萜內(nèi)酯、銀杏倍半萜內(nèi)酯中的一種或其混合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供包含制備預(yù)防和治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果是：銀杏內(nèi)酯、冰片兩者的配伍，根據(jù)藥效試驗(yàn)結(jié)果，針對(duì)心腦血管疾病治療中，兩者具有顯著增加藥效的協(xié)同作用。
銀杏內(nèi)酯的獲?。?/p>
銀杏葉粉碎，提取有效部位，得到銀杏葉有效部位1，含銀杏二萜內(nèi)酯超過70％。
銀杏葉粉碎，提取有效部位，得到銀杏葉有效部位2，含銀杏內(nèi)酯(銀杏二萜內(nèi)酯和白果內(nèi)酯之和)超過70％。
具體實(shí)施方式
為更好地說明本發(fā)明，以下將結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，給出本發(fā)明的實(shí)施細(xì)節(jié)，但是不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的 限制。
實(shí)施例1：
試驗(yàn)1：對(duì)局灶性腦缺血再灌損傷的保護(hù)作用
1.1材料與方法
1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級(jí)，體重260-290g。
1.1.2方法
1.1.2.1腦缺血模型的制備
采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大腦中動(dòng)脈阻塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)腦缺血再灌注模型。動(dòng)物用7％水合三氯乙醛(6ml/kg)麻醉后,俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，消毒皮膚，頸部正中切開，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，輕輕剝離迷走神經(jīng)，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈，循頸內(nèi)動(dòng)脈向前，結(jié)扎翼腭動(dòng)脈。夾閉頸總動(dòng)脈近心端，從頸外動(dòng)脈的結(jié)扎線的遠(yuǎn)端作一切口插入外徑為0.285mm的尼龍線，進(jìn)過頸總動(dòng)脈分叉進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，然后徐徐插入至有輕微阻力為止(自分叉處約20mm)，阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血供，右側(cè)腦缺血2h后，輕輕拔出尼龍線，恢復(fù)血供進(jìn)行再灌注，縫合皮膚，消毒。
1.1.2.2給藥
制備腦缺血模型后，將動(dòng)物機(jī)率均等單盲分配至各組。動(dòng)物于再灌注后立即靜脈給藥1次，模型組動(dòng)物給予等體積的生理鹽水。腦缺血后24小時(shí)評(píng)價(jià)神經(jīng)缺陷癥狀，而后處死動(dòng)物，取腦，染色，拍照測定腦梗死面積。
1.1.2.3動(dòng)物分組與給藥劑量
1.1.2.4神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)分及腦梗死面積的測定
采用改良Bederson 5分制法進(jìn)行神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)價(jià)。采用單盲法評(píng)價(jià)腦缺血后大鼠的神經(jīng)缺陷癥狀，即由試驗(yàn)設(shè)計(jì)者將動(dòng)物按組標(biāo)記，對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀進(jìn)行評(píng)分的試驗(yàn)者不知道動(dòng)物的分組情況，評(píng)分結(jié)束后，評(píng)分者將各種標(biāo)記的評(píng)分結(jié)果呈交設(shè)計(jì)者，由設(shè)計(jì)者揭盲，獲得各試驗(yàn)組每只動(dòng)物的評(píng)分。
神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)分Bederson 5分制法
0：提尾懸空時(shí)，動(dòng)物的兩前肢均伸向地板方向，且無其他行為缺陷。
1：提尾懸空時(shí)，動(dòng)物的手術(shù)對(duì)(左)側(cè)前肢表現(xiàn)為腕肘屈曲、肩內(nèi)旋、肘外展、緊貼胸壁。
2：將動(dòng)物置于光滑平板上，推手術(shù)側(cè)肩向?qū)?cè)移動(dòng)時(shí)阻力降低。
3：動(dòng)物自由行走時(shí)，向手術(shù)對(duì)側(cè)環(huán)行或轉(zhuǎn)圈。
4：肢體軟癱,肢體無自發(fā)活動(dòng)。
腦梗死程度的測定，動(dòng)物處死后，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，用生理鹽水沖洗大腦表面血跡，吸去表面殘留水跡，于-20℃放置20min，取出后立即于視線交叉平面垂直向下作冠狀切面，并向后每隔2mm切一片，將腦片置于2％TTC染液中孵育(37℃90min)，正常腦組織染成深紅色，缺血腦組織則呈蒼白色，用生理鹽水沖洗后，迅速將腦片從前向后按順序排成一排，吸干表面殘留水跡，拍照。
照片用圖像分析軟件處理，根據(jù)公式計(jì)算左腦相應(yīng)的體積以及梗死灶體積，求出梗死灶百分比。
梗死體積計(jì)算法：
V＝t(A1+A2+A3+.........+An)
t為切片厚度，A為梗死面積。
％I＝100％×(VC-VL)/VC
％I為梗死體積百分比，VC為對(duì)照側(cè)(左腦半球)腦體積，VL為梗死側(cè)(右腦半球)非梗死區(qū)域體積。
1.1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
定量資料表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。腦梗死面積和神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)分采用單因素方差分析，Scheffe's檢驗(yàn)測定兩組間的差異顯著性。將差異P<0.05定義為差異顯著。
1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.2.1對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的影響
神經(jīng)缺陷癥狀的程度：與模型組相比，各復(fù)方組均能顯著改善神經(jīng)缺陷癥狀，且有明顯量效關(guān)系。
1.2.2對(duì)腦梗塞面積的影響
對(duì)腦梗塞面積的影響：與模型組相比，各復(fù)方組組均能顯著減小動(dòng)物缺血再灌后腦梗塞面積，且有明顯量效關(guān)系。
實(shí)施例2：對(duì)東莨菪堿所致癡呆小鼠學(xué)習(xí)能力的影響
2.1材料：
藥物：
哈伯因(石杉?jí)A甲片)。
氫溴酸東莨菪堿注射液。
健康清潔級(jí)ICR小鼠,5-6周齡,18～22g,雌雄各半。
儀器：成都泰盟DT200小鼠跳臺(tái)儀。
2.2實(shí)驗(yàn)方法：
動(dòng)物分組與給藥劑量
給藥
灌胃給藥，每日一次，連續(xù)10天，對(duì)照組給予相同體積溶劑對(duì)照。
觀測的指標(biāo)
小鼠跳臺(tái)裝置為六個(gè)長方形反射箱，大小為10cm*10cm*30cm，用黑色塑料板分隔成為6間。底面為不銹鋼網(wǎng)柵，網(wǎng)柵間距為0.5cm。每間左后角放置一高和直徑4.5cm的橡膠站臺(tái)。將小鼠面向墻角輕輕放置與站臺(tái)上，適應(yīng)環(huán)境3min，然后通以32V電流。若動(dòng)物跳下站臺(tái)則受電擊，其正常反應(yīng)應(yīng)該是跳回站臺(tái)以躲避傷害性刺激，多數(shù)動(dòng)物可能會(huì)再次或多次跳至網(wǎng)柵上，受到電擊后又迅速跳回站臺(tái)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后1小時(shí)進(jìn)行跳臺(tái)訓(xùn)練，24小時(shí)后測試記憶成績。模型組及各給藥組于測試前30分鐘腹腔注射東莨菪堿2mg/kg,對(duì)照組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水。將小鼠面向墻角放置于站臺(tái)上，觀察并記錄5分鐘內(nèi)小鼠跳下站臺(tái)而遭受電擊的次數(shù)和潛伏期。5min內(nèi)未跳下的小鼠其跳臺(tái)潛伏期按300s計(jì)算。
統(tǒng)計(jì)方法
所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS軟件，對(duì)符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，均數(shù)比較用單因素方差分析，若方差齊，兩兩比較采用最小顯著差法，若方差不齊則采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)行兩兩比較；如不符合正態(tài)分布，則用非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal—Wallis進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2.3結(jié)果
與空白對(duì)照組對(duì)比，模型組潛伏期明顯縮短，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加。哈伯因組與模型組比小鼠潛伏期明顯延長。
各復(fù)方組潛伏期均有不同程度的延長，錯(cuò)誤次數(shù)也明顯減少，且有明顯量效關(guān)系，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且療效明顯優(yōu)于哈伯因組。