用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑及其制備方法。本發(fā)明采用“生物素?親和素”橋接法將抗ICAM?1單抗結(jié)合到生物素化脂質(zhì)微泡上，制成靶向超聲微泡MBICAM?1，成功實(shí)現(xiàn)了抗ICAM?1單抗與微泡的連接。微泡的平均粒徑為1.00～2.4μm，濃度為2.4×108～2.4×1010個(gè)/mL，與抗ICAM?1單抗的平均結(jié)合率為86.5±5.3％。實(shí)驗(yàn)表明，微泡MBICAM?1在體外、體內(nèi)均具有靶向功能，可將其作為靶向顯影劑用于跟腱炎的臨床診斷。
【專利說(shuō)明】
用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及免疫學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]超聲微泡是指一類較小的(通常直徑約1_8μπι)包含氣體的微球，可通過(guò)靜脈注射隨血流到達(dá)機(jī)體各組織器官，并可用超聲實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，在特定組織內(nèi)可被一定強(qiáng)度的超聲波擊破，其可稱為理想的藥物遞送釋放載體。隨著新型超聲微泡的不斷出現(xiàn)和超聲造影新技術(shù)的飛速發(fā)展，明顯提高了超聲診斷的敏感性和特異性。靶向超聲微泡表面攜帶對(duì)靶分子具有特異識(shí)別能力的配體或抗體，這使得靶向超聲微泡經(jīng)靜脈注射后通過(guò)肺循環(huán)達(dá)到感興趣的組織或器官，選擇性的與相應(yīng)受體結(jié)合，增強(qiáng)靶區(qū)的超聲回波信號(hào)，有利于局部組織疾病的診斷和治療。靶向超聲微泡不僅可從分子水平無(wú)創(chuàng)地評(píng)價(jià)各種病變組織和器官的病理改變，并可作為一種載體，為基因和藥物的靶向釋放提供新途徑。
[0003]目前，靶向超聲微泡已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者一致認(rèn)可的新型基因載體，將攜藥物或基因的靶向超聲微泡經(jīng)靜脈注射后，在靶組織給予一定條件的超聲照射，靶向超聲微泡在超聲波的照射下產(chǎn)生空化效應(yīng)爆破微泡，可引起直徑<7μπι的微血管破裂，內(nèi)皮細(xì)胞的間隙增寬，從而使藥物或基因更易通過(guò)血管內(nèi)皮到達(dá)靶組織釋放并被吸收;含有氣體的超聲微泡在超聲照射下產(chǎn)生壓縮和膨脹，微泡更易破裂。當(dāng)微泡抵達(dá)特定組織時(shí)，超聲波破壞攜基因或藥物的靶向超聲微泡就可以達(dá)到對(duì)靶組織定向治療的目的，并且由于靶向超聲微泡在血循環(huán)中穩(wěn)定性比較好，可減少基因或藥物到達(dá)靶組織前在體內(nèi)的播散，明顯提高了局部組織的基因轉(zhuǎn)染和表達(dá)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑及其制備方法。
[0005]本發(fā)明基于以下構(gòu)思:1CAM_1(細(xì)胞間粘附分子-1)是細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白家族成員，主要表達(dá)在活化的內(nèi)皮細(xì)胞和其他抗原遞質(zhì)細(xì)胞上，介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞的黏附反應(yīng)，在正常細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。有研究表明，損傷的跟腱細(xì)胞ICAM-1表面抗原表達(dá)明顯增加。因此，本發(fā)明以損傷后表達(dá)ICAM-1表面抗原的跟腱細(xì)胞為靶受體，制備攜抗ICAM-1單抗的靶向超聲微泡，使載ICAM-1單抗微泡靶向結(jié)合于高表達(dá)ICAM-1的組織部位，從而增強(qiáng)其造影效果。此外，本發(fā)明旨在制備載抗ICAM-1單抗靶向超聲微泡，并驗(yàn)證制備的靶向超聲微泡在體外、體內(nèi)的革G向能力，為下一步革El向超聲微泡同時(shí)攜帶PFGF基因進(jìn)行跟腱預(yù)防損傷術(shù)后修復(fù)粘連的研究打下基礎(chǔ)。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供生物素化脂質(zhì)微泡的制備方法，向試管中按516-520:80-90:383-400的體積比(優(yōu)選體積比516:80:383)依次加入二硬脂酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺以及生物素-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，混勻，在氮?dú)饬?0.1MPa)作用下至試管壁上形成一層磷脂膜，用帶有透氣孔的封口膜封住試管口，放入抽濾瓶中抽真空2-3小時(shí)，然后向試管中加入0.1M Tris緩沖液(pH值7.4)5mL，55-60°C超聲波振蕩器上超聲振蕩20min，即得。
[0007]本發(fā)明還提供根據(jù)上述方法的制備的生物素化脂質(zhì)微泡。微泡平均粒徑為1.00?
2.4μπι，濃度為2.4 X 18?2.4 X 1iq個(gè)/mL。與抗ICAM-1單抗的平均結(jié)合率為86.5 ± 5.3%。
[0008]本發(fā)明還提供所述生物素化脂質(zhì)微泡在制備靶向藥物或診斷試劑中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明還提供所述生物素化脂質(zhì)微泡在作為基因載體中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明還提供一種用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑，其主要成分為載有抗ICAM-1單抗的所述生物素化脂質(zhì)微泡，即靶向超聲微泡MBKAM4。例如，所述抗ICAM-1單抗為北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的bs-4618R-B1(生物素化抗兔細(xì)胞間粘附分子單克隆抗體)。
[0011]本發(fā)明還提供所述靶向顯影劑的制備方法，將生物素化脂質(zhì)微泡、lmg/ml卵白素溶液以及抗ICAM-1單抗按25-30:25-30:1_2的體積比(優(yōu)選體積比25:25:1)混勻即得。
[0012]前述的方法，將生物素化脂質(zhì)微泡、卵白素溶液以及抗ICAM-1單抗按比例混合后，在20_30rpm下攬摔30_35min，即得。
[0013]本發(fā)明進(jìn)一步提供含有所述靶向顯影劑的診斷試劑盒。
[0014]本發(fā)明采用“生物素-親和素”橋接法成功實(shí)現(xiàn)了抗ICAM-1單抗和微泡的連接。由于生物素與親和素間的結(jié)合具有高靈敏度、高親和力、專一穩(wěn)定等特點(diǎn)，幾乎呈不可逆性反應(yīng)，而且不受酸、堿、變性劑及有機(jī)溶劑的影響，每個(gè)親和素分子都有4個(gè)生物素結(jié)合位點(diǎn)，可以同時(shí)以多價(jià)形式與生物素化抗體/配體結(jié)合，呈多級(jí)放大，避免了連接過(guò)程中大量抗體/配體的浪費(fèi)。在制備靶向微泡的過(guò)程中，首先制備生物素化脂質(zhì)微泡，然后再連接親和素和生物素化抗ICAM-1單抗，制備成靶向超聲微泡MBkam-1。
[0015]成功制備靶向超聲微泡MBicam-^，通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其靶向能力。在體外靶向?qū)嶒?yàn)中，采用ICAM-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HeIa細(xì)胞，使HeIa細(xì)胞表達(dá)ICAM-1表面抗原，然后將表達(dá)ICAM-1表面抗原的Hela細(xì)胞制備好的靶向超聲微泡冊(cè)^細(xì)^進(jìn)行孵育，孵育后PBS洗滌除去未粘附的靶向超聲微泡MBid1，在顯微鏡下可觀察到表達(dá)ICAM-1表面抗原的Hela細(xì)胞周圍粘附有靶向超聲微泡MBkam-1，證實(shí)了制備的靶向超聲微泡ΜΒκαμ—I在體外具有靶向粘附功會(huì)K。
[0016]兔在細(xì)胞和組織病理生理方面和人類相似，被廣泛用于肌腱疾病的研究。跟腱的主要構(gòu)成成分是I型膠原纖維。本發(fā)明利用I型膠原酶消化I型膠原，并通過(guò)病理驗(yàn)證家兔跟腱炎模型建立成功。利用該家兔跟腱炎癥模型，將制備的超聲微泡進(jìn)行體內(nèi)跟腱造影檢查。在造影模式下，普通脂質(zhì)微泡與生物素脂質(zhì)微泡在雙側(cè)跟腱側(cè)均表現(xiàn)微弱增強(qiáng);而用靶向超聲微泡冊(cè)工^^進(jìn)行造影，家兔左側(cè)跟腱(實(shí)驗(yàn)側(cè))出現(xiàn)明顯的高增強(qiáng)，明顯高于對(duì)照側(cè)跟腱。該結(jié)果證明了制備的革G向超聲微泡MBiCAM-1在體內(nèi)具有革El向顯影功能。
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為本發(fā)明實(shí)施例3中顯微鏡下觀察微泡的形態(tài)(630X);其中，A:普通脂質(zhì)微泡;B:生物素化脂質(zhì)微泡;C:靶向超聲微泡MBkam-1。
[0018]圖2為本發(fā)明實(shí)施例3中倒置焚光顯微鏡下觀察FITC標(biāo)記的革El向超聲微泡MBicam-1(400X );其中，A:白光下焚光下革El向超聲微泡MBicam-1;B:焚光下革El向超聲微泡MBicam-1。
[0019]圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗ICAM-1單抗與微泡的結(jié)合率;其中，A:生物素化脂質(zhì)微泡;B:焚光革E向超聲微泡ΜΒκαμ-ι。
[0020]圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中微泡在大鼠肝臟顯影試驗(yàn)結(jié)果;其中，A:普通脂質(zhì)微泡造影;B:生物素化脂質(zhì)微泡造影;C:革E向超聲微泡MBigam-1造影;D: SonoVue微泡造影。
[0021 ]圖5為本發(fā)明實(shí)施例3中倒置焚光顯微鏡下(100 X )革El向超聲微泡MBicam的體外革巴向?qū)嶒?yàn)結(jié)果(A、B為同一視野)；其中，A:轉(zhuǎn)染成功的hela細(xì)胞;B:轉(zhuǎn)染成功的Hela細(xì)胞與靶向超聲微泡MBicam-1結(jié)合。
[0022]圖6為本發(fā)明實(shí)施例3中雙側(cè)跟腱靶向超聲微泡ΜΒκαμ-χ造影結(jié)果;其中，A:左側(cè)跟腱;B:右側(cè)跟腱(箭頭示跟腱)。
【具體實(shí)施方式】
[0023]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0024]以下實(shí)施例中涉及的主要材料和儀器:二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC，Avanti);聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000，Avanti);生物素-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-B1tinS，Avanti);生物素化抗兔細(xì)胞間粘附分子單克隆抗體(bs-4618R-B1，北京博奧森公司)；1型膠原酶(美國(guó)Sigma公司)；新西蘭家兔(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)；自動(dòng)稀釋顆粒計(jì)算儀(美國(guó)PSS公司)；倒置熒光顯微鏡(德國(guó)Olympus公司)；離心機(jī)(美國(guó)Eppendorf公司)；流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman公司)；彩色多普勒超聲診斷儀My lab90 (意大利百勝公司)。
[0025]實(shí)施例1脂質(zhì)微泡的制備
[0026]將DSPC、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-B1tins按比例加入試管中，其中，普通脂質(zhì)微泡DSPC:DSPE-PEG2000 = 521yl: 161μ1，生物素化脂質(zhì)微泡DSPC:DSPE_PEG 2000: DSPE-PEG2000-B1tins = 516yl:80yl:383yl。在氮?dú)饬?0.1Mpa)作用下至試管壁上形成一層磷脂薄膜，用封口膜封住試管口，用針頭在上面扎一定數(shù)量的孔洞，放入500ml抽濾瓶中抽真空2-3小時(shí)，加入5ml 0.1M Tris緩沖液(pH值7.4)至試管中，55_60°C超聲波振蕩器上超聲振蕩20min后將磷脂懸浮液以Iml/支分裝入2.5mL西林瓶中，進(jìn)行氣體交換，使西林瓶中充入全氟丙烷，即制備得到普通脂質(zhì)微泡及生物素化脂質(zhì)微泡MBmtn。
[0027]實(shí)施例2靶向超聲微泡ΜΒκαμ-!的制備
[0028]將上述制備的生物素化脂質(zhì)微泡置于振蕩器上，300-400rpm振蕩40s，加入4mlPBS緩沖液，將其抽進(jìn)注射器，400-500g離心4min，將清亮液體打出，重復(fù)上述將液體抽進(jìn)注射器-離心-打出的步驟共3次，即完成搖洗。然后，按比例加入卵白素溶液和抗ICAM-1單抗(搖洗好的生物素化脂質(zhì)微泡500μ1，lmg/ml卵白素溶液500μ1，抗ICAM-1單抗20μ1)，將三者充分混勻后抽入Iml注射器中，用封口蓋帽將注射器封住，綁于攪拌器中，轉(zhuǎn)速調(diào)至最低(20-30rpm)，室溫下水平旋轉(zhuǎn)30min。
[0029]自制微泡的檢測(cè):
[0030]分別取制備的三種微泡各20μ1，以PBS緩沖液稀釋成Iml均勻分布的懸浮液。滴加ΙΟμΙ該懸浮液于載玻片中，并加入相同體積50%甘油混勾，壓片后在顯微鏡下觀察超聲微泡的形態(tài)。
[0031]分別取已搖洗的三種微泡溶液各20μ1置于自動(dòng)稀釋顆粒計(jì)算儀，計(jì)算出微泡粒徑和濃度。
[0032]微泡的基本性質(zhì)如下:肉眼觀察制備的超聲微泡肉眼觀察外觀呈乳白色混懸液，分布均勻。放置十分鐘后可見(jiàn)渾濁出現(xiàn)分層，上層為乳白色的微泡，下層為透明液體。顯微鏡觀察普通脂質(zhì)微泡、生物素化脂質(zhì)微泡以及靶向超聲微泡態(tài)完整、規(guī)則，分布較均勻(圖1)。微泡濃度和粒徑檢測(cè)普通脂質(zhì)微泡平均粒徑:1.57μπι，濃度:1.0 X 19個(gè)/ml;生物素化脂質(zhì)微泡平均粒徑:1.09μπι，濃度2.3 X 101()個(gè)/ml;靶向超聲微泡MBkam-!平均粒徑:
2.28μπι，濃度 2.4X108 個(gè)/ml。
[0033]實(shí)施例3靶向超聲微泡MBkam-x的體內(nèi)、體外功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
[0034]1.實(shí)驗(yàn)方法
[0035]1.1革[I向超聲微泡MBicam-1焚光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)
[0036]取實(shí)施例2制備的靶向超聲微泡MBkam-! Iml，加入FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG( 1:100) Iml，綁于攪拌器上，轉(zhuǎn)速調(diào)至最低，避光下室溫水平旋轉(zhuǎn)30min;離心去除下層液，上層微泡用PBS洗滌2次;倒置熒光顯微鏡中觀察靶向超聲微泡MBkam—!的熒光分布情況，以實(shí)施例I制備的MBbicitin-!作為對(duì)照組。
[0037]1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗ICAM-1單抗與微泡的結(jié)合率
[0038]取以上制備的熒光靶向超聲微泡lml，以生物素化微泡Iml為對(duì)照，送流式細(xì)胞儀分析微泡和抗ICAM-1單抗的結(jié)合率(檢測(cè)三批不同時(shí)間制備的微泡)。
[0039]1.3微泡在大鼠肝臟顯影試驗(yàn)
[0040]麻醉后固定SD大鼠，在尾靜脈置入留置針。二維模式下(Mylab90，LA523線陣探頭，頻率7-lOMHz，general模式，調(diào)整增益及深度)采集大鼠的肝臟圖像。依次從留置針中注入0.2mL的普通脂質(zhì)微泡、生物素化脂質(zhì)微泡、靶向超聲微泡ΜΒκαμ—!以及SonoVue微泡，并追加0.5ml生理鹽水，并將超聲儀調(diào)節(jié)至造影模式(Mylab，90，LA523線陣探頭，頻率:7-10MHz，M1:0.8)，觀察大鼠肝臟顯影情況。
[0041 ] 1.4靶向超聲微泡MBicam-^體外靶向?qū)嶒?yàn)
[0042]培養(yǎng)Hela細(xì)胞，將構(gòu)建成功的ICAM-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)Hela細(xì)胞，轉(zhuǎn)染成功后加入靶向超聲微泡MBkam-!孵育30分鐘，PBS洗滌除去未粘附的微泡，倒置顯微鏡下觀察靶向超聲微泡MBkamh與轉(zhuǎn)染后的Hela細(xì)胞的粘附情況(未進(jìn)行轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞作為對(duì)照組)。
[0043]1.5靶向超聲微泡MBicam-^體內(nèi)靶向?qū)嶒?yàn)
[0044]通過(guò)注射I型膠原酶制備家兔左側(cè)跟腱炎癥模型，右側(cè)跟腱作為對(duì)照組。從家兔耳緣靜脈中分別注入0.4ml的普通脂質(zhì)微泡、生物素化脂質(zhì)微泡MB以及靶向超聲微泡MBkh(注意待前一種造影劑完全消散后才能注射第二種造影劑)，并追加ImL生理鹽水，并將超聲儀調(diào)節(jié)至造影模式(Mylab90，LA523探頭，頻率:7-10MHZ，MI: 0.8，ankle模式)，觀察家兔雙側(cè)跟腱的顯影情況。
[0045]2.結(jié)果
[0046]2.1靶向超聲微泡MBkam-x熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)
[0047]分別將生物素化脂質(zhì)微泡、靶向超聲微泡1?1識(shí)-1與？11'(:標(biāo)記的抗體孵育30min，PBS洗滌3次后于倒置熒光顯微鏡下觀察:生物素化脂質(zhì)微表面不表達(dá)熒光;靶向超聲微泡MBicam-1表面表達(dá)綠色焚光，如圖2所不。
[0048]2.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗ICAM-1單抗與微泡的結(jié)合率
[0049]以生物素化脂質(zhì)微泡為對(duì)照，檢測(cè)抗ICAM-1單體與微泡MBigam-1的結(jié)合率，結(jié)果顯示平均結(jié)合率為86.5±5.3%。結(jié)果表明制備的靶向超聲微泡ΜΒκαμ-!的抗體攜帶率比較理想，達(dá)80%以上(圖3)。
[0050]2.3微泡在大鼠肝臟顯影試驗(yàn)
[0051]超聲二維模式下觀察可見(jiàn)大鼠肝臟邊界清晰，回聲均勻，內(nèi)未見(jiàn)異?；芈?。造影模式下，普通脂質(zhì)微泡、生物素化脂質(zhì)微泡、靶向超聲微泡MBkam^以及SonoVue(聲諾維)微泡在大鼠肝臟中均呈高增強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間均約lOmin。(圖4)
[0052]2.4靶向超聲微泡MBkam—!的體外靶向?qū)嶒?yàn)
[0053]在倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn):成功轉(zhuǎn)染并表達(dá)ICAM-1表面抗原的Hela細(xì)胞可見(jiàn)發(fā)出綠色熒光，周圍可見(jiàn)粘附的靶向超聲微泡MBicah(圖5);未轉(zhuǎn)染的hela細(xì)胞不表達(dá)熒光，革El向超聲微泡ICAM— I分散漂浮在細(xì)胞間。該結(jié)果表明制備的革El向超聲微泡MBICAM— I在體外能夠成功與表達(dá)的ICAM-1表面抗原的Hela細(xì)胞特異性結(jié)合。
[0054]2.5靶向超聲微泡MBicam-^體內(nèi)靶向?qū)嶒?yàn)
[0055]普通脂質(zhì)微泡:左側(cè)跟腱呈微弱增強(qiáng)；右側(cè)跟腱呈微弱增強(qiáng)。生物素化脂質(zhì)微泡:左側(cè)跟腱呈微弱增強(qiáng)；右側(cè)跟腱呈微弱增強(qiáng)。靶向超聲微泡ΜΒκμ-1:&側(cè)跟腱呈明顯增強(qiáng)。右側(cè)跟腱呈微弱增強(qiáng)。(圖6)
[0056]上述造影增強(qiáng)模式的結(jié)果說(shuō)明，制備的靶向超聲微泡MBkmh在體內(nèi)能與左側(cè)跟腱特異性結(jié)合，具有明顯的靶向功能，可將其作為靶向顯影劑用于跟腱炎的臨床診斷。
[0057]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
[0058]參考文獻(xiàn)
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【主權(quán)項(xiàng)】
1.生物素化脂質(zhì)微泡的制備方法，其特征在于，向試管中按516-520:80-90:383-400的體積比依次加入二硬脂酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺以及生物素-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，混勻，在氮?dú)饬髯饔孟轮猎嚬鼙谏闲纬梢粚恿字?，用帶有透氣孔的封口膜封住試管口，放入抽濾瓶中抽真空2-3小時(shí)，然后向試管中加入pH值7.4的0.1M Tris緩沖液5mL，55-60°C超聲波振蕩器上超聲振蕩20min，即得。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在0.1MPa氮?dú)饬髯饔孟轮猎嚬鼙谏闲纬梢粚恿字?優(yōu)選地，二硬脂酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺以及生物素-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺按516:80:383的體積比混合。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法的制備的生物素化脂質(zhì)微泡。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物素化脂質(zhì)微泡，其特征在于，微泡平均粒徑為1.00?2.4μm，濃度為2.4Χ 18?2.4X 11MVmLc35.權(quán)利要求3或4所述生物素化脂質(zhì)微泡在制備靶向藥物或診斷試劑中的應(yīng)用。6.用于診斷跟腱炎的靶向顯影劑，其特征在于，主要成分為載有抗ICAM-1單抗的權(quán)利要求3或4所述的生物素化脂質(zhì)微泡。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的靶向顯影劑，其特征在于，所述抗ICAM-1單抗為bs-4618R-B108.權(quán)利要求6或7所述靶向顯影劑的制備方法，其特征在于，將生物素化脂質(zhì)微泡、lmg/ml卵白素溶液以及抗ICAM-1單抗按25-30:25-30:1_2的體積比混勻即得。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，將生物素化脂質(zhì)微泡、卵白素溶液以及抗ICAM-1單抗按25:25:1的體積比混合，在20-30rpm下攪拌30-35min，即得。10.含有權(quán)利要求6或7所述靶向顯影劑的診斷試劑盒。
【文檔編號(hào)】A61K49/22GK105999311SQ201610323553
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月16日
【發(fā)明人】劉俐, 陳蕓, 王峰, 王玥, 石宇, 賈曉健, 胡阿珍, 馬建城, 沈宇宙, 吳決連, 陳志林
【申請(qǐng)人】北京大學(xué)深圳醫(yī)院, 深圳北京大學(xué)香港科技大學(xué)醫(yī)學(xué)中心