歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、類干酪乳桿菌、 保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌。VSL#3 ?可通過增加抗炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生、擴(kuò)大Treg池和降 低促炎細(xì)胞因子的水平而促進(jìn)抗炎作用。
[0045] 這3種益生菌菌株和益生菌混合物可各、獨(dú)立地以約20-約55%重量的濃度存在于 益生菌組合物中。嗜酸乳桿菌(Moro) Hansen和Mocqu (LGG)、大腸桿菌Nissle 1917 (EcN) 和VSL#3 ?在益生菌組合物中的濃度的組合的實(shí)例列出于表1中。
[0046] 表1.益生菌細(xì)菌的濃度（以組合物的％重量計(jì)）
益生菌組合物的成分可通過常規(guī)方法混合在一起并形成例如片劑用于口服給予?；?者，成分可被混合在一起并放入明膠膠囊中。所公開的益生菌制劑也可含有常規(guī)食物補(bǔ)充 填充劑和增量劑例如米粉。便利地，益生菌制劑可以范圍從約5毫克每天至約50毫克每天的 劑量比率口服。
[0047] 所公開的益生菌組合物可配制為可食用的、化妝品用的或藥用產(chǎn)品。除了益生菌 細(xì)菌外，益生菌組合物還可包含一種或多種其它活性劑和/或化妝品可接受的賦形劑(在化 妝品組合物的情況下）、藥學(xué)上可接受的賦形劑(在藥用組合物的情況下）或充分可食用的 成分(在可食用的組合物的情況下）。一些益生菌組合物可進(jìn)一步包含一種或多種活性劑。 例如，一種或多種另外的活性劑可以是不拮抗形成所公開的益生菌組合物的細(xì)菌的其它益 生菌細(xì)菌。取決于制劑，細(xì)菌可作為純化的細(xì)菌、作為細(xì)菌培養(yǎng)物、作為細(xì)菌培養(yǎng)物的一部 分、作為已被后處理的細(xì)菌培養(yǎng)物單獨(dú)或與合適的載體或成分一起被加入。也可加入益生 J L 〇
[0048] 所公開的益生菌組合物也可被包含在各種可食用的產(chǎn)品，如乳制品、酸奶、凝乳、 奶酪(如，quark、奶油、加工的、軟的和硬的）、發(fā)酵乳、奶粉、乳基發(fā)酵產(chǎn)品、冰激凌、發(fā)酵谷 類基產(chǎn)品、乳基粉末、飲料、調(diào)味品和寵物食物中。術(shù)語"可食用的產(chǎn)品"在此以其最廣泛的 含義使用，包括以任何呈現(xiàn)形式的可被動(dòng)物攝取的任何類型的產(chǎn)品，但排除化妝品、藥品和 獸醫(yī)產(chǎn)品。其它可食用的產(chǎn)品的實(shí)例是肉制品（如，肝醬、法蘭克福香腸和意大利香腸或肉 涂味品(meat spreads))、巧克力涂味品、餡料(如塊菌(truf f Ie)、奶油)和糖霜、巧克力、糖 果(如，焦糖、糖果、軟糖或太妃糖）、烘焙食品（蛋糕、糕點(diǎn)）、醬汁和湯、果汁和咖啡增白劑。 本發(fā)明的組合物也可用作其它食品的成分。特別有用的可食用產(chǎn)品是功能性食品。
[0049] 因此，也公開了含有所公開的益生菌組合物以及其它可食用的成分的可食用的組 合物。術(shù)語"可食用的成分"指的是適合被動(dòng)物優(yōu)選地但不限于人、家畜或?qū)櫸飫?dòng)物食入即 用作食物的成分。
[0050] 通常，益生菌組合物如本文所公開的那些被考慮為膳食補(bǔ)劑。膳食補(bǔ)劑，也稱為食 物補(bǔ)劑或營養(yǎng)補(bǔ)劑，提供通常在正常食物中不能攝取的有益成分。主要地，膳食補(bǔ)劑被認(rèn)為 是食品，但有時(shí)將它們定義為藥物、天然健康產(chǎn)品或營養(yǎng)制品（nutraceutical product)。 如本文所用的，膳食補(bǔ)劑也包含營養(yǎng)制品。膳食補(bǔ)劑通常在〃柜臺上〃出售，即無需處方。所 公開的益生菌組合物的一些形式是膳食補(bǔ)劑。
[0051]如果益生菌組合物是膳食補(bǔ)劑，它可原樣給予，可與合適的可飲用的液體如水、酸 奶、奶或果汁混合，或可與固體或液體食物混合。在本文中，膳食補(bǔ)劑可以呈現(xiàn)片劑、丸劑、 膠囊、糖錠劑、顆粒劑、粉末劑、混懸劑、香囊劑(sachet )、錠劑、糖果、條塊(bar )、糖楽;的形 式和相應(yīng)的給予形式，通常呈單位劑量的形式。例如，包含益生菌組合物的膳食補(bǔ)劑可以片 劑、糖錠劑、膠囊或粉末劑的形式給予，在制備膳食補(bǔ)劑的常規(guī)方法中制備。
[0052] 形成所公開的益生菌組合物的細(xì)菌可呈活細(xì)胞或非活細(xì)胞的形式。在一些實(shí)施方 案中，嗜酸乳桿菌(Moro) Hansen和Mocqu和VSL#3 ?是非活的，而大腸桿菌Nissle 1917是 活的細(xì)胞。非活細(xì)胞可通過例如熱殺死的微生物或經(jīng)由暴露于改變的PH、超聲處理、輻射或 經(jīng)受壓力而殺死的微生物來制備。對于非活的細(xì)胞，產(chǎn)品制備更簡單，細(xì)胞可以容易地加入 到市售產(chǎn)品中且貯存的要求的限制比活細(xì)胞要小得多。
[0053] 用于益生菌組合物的細(xì)菌的量或濃度一般可以表示為組合物中每一菌株或菌株 的組合的菌落形成單位(cfu)的數(shù)量。一般來說，細(xì)菌的有效量可為高至足以以積極方式顯 著地改變待治療的病況，但低至足以避免嚴(yán)重副作用（以合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比）的、在合理的 醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)的量。益生菌細(xì)菌的有效量可由技術(shù)人員確定并將隨要實(shí)現(xiàn)的特定目標(biāo)、 待治療的患者的年齡和身體狀況、潛在病癥的嚴(yán)重程度、和最終制劑而變化。例如，細(xì)菌可 以約IO 5 cfu/g-約IO12 cfu/g的量，優(yōu)選地以約IO7 cfu/g-約IO11 cfu/g的量存在。術(shù)語〃菌 落形成單位〃（〃cfu〃)指在瓊脂平板上經(jīng)微生物計(jì)數(shù)所顯示的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。在一些益生菌 組合物中，益生菌組合物包含IO 7-IO1t3 cfu/g。
[0054] 用于所公開的益生菌組合物的細(xì)菌可通過例如在合適的培養(yǎng)基中和在合適的條 件下培養(yǎng)細(xì)菌而產(chǎn)生。細(xì)菌可單獨(dú)培養(yǎng)以形成純的培養(yǎng)物，或作為與其它微生物一起的混 合培養(yǎng)物培養(yǎng)，或通過分開培養(yǎng)不同類型的細(xì)菌，然后將它們以所需的比例合并而培養(yǎng)。培 養(yǎng)后，可回收細(xì)胞懸浮液并原樣使用或以所需的方式(例如通過濃縮或冷凍干燥)處理，以 進(jìn)一步用于制備產(chǎn)品。有時(shí)益生菌制劑可經(jīng)受固定化或封裝過程，以提高保存期。用于細(xì)菌 的固定化或封裝的幾種技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。
[0055] 嗜酸乳桿菌(Moro) Hansen和Mocqu (ATCC 53103)、大腸桿菌Nissle 1917和VSL# 3?可不僅在以單一組合物合并時(shí)有效，而且還當(dāng)以它們自身使用或以兩種或更多種不同 的組合物同時(shí)、順序或在某些時(shí)間段后分開給予時(shí)有效。
[0056] "益生菌"是當(dāng)以適量給予時(shí)賦予宿主有益健康作用的活的微生物。天然腸微生物 區(qū)系包含許多益生菌微生物。熱滅活的益生菌指已被加熱殺死的益生菌。
[0057] 術(shù)語組合物或物品中特定要素或組分的"重量份"，指用重量份表示的組合物或物 品中的所述要素或組分和任何其它要素或組分之間的重量關(guān)系。因此，在含有2重量份的組 分X和5重量份的組分Y的化合物中，X和Y以2:5的重量比存在，并以這樣的比例存在，而不管 化合物中是否包含另外的組分。
[0058] 如本文所用的，組分的"%重量"，除非另外指出相反，均基于其中包含所述組分的 制劑或組合物的總重量。因此，例如，20-55%重量濃度的組分意指該組分構(gòu)成其中包含所述 組分的組合物的總重量的20-55%。
[0059] 試劑盒 上述材料，以及其它材料，可以任何合適的組合包裝在一起，作為可用來實(shí)施或幫助實(shí) 施所公開方法的試劑盒。如果在給定的試劑盒中的試劑盒組分被設(shè)計(jì)且適合在所公開的方 法中一起使用時(shí)，則它是有用的。例如，公開了用于治療面臨HCC的風(fēng)險(xiǎn)或經(jīng)診斷患有HCC的 受試者的試劑盒，所述試劑盒包含熱滅活的嗜酸乳桿菌（Moro) Hansen和Mocqu (ATCC 53103)、活的大腸桿菌Nissle 1917和熱滅活的VSL#3?。
[0060] 方法 公開了治療肝細(xì)胞癌(HCC)的方法。所述方法包括口服給予面臨HCC的風(fēng)險(xiǎn)或經(jīng)診斷患 有HCC的受試者益生菌組合物。益生菌組合物可以任何有效的方案給予。例如，益生菌組合 物可每日給予。益生菌組合物可每日給予，持續(xù)至少一個(gè)月。受試者可被診斷患有HCC。受試 者可面臨HCC的風(fēng)險(xiǎn)。受試者可以是被診斷有乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或二者的受試 者。受試者可以是暴露于黃曲霉毒素BI (AFBl)的受試者。受試者可以是經(jīng)診斷患有酒精中 毒的受試者。
[0061 ]所述方法可進(jìn)一步包括在給予益生菌組合物之前診斷受試者患有HCC。所述方法 可進(jìn)一步包括在給予益生菌組合物之前，診斷受試者面臨HCC的風(fēng)險(xiǎn)。診斷受試者面臨HCC 的風(fēng)險(xiǎn)可包括診斷受試者有乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或二者。診斷受試者面臨HCC的風(fēng) 險(xiǎn)可包括診斷受試者已暴露于黃曲霉毒素BI (AFBl)。診斷受試者面臨HCC的風(fēng)險(xiǎn)可包括診 斷受試者患有酒精中毒。
[0062] 還公開了包括診斷受試者患有HCC或處于HCC的風(fēng)險(xiǎn)中和口服給予診斷為患有HCC 或處于HCC的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者益生菌組合物的方法。
[0063] 還公開了通過實(shí)施或準(zhǔn)備實(shí)施所公開的方法形成的混合物。例如，公開了包含熱 滅活的嗜酸乳桿菌(Moro) Hansen和Mocqu (ATCC 53103)、活的大腸桿菌Nissle 1917、熱 滅活的VSL#3 ?的混合物。所公開的益生菌制劑也可以是與例如食物、食物組分和常規(guī)食物 補(bǔ)充填充劑和增量劑例如米粉的混合物。
[0064] 每當(dāng)所述方法包括混合組合物或組分或試劑或使組合物或組分或試劑接觸時(shí)，實(shí) 施所述方法形成許多不同的混合物。例如，如果所述方法包括3個(gè)混合步驟，在這些步驟的 每一步驟之后形成獨(dú)特的混合物，如果所述步驟獨(dú)立進(jìn)行的話。此外，在所有的步驟完成時(shí) (而不管所述步驟是如何進(jìn)行的)形成混合物。本公開考慮通過實(shí)施所公開的方法獲得的這 些混合物以及含有任何所公開的試劑、組合物或組分的混合物(例如本文公開的）。
[0065]術(shù)語〃一天的治療〃、〃每日治療〃、〃每日給予〃和〃每日攝取〃可互換使用并意指在 治療期的每一天由患者攝取或給予患者的益生菌組合物的總劑量。如果治療由患者自身給 予，正確的劑量優(yōu)選在含有正確劑量的醫(yī)藥產(chǎn)品的適當(dāng)容器中提供。每日總劑量可便利地 分成兩個(gè)或更多個(gè)含有在當(dāng)天中待攝取或給予的正確劑量的容器，例如作為當(dāng)天的早餐和 最后一餐?；蛘?，患者或醫(yī)務(wù)人員可從包含益生菌組合物的較大容器中測量每次給予的正 確劑量。
[0066]術(shù)語病況或事件的"減少風(fēng)險(xiǎn)"指以下二者之一或二者：（a)與病況或事件發(fā)生或 存在的標(biāo)準(zhǔn)或參照可能性或概率比較，減少病況或事件發(fā)生或存在的可能性或概率和(b) 與病況或事件的標(biāo)準(zhǔn)或參照量、大小、濃度、嚴(yán)重性、比率、階段、進(jìn)展和/或其它量度比較， 減少或改善病況或事件(如果其發(fā)生的話)的量、大小、濃度、嚴(yán)重性、比率、階段、進(jìn)展和/或 其它量度。例如，減少HCC的風(fēng)險(xiǎn)指以下二者之一或二者：（a)如果HCC發(fā)生的話，減少HCC發(fā) 生的可能性或概率和(b)減少或改善HCC的嚴(yán)重性或階段的量、大小、嚴(yán)重性、生長速率、階 段、進(jìn)展和/或其它量度。與風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的任何一種作用或作用的組合可被認(rèn)為是降低病況或 事件的風(fēng)險(xiǎn)。例如，如果HCC-旦發(fā)生，其生長速率低于生長的標(biāo)準(zhǔn)或參照速率(如未治療的 HCC受試者的生長速率），則HCC的風(fēng)險(xiǎn)可被認(rèn)為已經(jīng)減少。作為另一個(gè)實(shí)例，如果治療的無 HCC的受試者以比標(biāo)準(zhǔn)或參照比率更低的比率發(fā)生HCC，則HCC的風(fēng)險(xiǎn)可被認(rèn)為已經(jīng)減少。
[0067] 術(shù)語"口服完全營養(yǎng)補(bǔ)劑"指可口服提供營養(yǎng)完全的營養(yǎng)給受試者的產(chǎn)品和制劑； 即是說，可用作營養(yǎng)的唯一來源的產(chǎn)品和制劑。
[0068] 術(shù)語"高"、"更高"、"增加"、提高"或"升高"指例如與對照比較，增加至基礎(chǔ)或參照 水平以上。術(shù)語"低"、"更低"、"減少"或"降低"指例如與對照比較，降低至基礎(chǔ)或參照水平 以下。
[0069] 術(shù)語"減少"意指活性、量、大小、重量、比率、階段、嚴(yán)重性、表達(dá)等的降低或減少。 這可以是活性、量、大小、重量、比率、階段、嚴(yán)重性、表達(dá)等的完全減少，或活性、量、大小、重 量、比率、階段、嚴(yán)重性、表達(dá)等的部分減少。減少可與對照或與標(biāo)準(zhǔn)水平比較。減少可以是 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、1