Bifidobacterium bifidum)、嬰兒雙岐桿菌 (B. infantis)、長雙岐桿菌（B. longum)、短雙岐桿菌（B.breve)、青春雙岐桿菌 (B.adolescentis)、乳雙歧桿菌（Bifidobacterium lactis)、保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus .Bulgaricus)、嗜酸乳桿菌（L.acidophilus)、干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)、鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus )、嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus)；
[0028] 優(yōu)選地，所述益生菌粉劑由以下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成:植物乳桿菌30-40 份，兩岐雙岐桿菌25-35份，乳雙歧桿菌20-30份，嗜熱鏈球菌10-20份，保加利亞乳桿菌12-15份，干酪乳桿菌8-10份，鼠李糖乳桿菌5-10份；
[0029]更優(yōu)選地，所述植物乳桿菌粉劑是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌按按常 規(guī)方法制備的，其中的冷凍保護劑以含有抗凍蛋白的動物或植物為原料，經(jīng)高壓脈沖電場 提取、超聲波輔助微波提取和復(fù)配酶酶解而制得的，可有效提高植物乳桿菌粉劑在冷凍干 燥過程活菌存活率；
[0030]優(yōu)選地，所述保護劑的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙冬青、鯊魚皮膠原蛋 白分別清洗、瀝干，按質(zhì)量比8-10: 3-5: 2-4均勻混合，加入混合物料質(zhì)量0.1-1倍的pH值為 3.8-4.5的乳酸潤濕3-811，于-18-22°(：冷凍1-211后立即進行粉碎，冷凍料層厚度3-5〇11，粉 碎物粒徑0.5-3mm，接著加入粉碎物質(zhì)量10-20倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫 下在電場強度25-35kV/cm，脈沖時間300-500ys，脈沖頻率200-300HZ條件下進行高壓脈沖 電場處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進行微波輻照提取15-20min，同時 在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1-2%的復(fù)配 酶，于45-55 °C酶解30-50min;酶解液過濾、濾液濃縮、低溫粉碎至粒徑為0.1-0.3mm即得保 護劑；
[0031]所述復(fù)配酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3-5:2-4:1-3: 1-3:1-2均勻混合；
[0032]更優(yōu)選地，所述微波輻照提取為間歇式提取，即微波輻照10s，間隔20s。
[0033] 本發(fā)明另一目的是提供上述益生性干紅葡萄酒的制備方法:包括以下步驟：
[0034] 1)按照配方，稱取各組份原料，首先將玫瑰花分成花瓣，放入裝有0.8-1.2%碳酸 氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min，瀝干，置微波干燥中于功率 3_5kW、料層厚度2-4cm、50-70°C、干燥4-6min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為8-12%的絲膠肽溶 液中10-15min，于-18-22°C冷凍30-50min后立即進行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎物粒 徑0.3-0.5_，接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫下在電 場強度25-35kV/cm，脈沖時間300-500ys，脈沖頻率200-300HZ條件下進行高壓脈沖電場處 理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進行微波輻照提取15-20min，同時在功率 200-300W，頻率30-40KHZ條件下進行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1.5-2.5%的混合 酶，于40-50 °C酶解30-50min得玫瑰花酶解液；
[0035] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3-5:2-4:1-3:1-2均勻 混合；
[0036] 2)取干紅葡萄酒質(zhì)量的20-30 %，控制溫度40-45°C，邊攪拌邊加入改性膳食纖維、 蜂蜜、乳糖和玫瑰花酶解液，充分溶解20_40min，加入益生菌粉劑質(zhì)量的50-60 %恒溫發(fā)酵 3_5h，接著以0.8-1.0°C/min的速率升溫至50-55°C，加入益生菌粉劑質(zhì)量的40-50%恒溫發(fā) 酵1.5-3.5h，最后以0.6-0.8°C/min的速率降溫至40-45°C，繼續(xù)發(fā)酵0.5-lh，發(fā)酵液依次經(jīng) 40目、80目雙聯(lián)過濾器過濾，濾液經(jīng)超高壓均質(zhì)機于2-4°C、140-160MPa均質(zhì)，均質(zhì)液經(jīng)130-135°C超高溫瞬時滅菌4-6s，最后依次經(jīng)微濾、循環(huán)超濾濃縮至固形物含量為20-30%得玫 瑰干紅生物活性濃縮液；
[0037] 3)將剩余干紅葡萄酒和玫瑰干紅生物活性濃縮液均勻混合，向其中加入過氧乙酸 溶液，使過氧乙酸濃度為320-380ppm，混合液于功率200-400W，頻率30-40KHZ條件下進行超 聲波處理5-10min，控制混合液溫度為25-35Γ，然后通過連續(xù)式高壓脈沖處理室處理，靜 置、過濾即得益生性干紅葡萄酒；
[0038]進一步地，所述過氧乙酸溶液的質(zhì)量百分比濃度為10-30% ;
[0039] 進一步地，所述高壓脈沖電場處理條件為電場強度25-30kV/cm、脈沖數(shù)40-50。
[0040] 本發(fā)明植物乳桿菌(1^〇1：(^&(3；[11118口1&1^&1'11111)乂!1于2015年11月30日保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC NO. 11763,保藏 地址為：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編：100101。 [0041 ] 植物乳桿菌益生特性如下：
[0042]本發(fā)明所提供的植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件 下存活，在1%膽鹽培養(yǎng)4小時后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC NO. 11763降解亞硝酸 鹽速度快，分解能力達到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃 度在4.8mg/kg以下；CGMCC如.11763在發(fā)酵6011小時后，對膽固醇降解率可達到64.76%。 CGMCC NO · 11763黏附能力測定的自凝集率為95 · 71 %。
[0043] 植物乳桿菌CGMCC N0.11763對膽固醇降解能力研究和測定：
[0044] 取lml CGMCC N0.11763母液接種于10mL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基（膽固醇含量 0. 1mg/ml，pH 6.2)中，37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用，以接入lmL無菌水的MRS 膽固醇培養(yǎng)基為對照，取以上培養(yǎng)不同時間的菌液樣品及對照液各lml，9000r/min，4°C下 離心10min，得到發(fā)酵上清液，鄰苯二甲醛法測定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液 0 . lml于相應(yīng)的試管中，加冰醋酸0.3ml，lmg/ml的鄰苯二甲醛0.15ml，緩緩加入濃硫酸 1. 〇ml，混合均勻。室溫靜置10min，于550nm下測吸光值）。每一處理3個重復(fù)，以同樣方法制 作膽固醇標準曲線，計算上清液中膽固醇含量及降解率，結(jié)果見表1。可知，CGMCCN0.11763 對膽固醇有很好的降解作用，在發(fā)酵60h小時后，降解率可達到64.76%。
[0045] 表1對膽固醇的降解情況。
[0046]
[0047」 桓物乳什菌CGMCC M). 11763菌株的衂膽鹽試驗：
[0048] 取CGMCCN0.11763菌液lmL接種菌種于含有不同膽鹽（含量梯度為0.0%、0.2%、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液體培養(yǎng)基(？!1=6.4)，置于37°(：下分別培養(yǎng)0、2、411， 每個處理3個重復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布，于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄計算平 板上的菌數(shù)個數(shù)。結(jié)果見表2?？芍摼谀扄}濃度為1 %處理4h后菌的生長量依然達到 0· 59±0·92 X 107(cfu/ml)，有很好的耐膽鹽能力。
[0049] 表2耐膽鹽能力檢測[(土s) X 107cfu/ml]
[0050]
[0051 ] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸試驗
[0052] 取HLX37母液按lml接種菌種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液體培養(yǎng)基，置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h，每一處理3個重復(fù)。各取lml樣品菌液于 9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋溶液，取0 . lml稀釋液于MRS中涂布，于37 °C生化培養(yǎng)箱中倒 置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄平板上的菌落個數(shù)。結(jié)果見表3。說明該菌具有 很強的耐酸能力。
[0053]表3 耐酸能力檢測[(土s) X 107cfu/ml]
[0054]
[0055] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的黏附能力測定
[0056] 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基）、大腸桿菌DH5a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液，分別置于3000r/min、4°C下離心10min，收集菌泥，分別用pH = 7.0的無菌磷酸鹽緩沖液 (PBS)洗滌菌泥2次（即在菌落中加入PBS，震蕩混合均勻后，置于3000r/min、4°C下離心 lOmin，收集菌體）。自凝集率（％ :用無菌的roS將菌泥CGMCCN0.11763制成在波長600nm處 的吸光值為〇. 4±0.1 (A0)的懸浮菌液及菌懸液，靜置24h后測定吸光值A(chǔ)24，自凝集率（％ ) 公式為(A0-A24)/A0。；他凝集率（％ :將CGMCC N0.11763和大腸桿菌DH5a的懸菌液調(diào)節(jié)成 在波長600nm處的吸光值為0.6 ± 0.1 (A0)的混合懸浮菌液。靜置24H后測定吸光值A(chǔ)24，他凝 集率（％ )公式為（A0-A24)/A0。測定結(jié)果見表5,可知CGMCC N0.11763的自凝集率為 95.71%，有很強的黏附能力。
[0057]表4黏附能力表
[0058]
123456 植物乳桿菌CGMCC N0.11763的菌株生理特性 2 所述植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC N0.11763,保藏地 址為：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編：100101。 3 該菌株特點如下:在顯微鏡下觀察，該菌株為短桿狀，革蘭氏染色呈陽性，無鞭毛， 不產(chǎn)芽孢;在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表面光滑，致密，形態(tài)為圓形，邊緣較整齊。 4 理化特征為:過氧化氫酶(-)，明膠液化(-)，吲哚實驗( + )，運動性(-)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (_)，亞硝酸鹽還原(_)，發(fā)酵產(chǎn)氣(_)，產(chǎn)硫化氫氣體(_)，pH4.0 MRS培養(yǎng)基中生長(+ )。經(jīng)過 生理生化鑒定為為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)，命名為植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)XH〇 5 菌株能夠在57°C下生長良好，葡萄糖耐受能力為275g/L。 6 本發(fā)明植物乳桿菌由采集人李建樹，從新疆維吾爾族老鄉(xiāng)家中酸奶中分離得到， 采集時間2015年6月2日。
[0065]本發(fā)明植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件下存活，在 1 %膽鹽培養(yǎng)4小時后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸鹽速度快， 分解能力達到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在4.8mg/ 1^以下；061(^_.11763在發(fā)酵6011小時后，對膽固醇降解率可達到64.76%。061(^ NO. 11763黏附能力測定的自凝集率為95.71 %，菌株能夠在57°C下生長良好，葡萄糖耐受能 力為 275g/L。
[0066] 有益效果：
[0067] 本發(fā)明以干紅葡萄酒和玫瑰花為原料，首先采用超聲清洗對玫瑰花進行殺蟲滅 卵、殺滅微生物、去除農(nóng)藥殘留和重金屬離子等，大大提高了益生性干紅葡萄酒的食品安全 性;采用微波干燥在使得玫瑰花膨化干燥的同時主要是滅酶、固色，最大限度地保留了玫瑰 花的天然色澤，經(jīng)微波固色后的玫瑰花天然色澤在后續(xù)的加工過程中非常穩(wěn)定，不會變色、 褪色，色澤非常鮮艷;在含有絲膠肽的水溶液中浸泡復(fù)水，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成 的玫瑰花活性物質(zhì)的損失，提高了玫瑰花有效成分的提取率，同時也為后續(xù)變溫益生菌發(fā) 酵奠定了堅實基礎(chǔ);將高壓脈沖電場、微波、超聲、