H,s, -OCH3),3. 82 (2H,d,J= 6. 9Hz, -OCH2-),3. 80 (6H,s, 2X-OCH3),2. 86 (4H,brs,-CH 2CH2-),I. 40-1. 72 (9H,m), 0. 95 (6H,t,J= 6. 9Hz, 2X-CH3) 〇
[0166] 實(shí)施例19 2-(環(huán)戊氧基）-5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-1, 3-二甲氧基苯（CTX-18) 的制備
[0167]
[0168]參照CTX-12的合成方法，在50mL單頸瓶中加入鼓槌石斛素30mg(0. 094mmol)， K2C0326mg(0. 188mmol)，加DMF 3mL。滴加溴代環(huán)戊烷30 y L，80°C加熱回流8h。冷卻至室溫， 加20ml乙酸乙酯混溶，水洗5次，每次10mL。有機(jī)層用無(wú)水Na2SO 4干燥，減壓濃縮。產(chǎn)物 過(guò)硅膠柱純化，PE: EA (15:1-5:1)洗脫，得黃色晶體13. Omg，產(chǎn)率35. 8 %。經(jīng)鑒定為2-(環(huán) 戊氧基）_5_(3, 4-二甲氧基苯乙基）_1，3-二甲氧基苯。
[0169] ESI-MS m/z :404. 2 [M+NHJ+, 387. 2 [M+H]+,相對(duì)分子質(zhì)量 386。
[0170] 1H-匪R(300MHz,CDCl3)S:6. 81 (1H,d,J= 8. 1Hz,H-5'），6. 73(1H,d,J= I. 8, 8. 1Hz,H-6'），6. 67 (1H,d,J=I. 8Hz,H-2'），6. 37 (2H,s,H-3, 5)，4. 76 (1H,t,J= 5. 4Hz ,-0CH-),3. 88 (3H,s, -OCH3),3. 85 (3H,s, -OCH3),3. 80 (6H,s, 2X-OCH3),2. 86 (4H,brs, -CH2C H2-),I. 91，I. 67,I. 58(8H，m)。
[0171] 實(shí)施例20 2-芐基-5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-1,3-二甲氧基苯（CTX-19)的制 備
[0172]
[0173]參照CTX-12的合成方法，在50mL單頸瓶中加入鼓槌石斛素30mg(0. 094mmol)， K2C0326mg (0. 188mmol)，加DMF 3mL。滴加溴芐30 y L，80°C加熱回流8h。冷卻至室溫，加20ml 乙酸乙酯混溶，水洗5次，每次10mL。有機(jī)層用無(wú)水Na2SO 4干燥，減壓濃縮。產(chǎn)物過(guò)硅膠柱純 化，PE: EA (15:1-5:1)洗脫，得黃色晶體37. 3mg，產(chǎn)率96. 8 %。經(jīng)鑒定為2-芐基-5- (3, 4-二 甲氧基苯乙基）-1，3-二甲氧基苯。
[0174] ESI-MS m/z: 426. 2 [M+NHJ+，409. 2 [M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量 408。
[0175]1H-NMR (300MHz, CDCl3) 8：7. 5 2-7. 3 I (5H, m, ArH) , 6. 81 (1H, d, J = 8. 1Hz, H-5'），6. 71 (1H, d, J = I. 8, 8. 1Hz, H-6'），6. 67 (1H, d, J = I. 8Hz, H-2'），6. 37 (2H, s ，H-3, 5)，5. 00 (2H，s，-CH2-)，3. 88 (3H，s，-OCH3)，3. 86 (3H，s，-OCH3)，3. 81 (6H，s，2 X -OCH3)， 2. 87 (4H，s，-CH2CH2-)。
[0176] 表1本發(fā)明制得的鼓槌石斛素及鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物
[0177]
[0179] 實(shí)施例21鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物對(duì)A P誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn) 研究
[0180] 2.1細(xì)胞培養(yǎng)和給藥
[0181] PC12細(xì)胞（腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤，購(gòu)自中科院上海細(xì)胞研究所）在濕度為95 %空氣 并且含有5% 0)2的37°C環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液為添加青霉（lOOU/ml)，鏈霉素（100 yg/ ml)和10% FBS的DMEM。當(dāng)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞長(zhǎng)滿后，細(xì)胞以1. 5*104個(gè)/孔接種在96孔板 上作為后續(xù)正常組、模型組和給藥組使用。12h后，細(xì)胞換用含1 % FBS DMEM的培養(yǎng)基進(jìn)行 培養(yǎng)，給藥組先用不同濃度的化合物（終濃度為50, 25, 10 y M)預(yù)孵育0. 5h，然后給藥組和 模型組分別加入A 0 25 35 (購(gòu)自sigma公司）（終濃度為10 y M)，正常組不加藥物和A 0 25 35 培養(yǎng)，空白組只加培養(yǎng)液（青霉（l〇〇U/ml)，鏈霉素（lOOμg/ml)和10%FBS的DMEM)，均培 養(yǎng) 24h。
[0182] 2. 2細(xì)胞活力檢測(cè)
[0183] 細(xì)胞活力通過(guò)MTT比色法來(lái)進(jìn)行定量檢測(cè)。在藥物作用結(jié)束后給藥組、模型組和 正常組和空白組分別加入MTT溶液（終濃度0. 5mg/ml)，37°C下培養(yǎng)4小時(shí)。然后吸掉上清 液，細(xì)胞內(nèi)的甲瓚用IOOyL DMSO進(jìn)行溶解。每孔的吸光度用1500酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific Co.)在570nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)。分別計(jì)算正常組、模型組和給藥組的細(xì)胞存活 率，結(jié)果見表2。
[0184] 細(xì)胞存活率=(測(cè)試組OD值-空白組OD值V(正常組OD值-空白組OD 值）*100%，其中測(cè)試組指給藥組或模型組。對(duì)于正常組，細(xì)胞存活率為100%。
[0185] 表2鼓槌石斛素及鼓槌石斛素聯(lián)芐衍生物對(duì)AP誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié) 果
[0188] 對(duì)合成的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物進(jìn)行抗A P誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性的保護(hù)作用 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這些化合物大多具有神經(jīng)保護(hù)作用，優(yōu)于或相當(dāng)于鼓槌石斛素和模型組，其中 CTX-6、CTX-7、CTX-8、CTX-17、CTX-18和CTX-19的神經(jīng)保護(hù)作用優(yōu)于鼓槌石斛素和模型組， CTX-7、CTX-8、CTX-18和CTX-19在50 y M時(shí)細(xì)胞存活率均大于70% (模型組為53. 82% )， 且CTX-7保護(hù)作用最強(qiáng)，25 yM，50 y M的細(xì)胞存活率分別達(dá)到80. 12%和100. 78%，是一種 理想的神經(jīng)保護(hù)化學(xué)實(shí)體，對(duì)治療阿爾茨海默病有重要意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物或其在藥學(xué)上可接受的鹽、水合物，所述的鼓槌石斛 素聯(lián)芐類衍生物如結(jié)構(gòu)式I所示：其中：R1Sc = 0、CH2、NH、S = O或共價(jià)鍵；R2為烷基、苯基、取代苯基、苯環(huán)取代的C13 烷基、C5-C6環(huán)烷基、含1個(gè)或多個(gè)0、S、N的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物，其特征在于：R C = 0、CH 2或 共價(jià)鍵；R2為C i 7烷基、苯基、鹵素取代的苯基、苯環(huán)取代的C i 3烷基、C5-C6環(huán)烷基、含1個(gè)N 的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物，其特征在于：R C = 0時(shí)，R 2為 C1 7烷基、苯基、氯取代的苯基、苯環(huán)取代的C i 3烷基、含1個(gè)N的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)； R1SCH2時(shí)，R2選自C17烷基； R1為共價(jià)鍵時(shí)，R 2為苯基、氯取代的苯基、苯環(huán)取代的C i 3烷基、C 5-C6環(huán)烷基、含1個(gè)N 的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物，其特征在于：所述的鼓槌石斛素 聯(lián)芐類衍生物選自：4_ (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯、4-(3, 4-二甲 氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基丙酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基 丁酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基異丁酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙 基）-2, 6-二甲氧基苯基戊酸酯、4- (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基-3-甲基丁 酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-2-丙基戊酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯 乙基）-2, 6-二甲氧基苯基苯甲酸酯、4- (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基-4-氯 苯甲酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-3-苯基丙酸酯、4-(3,4_二甲氧 基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-吡啶甲酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基 苯基異煙酸甲酯、5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2-乙氧基-1，3-二甲氧基苯、5-(3, 4-二甲氧 基苯乙基）_1，3_二甲氧基_2_丙氧基苯、2_ 丁氧基_5_(3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二 甲氧基苯、5- (3, 4- >甲氧基苯乙基）異丁氧基-1，3- >甲氧基苯、5- (3, 4- >甲氧基苯 乙基）-2-異戊氧基-1，3_二甲氧基苯、5_(3, 4_二甲氧基苯乙基）-2-((2-乙基己基）氧 基）_1，3_二甲氧基苯、2_ (環(huán)戊氧基）_5_ (3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二甲氧基苯、2_辛 基_5_ (3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二甲氧基苯D5. 權(quán)利要求1-4任一一項(xiàng)所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物的制備方法，其特征在于包 括：先合成鼓槌石斛素，再對(duì)鼓槌石斛素的4位羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到鼓槌石斛素聯(lián)芐類 衍生物； 鼓槌石斛素的合成方法為：以丁香醛為原料與乙酸酐反應(yīng)得到4-甲?；?, 6-二甲氧 基苯基乙酸酯，通過(guò)原得到4-羥甲基-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，再與二氯亞砜 反應(yīng)得到4-氯甲基-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，進(jìn)一步與三苯基膦反應(yīng)得到（4-乙酰氧基 3, 5-二甲氧基芐基）-三苯基氯化磷，（4-乙酰氧基3, 5-二甲氧基芐基）-三苯基氯化磷 與3, 4-二甲氧基苯甲醛反應(yīng)得到4-[ (Z/E)-3, 4-二甲氧基苯乙烯基）]-2, 6-二甲氧基苯 基乙酸酯，4- [ (Z/E) -3, 4-二甲氧基苯乙烯基）]-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯催化還原得到 4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，最后得到鼓槌石斛素：鼓槌石斛素的4位羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物的線路為：其中：R1SC = 0、CH2、NH、S = O或共價(jià)鍵；R2為烷基、苯基、取代苯基、苯環(huán)取代的C13 烷基、C5-C6環(huán)烷基、含1個(gè)或多個(gè)0、S、N的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)；X為OH、Br或Cl。6. 權(quán)利要求1-4任一一項(xiàng)所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物或其在藥學(xué)上可接受的鹽、 水合物在制備神經(jīng)保護(hù)藥物中的用途。7. 權(quán)利要求1-4任一一項(xiàng)所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物或其在藥學(xué)上可接受的鹽、 水合物在制備治療阿爾茨海默病藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物，所述的鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物如結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示，其中：R1為C＝O、CH2、NH、S＝O或共價(jià)鍵；R2為烷基、苯基、取代苯基、苯環(huán)取代的C1-3烷基、C5-C6環(huán)烷基、含1個(gè)或多個(gè)O、S、N的5-6元不飽和雜環(huán)基團(tuán)。本發(fā)明還公開了一種簡(jiǎn)單高效的制備鼓槌石斛素聯(lián)芐類衍生物的制備方法，以及在制備神經(jīng)保護(hù)藥物中和制備治療阿爾茨海默病藥物中的用途。本發(fā)明的鼓槌石斛素4-O-取代的聯(lián)芐類衍生物對(duì)Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡有顯著的保護(hù)作用，是潛在治療AD的新化學(xué)實(shí)體。？。
【IPC分類】C07C69/24, C07C43/205, C07C67/08, A61P25/00, C07C69/612, C07C69/78, C07C41/01, C07C43/235, C07D213/803, C07D213/79, A61P25/28
【公開號(hào)】CN105175262
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】馮鋒, 曲瑋, 關(guān)麗, 柳文媛, 李凌超, 郝艷峰, 陳壘
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年8月7日