nceModel201型紫外檢測(cè)器；AC-120、AE-163 ;電子天平 2. 2. 2試藥：甲醇為色譜醇；其它試劑均為分析純； 脫水穿心蓮內(nèi)酯（中國藥品生物制品檢定所0854-9601)。
[0028] 2. 2. 3色譜條件 色譜柱：KromasilC18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠）；流動(dòng)相：甲醇-水（55 :45);檢測(cè) 波長：250nm;柱溫：35°C;流速：1.Oml/min。該色譜條件下脫水穿心蓮內(nèi)酯與其它組分均 能達(dá)到良好分離，陰性對(duì)照色譜不干擾脫水穿心蓮內(nèi)酯的測(cè)定。
[0029] 2. 2. 4對(duì)照品溶液的制備 取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品，精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，加60%甲醇制成每 lml含15yg，即得。
[0030] 2. 2. 5供試品溶液的制備 選擇用流動(dòng)相提取，考察了提取時(shí)間，分別提取10、20、30、45、60min，發(fā)現(xiàn)提取30min即可。取片劑4-6g片，研細(xì)，取粉末lg，精密稱定，至50ml容量瓶中，加流動(dòng)相至近刻度，超 聲提取30min，冷卻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，過濾，濾液再經(jīng)微孔濾膜（0. 45ym)濾過，取續(xù) 濾液，即得。
[0031] 2. 2. 6波長的選擇 選擇250nm作為檢測(cè)波長。
[0032] 2. 2. 7線性關(guān)系 取對(duì)照品l〇mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。精密吸取上述溶 液適量配制成濃度為分別為4. 705、9. 410、18. 82、37. 64、56. 46、94. 10yg/ml對(duì)照品溶液， 各進(jìn)樣20yl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果見表1。以對(duì)照品濃度作橫坐標(biāo)（X)，峰面 積作為縱坐標(biāo)（Y)得線性回歸方程：Y= 6. 78X103+2. 272X104Xr=0. 9999表明脫水穿心蓮 內(nèi)酯在0.0941~1.882yg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，結(jié)果見表1。
[0033] 表1:線性曲線測(cè)定結(jié)果
2. 2. 8精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液（37. 64yg/ml)，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，RSD< 2%，結(jié)果見表 2〇
[0034] 表2 :精密度試驗(yàn)結(jié)果
2. 2. 9穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液(批號(hào)：第1批）分別于0、l、2、3、4、8、24h進(jìn)樣20y1，測(cè)定峰面 積值，結(jié)果見表3,RSD< 2%，可見供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0035] 表3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2. 2. 10重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批供試品(批號(hào)：第1批)，平行稱取6份，照樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果見 表4,RSD% < 2%，重現(xiàn)性良好，方法可行。
[0036] 表4重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2. 2. 11回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取同一批已知含量的片劑樣品(批號(hào)：第1批)，分別加一定量脫水穿 心蓮內(nèi)酯對(duì)照品，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5,結(jié)果表明，本法具有良好 的回收率。
[0037] 表5回收率測(cè)定結(jié)果
穿心蓮藥材中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定 取穿心蓮藥材lg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，加入流動(dòng)相近刻度，超聲處理30min， 冷卻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，過濾，濾液再經(jīng)微孔濾膜（0. 45ym)濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0038] 按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果為L73mg/g。
[0039] 2. 2. 12樣品測(cè)定 按上述同法制備供試品樣品共10批，分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液20y1，按上述 色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，十批樣品測(cè)定結(jié)果見表6。
[0040] 表6樣品測(cè)定結(jié)果
含量限度的擬訂 穿心蓮原藥材測(cè)定結(jié)果脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為1. 73mg/g，根據(jù)十批實(shí)測(cè)結(jié)果，限度暫 擬訂為本品每片含穿心蓮以脫水穿心蓮內(nèi)酯（C42H62016)計(jì)，不得少于0. 30mg 三、制劑中蘆丁含量測(cè)定方法研究 3. 1實(shí)驗(yàn)條件的選擇 參照《中國藥典》2010年版一部測(cè)定含蘆丁的制劑及中藥材的含量測(cè)定方法。
[0041] 3. 2方法學(xué)考察及樣品的測(cè)定 儀器、樣品 紫外-可見分光光度計(jì)（島津UV-2550)工作站：UVProbe2. 33 樣品：分批號(hào)為第1批、第2批、第3批 對(duì)照品溶液的制備精密稱取在120°C減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品適量，加60%乙 醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得。
[0042] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1. 0ml，2. 0ml，3. 0ml，4. 0ml，5. 0ml，分 別置25ml量瓶中，各加10%亞硝酸鈉溶液0. 3ml，混勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液 0. 3ml，混勾，放置6分鐘，加4 %氫氧化鈉溶液4ml，搖勾，加30 %乙醇至刻度，搖勾，放置15 分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄VA)試驗(yàn)，在 510nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法。 取重量差異項(xiàng)下的本品，除去包衣，研細(xì)，取〇.2g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入甲醇 25ml，搖勻，加熱回流1小時(shí)，取出，冷卻至室溫，濾過，濾紙連同殘?jiān)偌蛹状?5ml，加熱回 流1小時(shí)，取出，冷卻，濾過，合并濾液，殘?jiān)眉状?5ml分次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干， 殘?jiān)?0%乙醇溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻。精密量取lml，照標(biāo) 準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自"分別置25ml量瓶中"起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供 試品溶液中蘆丁的重量，計(jì)算，即得。
[0043] 3. 3線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液1. 0ml，2. 0ml，3. 0ml，4. 0ml，5. 0ml，分 別置25ml量瓶中，各加10%亞硝酸鈉溶液0. 3ml，混勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液 0. 3ml，混勾，放置6分鐘，加4 %氫氧化鈉溶液4ml，搖勾，加30 %乙醇至刻度，搖勾，放置15 分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄VA)試驗(yàn)，在 510nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定結(jié)果見下 表1。
[0044] 表1線性試驗(yàn)結(jié)果表
結(jié)果表明，蘆丁在濃度4.2呢/ml~ 21.0|ag/ml與吸收度有良好的線性關(guān)系。
[0045] 3. 4精密度試驗(yàn)精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml約含20yg的溶 液，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，由蘆丁吸收度計(jì)算RSD(%)。測(cè) 定結(jié)果見下表2 : 表2精密度試驗(yàn)結(jié)果表
結(jié)果表明，精密度試驗(yàn)RSD為0. 22%，方法精密度良好。
[0046] 3. 5重現(xiàn)性試驗(yàn) 取130401批樣品適量，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶 液，由吸收度代入線性方程計(jì)算含量，并由含量計(jì)算RSD(%)。測(cè)定結(jié)果如下表3: 表3重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果表
測(cè)定結(jié)果，6份樣品含量為36. 2 mg/片~36. 6 mg/片，平均含量為36. 4mg/片，其RSD 為0.40%，方法重現(xiàn)性良好。
[0047] 3. 6方法穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品適量，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制成供試品溶液，間隔 一定時(shí)間測(cè)定其吸收度，并計(jì)算RSD (%)，結(jié)果如下表4 : 表4方法穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表
結(jié)果表明，供試品浴'撒仕4/」、叮円測(cè)侍吸嘆皮穩(wěn)疋，6 /」、叮/S測(cè)侍吸嘆皮明顯K降，表明供試品溶液應(yīng)臨用現(xiàn)配。
[0048] 3. 7回收率試驗(yàn)采用加樣回收法。精密稱取已測(cè)定含量的樣品（130401批)適 量，加入蘆丁對(duì)照品溶液lml(1. 05mg/ml)，加甲醇24ml，加熱回流1小時(shí)，取出，冷卻至室 溫，濾過，濾紙連同殘?jiān)偌蛹状?5ml，加熱回流1小時(shí)，取出，冷卻，濾過，合并濾液，殘?jiān)?用甲醇15ml分次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中 并稀釋至刻度，搖勻。精密量取lml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自"分別置25ml量瓶中" 起，依法測(cè)定吸收度，代入線性方程，計(jì)算供試品溶液中蘆丁的含量，并計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié) 果見下表5 : 表5回收率試驗(yàn)結(jié)果表
結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)回收率為97. 71%~100. 86%，平均回收率為99. 54%，RSD為1. 28%，回 收率良好。
[0049] 3. 8陰性干擾試驗(yàn)取缺扭肚藤陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法提 取，測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照樣品在蘆丁出峰位置無吸收峰，表明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無干 擾，分析條件專屬性強(qiáng)。
[0050]3. 9、樣品的含量測(cè)定取重量差異項(xiàng)下的本品，除去包衣，研細(xì)，取0.2g，精密稱 定，置圓底燒瓶中，加入甲醇25ml，搖勻，加熱回流1小時(shí)，取