制何首烏多糖及其在保肝中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種制何首烏多糖及其在保肝中的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 何首烏為寥科植物何首烏（PolygonummultiflorumThunb.)的干燥塊根，是常用 藥食兩用傳統(tǒng)中藥大品種，收載于歷年版《中國(guó)藥典》；現(xiàn)代藥理研究表明，何首烏具有免疫 調(diào)節(jié)、延緩衰老、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗菌、造血和改善心血管功能等作用。根據(jù)其炮 制方法不同，又有生何首烏與制何首烏之分。生何首烏味苦、澀，性平，歸心、肝、大腸經(jīng)，具 有潤(rùn)腸通便、截瘧解毒之效，用于腸燥便秘、癰瘦瘓病、高血脂等癥。制何首烏味苦、甘、澀， 性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、益精血、壯筋骨、烏須發(fā)之效，可用于肝腎精血虧虛、頭昏目 眩、須發(fā)早白、腰膝酸軟等癥。其所含的化學(xué)成分主要為二苯乙烯類、蒽醌類、磷脂類及多糖 等；其中水溶性多糖的含量高達(dá)約30%，是何首烏的主要有效成分之一。
[0003] 何首烏本身為藥食兩用藥材，自古至今被認(rèn)為具有增強(qiáng)補(bǔ)益的作用。現(xiàn)代藥理研 究發(fā)現(xiàn)，何首烏引起的肝損害有累積效應(yīng)。2014年7月15日，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局 發(fā)布《關(guān)于加強(qiáng)含何首烏保健食品監(jiān)管有關(guān)規(guī)定的通知》，下調(diào)保健食品中的何首烏規(guī)定用 量，規(guī)定保健食品中生何首烏每日用量不得超過1. 5g，制何首烏每日用量不得超過3. 0g; 保健功能包括對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能的產(chǎn)品，應(yīng)取消該保健功能或者配方中去除 何首烏。
[0004] 目前，有關(guān)何首烏臨床安全有效劑量還有待進(jìn)一步研究，在尚缺乏對(duì)何首烏安全 性系統(tǒng)研究的前提下，對(duì)何首烏進(jìn)一步深入研究，開發(fā)新的產(chǎn)品及其功用具有很大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中何首烏研究及其利用不足，目的是提 供一種制何首烏多糖及其在保肝中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種制何首烏多糖，由如下方法制備得到：
[0008] S1.取制何首烏藥材（優(yōu)選為制何首烏藥材飲片），粉碎，過4~6目篩；加入95% 乙醇回流脫脂3~6h;脫脂2~3次，趁熱過濾得濾液；
[0009]S2.濾液中再加入80 %乙醇回流提取1~3h，除去小分子糖，趁熱過濾，藥渣揮 干；
[0010] S3.取揮干好的藥渣，冷水浸泡1~2h，加入水，回流提取80~lOOmin;提取2~ 3次，合并提取液，離心取上清液，減壓濃縮至0. 5~1. 0kg/L(每升溶液里含制何首烏飲片 0. 5 ~1. 0kg);
[0011] S4.再將95%乙醇加入濃縮液中調(diào)至乙醇終濃度為80%，室溫條件下，醇沉7~ l〇h，抽濾得沉淀，加入無水乙醇洗滌沉淀，50~70°C減壓干燥1~3h，得到制何首烏多糖。
[0012] 其中，優(yōu)選地，步驟S1所述過篩是過5目篩。
[0013] 優(yōu)選地，步驟S1所述95%乙醇的體積用量是制何首烏藥材飲片質(zhì)量的4倍。
[0014] 優(yōu)選地，步驟S1所述回流脫脂4h。
[0015] 優(yōu)選地，步驟S2所述80%乙醇的體積用量是制何首烏藥材飲片質(zhì)量的5倍。
[0016] 優(yōu)選地，步驟S2所述回流提取2h。
[0017] 優(yōu)選地，步驟S3所述冷水浸泡lh。
[0018] 優(yōu)選地，步驟S3所述水的體積用量是藥渣質(zhì)量的12倍。
[0019] 優(yōu)選地，步驟S3所述回流提取90min。
[0020] 優(yōu)選地，步驟S3所述減壓濃縮至0? 5kg/L。
[0021] 優(yōu)選地，步驟S4所述醇沉?xí)r間為8h。
[0022] 優(yōu)選地，所述無水乙醇的體積用量是沉淀質(zhì)量的4倍。
[0023] 優(yōu)選地，步驟S4所述減壓干燥的條件是60°C減壓干燥lh。
[0024] 本發(fā)明上述制備的制何首烏多糖對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，可改善化學(xué)性損傷導(dǎo)致的 肝細(xì)胞腫脹、炎性的浸潤(rùn)。因此，本發(fā)明制備的制何首烏多糖在保肝中的應(yīng)用，也應(yīng)在本發(fā) 明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0025] 具體地，所述制何首烏多糖是在預(yù)防和/或治療肝損傷方面的應(yīng)用。
[0026] 優(yōu)選地，所述肝損傷是指化學(xué)性肝損傷。
[0027] 更優(yōu)選地，所述肝損傷是指四氯化碳造成的肝損傷。
[0028] 具體地，上述應(yīng)用是指制何首烏多糖在降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT)和/或谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)方面的應(yīng)用。優(yōu)選地，是在降低或抑制由四氯化碳造成的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和/或谷草轉(zhuǎn)氨 酶升高方面的應(yīng)用。
[0029] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0030] 本發(fā)明制備得到一種制何首烏多糖，對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，可改善化學(xué)性損傷導(dǎo) 致的肝細(xì)胞腫脹、炎性的浸潤(rùn)，具體地是能夠降低或抑制由四氯化碳造成的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和/ 或谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，具有很好的保肝降酶作用。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的 限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
[0032] 除非特別說明，以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購(gòu)。
[0033] 實(shí)施例1制何首烏多糖的制備
[0034] 1、制何首烏多糖的提取和純化
[0035] (1)取制何首烏藥材飲片適量，粉碎，過5目篩；加入4倍量的95%乙醇回流脫脂 4h;脫脂2次，趁熱過濾；
[0036] (2)濾液中再加入5倍量的80%乙醇回流提取2h，除去小分子糖，趁熱過濾，藥渣 揮干后備用；
[0037] (3)取已處理好的藥渣，冷水浸泡lh，加入12倍量的水回流提取90min;提取3次， 合并提取液，離心取上清液，減壓濃縮至〇. 5kg/L;
[0038] (4)再加95%乙醇于濃縮液中調(diào)至乙醇最終為80%乙醇，室溫條件下，醇沉8h，抽 濾得沉淀，加入4倍量的無水乙醇洗滌沉淀，60°C減壓干燥lh，即得制何首烏多糖。
[0039] 實(shí)施例2制何首烏多糖的保肝實(shí)驗(yàn)研究
[0040] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0041] (1)試劑
[0042] 制何首烏多糖（由實(shí)施例1制備）；聯(lián)苯雙酯滴丸（批號(hào)13010103,北京協(xié)和藥 廠）；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST、總蛋白TP試劑盒（批號(hào)20131011，購(gòu)自南京 建成生物工程研究所）。
[0043] ⑵實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0044] 60只健康清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重200±20g，由廣東省中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(粵）2011-0029。
[0045] (3)實(shí)驗(yàn)儀器
[0046]LEICADMI3000B熒光顯微鏡（德國(guó)卡爾?蔡司），AY120電子分析天平（日本 島津），EonBio-Tek微孔板分光光度計(jì)（廣州云星科學(xué)儀器有限公司），SIGMA3-30K高 速臺(tái)式冷凍型離心機(jī)（廣州飛迪生物科技有限公司），MS-XSCIL0GXE漩渦混合儀（美國(guó) 萊伯特），QYC-200恒溫培養(yǎng)搖床（上海?，斣囼?yàn)設(shè)備有限公司），THZ-103B恒溫培養(yǎng)搖床 (上海一恒科學(xué)儀器有限公司），DK-S26電熱恒溫水浴鍋（上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司）， Eppendorf移液槍（北京華匯通科技發(fā)展有限公司），EP管（上海申翔化學(xué)試劑有限公司）， 5ml-次性使用人體靜脈采血管（湖南平安醫(yī)械科技有限公司），XB110GRANT全自動(dòng)雪花 制冰機(jī)（美國(guó)格蘭特），DW-HW328-86°C超低溫冷凍儲(chǔ)存箱（中科美菱）。
[0047]2、急性肝損傷模型的建立
[0048] (1)取60只SD雄性大鼠，隨機(jī)分成以下6組，每組10只：
[0049] 1)聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照給藥組（150mg/kg);
[0050] 2)制何首烏多糖給藥低劑量組（200mg/kg);
[0051] 3)制何首烏多糖給藥中劑量組（400mg/kg);
[0052] 4)制何首烏多糖給藥高劑量組（800mg/kg);
[0053] 5)正常對(duì)照組（給予等體積生理鹽水）；
[0054] 6)肝損傷模型組（給予等體積生理鹽水）。
[0055] (2)上述6組大鼠每天灌胃1次，給藥體積10mL/kg，連續(xù)灌胃7d，正常組與模型組 給予等體積生理鹽水。末次給藥lh后，除正常對(duì)照組腹腔注射等體積花生油外，其余各組 分別ip30%CC14花生油溶液（注射量1. 5mL/kg)，造模后禁食不禁水16h。
[0056] 3、檢測(cè)指標(biāo)
[0057](1)血清ALT，AST測(cè)定
[0058] 各組大鼠10%水合氯醛（3. 5mL/kg)麻醉，腹主動(dòng)脈取血，4°C、3500r/min離心 15min，離心后取血清，測(cè)定ALT，AST活性。
[0059](2)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0060] 采用SPSS17. 0軟件，數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
[0061] 4、結(jié)果如表1所示
[0062] 表1制何首烏多糖對(duì)血清ALT，AST及TP水平的影響（I士s，n= 10)
[0063]
[0064] 由表1可知，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中ALT，AST水平顯著升高 (P〈0. 01)，TP含量顯著降低（P〈0. 05)，提示本實(shí)驗(yàn)造模成功。
[0065] 與模型組比較，聯(lián)苯雙酯對(duì)照組大鼠血清ALT，AST水平顯著降低，TP含量升高，差 異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0066] 與模型組比較，制何首烏多糖高、中、低劑量組的大鼠TP含量均顯著升高 (P〈0. 01)，血清ALT，AST有顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0067] 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了本發(fā)明的制何首烏多糖具有良好的保肝降酶的作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種制何首烏多糖，其特征在于，由如下方法制備得到：51. 取制何首烏藥材，粉碎，過4~6目篩；加入95%乙醇回流脫脂3~6h;脫脂2~3 次，趁熱過濾得濾液；52. 濾液中再加入80%乙醇回流提取1~3h，除去小分子糖，趁熱過濾，藥渣揮干；53. 取揮干好的藥渣，冷水浸泡1~2h，加入水，回流提取80~IOOmin;提取2~3次， 合并提取液，離心取上清液，減壓濃縮至〇. 5~I.Okg/L，得濃縮液；54. 再將95%乙醇加入濃縮液中調(diào)至乙醇終濃度為80%，室溫條件下，醇沉7~10h，抽 濾得沉淀，加入無水乙醇洗滌沉淀，50~70°C減壓干燥1~3h，得到制何首烏多糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制何首烏多糖，其特征在于，步驟Sl所述95%乙醇的體積用 量是制何首烏藥材飲片質(zhì)量的4倍。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制何首烏多糖，其特征在于，步驟Sl所述回流脫脂4h。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制何首烏多糖，其特征在于，步驟S2所述80%乙醇的體積用 量是制何首烏藥材飲片質(zhì)量的5倍。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制何首烏多糖，其特征在于，步驟S3所述水的體積用量是藥 渣質(zhì)量的12倍。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制何首烏多糖，其特征在于，所述無水乙醇的體積用量是沉 淀質(zhì)量的4倍。7. 權(quán)利要求1~6任一所述的制何首烏多糖在保肝中的應(yīng)用。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，是在預(yù)防和/或治療肝損傷方面的應(yīng)用。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述應(yīng)用，其特征在于，所述肝損傷是指化學(xué)性肝損傷。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，所述肝損傷是指四氯化碳造成的肝損傷。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種制何首烏多糖及其在保肝中的應(yīng)用。該制何首烏多糖的制備方法為：S1制何首烏藥材粉碎后過4～6目篩，加95%乙醇回流脫脂3～6h；脫脂2～3次，趁熱過濾；S2濾液中加80%乙醇回流提取1～3h，除去小分子糖，趁熱過濾，藥渣揮干；S3藥渣入冷水浸泡1～2h，加水回流提取80～100min；提取2～3次，合并提取液，離心取上清，減壓濃縮至0.5～1.0kg/L；S4將95%乙醇加入濃縮液中調(diào)至乙醇終濃度為80%，室溫醇沉7～10h，抽濾，無水乙醇洗滌沉淀，50～70℃減壓干燥1～3h，得制何首烏多糖。該制何首烏多糖可抑制四氯化碳造成的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，有很好的保肝降酶作用。
【IPC分類】A61P1/16, A61K31/715, A61K36/704
【公開號(hào)】CN105168389
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】梁生旺, 王淑美, 閻二磊, 任晶
【申請(qǐng)人】廣東藥學(xué)院
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年9月29日