一種α-羥丁酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了提供一種α-羥丁酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，由彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2組成；其中試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、金屬離子絡(luò)合物、α-羥丁酸脫氫酶反應(yīng)底物、表面活性劑1、防腐劑1；試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態(tài)、激活劑、表面活性劑2、防腐劑2。本發(fā)明中的試劑盒采用雙試劑模式，檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)限低、線性測(cè)試范圍寬、精確度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好、抗干擾性強(qiáng)?？梢杂糜诎胱詣?dòng)、全自動(dòng)生化分析儀，所需檢測(cè)儀器（生化分析儀）在各大醫(yī)院和檢驗(yàn)中心普遍使用。適用于臨床上的推廣應(yīng)用，特別對(duì)于急診能實(shí)現(xiàn)快速診斷。
【專利說(shuō)明】一種a-羥丁酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種a-羥丁酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒及其制 備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] a-輕丁酸脫氫酶（alpha-hydroxybutyratedehydrogenase,a-HBDH)是心肌酶 譜中的一種酶，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)普遍存在。a-羥丁酸脫氫酶廣泛分布于各臟器和組織中， 主要分布于心肌紅細(xì)胞、白細(xì)胞及腎臟等。與血清G0T、LDH、肌酸激酶（CK) 一樣廣泛存在于 腦細(xì)胞中。a-羥丁酸脫氫酶活力與LDH活性的變化呈對(duì)應(yīng)關(guān)系，主要代表了LDH1和LDH2 等富含H亞基的同工酶的活力。因此常用a-羥丁酸脫氫酶來(lái)測(cè)量血清中LDH1的活性。 a-羥丁酸脫氫酶活性的增高主要見于急性心肌梗塞、惡性貧血、溶血性貧血、骨骼肌損傷、 急性肝炎、白血病、傳染性單核細(xì)胞增多癥及惡性腫瘤。a-羥丁酸脫氫酶活性的降低主要 見于免疫抑制劑、抗癌劑、遺傳性變異的LDH-H亞型欠缺。血清a-羥丁酸脫氫酶能間接反 映心肌損傷和集體缺氧的嚴(yán)重程度，對(duì)診斷心肌疾病和肝病有一定意義，對(duì)指導(dǎo)治療和判 斷預(yù)后有一定幫助。臨床上需要檢測(cè)的人群有腹脹、腹痛、心肌梗死、貧血、白血病、肝硬化 等。
[0003] a-羥丁酸脫氫酶目前已有多種定性和定量的檢測(cè)方法可用?，F(xiàn)有檢測(cè)方法包含 紫外動(dòng)力學(xué)法、速率法、酶學(xué)比色法、連續(xù)檢測(cè)法等。其基本原理是采用a-酮丁酸為底物 于340nm測(cè)定NADH吸光度變化率，根據(jù)變化率計(jì)算出酶的活性。血清a-羥丁酸脫氫酶的 測(cè)定是通過(guò)它催化的反應(yīng)速度測(cè)量的，這與以免疫實(shí)驗(yàn)將酶作為蛋白質(zhì)測(cè)定比較，其優(yōu)點(diǎn) 是快速、敏感、特異和低消耗。但在實(shí)際測(cè)定工作中，酶催化濃度測(cè)定結(jié)果是相對(duì)的，它依據(jù) 測(cè)定原理、單位定義和相應(yīng)的測(cè)定條件等。如是否選擇了合適的底物、輔因子、活化劑、變構(gòu) 劑、指示酶、輔助酶、緩沖液、各種抑制劑及其濃度，反應(yīng)混合液的最適PH、溫度等。例如測(cè)定 時(shí)需要酶和底物在一定溫度下作用一段時(shí)間，在此期間，溫度可能會(huì)使酶失活，正是由于這 些原因，使得a-羥丁酸脫氫酶的測(cè)定質(zhì)量控制遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他生化項(xiàng)目。如存在著試劑 昂貴，穩(wěn)定性差，測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確度低，靈敏度低，抗干擾性弱，操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)時(shí)間短，穩(wěn)定性 好、重復(fù)性好、精確度高、檢測(cè)靈敏度高、線性測(cè)試范圍寬、抗干擾性強(qiáng)的a-羥丁酸脫氫酶 檢測(cè)試劑盒，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明的第一方面提供一種a-羥丁酸脫氫酶 檢測(cè)試劑盒，由彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2組成；其中試劑R1的組分包括：生物緩沖液 1、金屬離子絡(luò)合物、a-羥丁酸脫氫酶反應(yīng)底物、表面活性劑1、防腐劑1 ;試劑R2的組分包 括：生物緩沖液2、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態(tài)、激活劑、表面活性劑2、防腐劑2。
[0006] 優(yōu)選的，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨 酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合；更優(yōu)選Tris緩沖 液，其原因是Tris緩沖液堿性較強(qiáng)，可調(diào)節(jié)PH范圍廣，對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小，不與鈣、 鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、Tris 緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合。
[0007] 優(yōu)選的，所述R1試劑中，生物緩沖液1的濃度為20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5 ;R2 試劑中，生物緩沖液2的濃度為20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5。
[0008] 優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明對(duì)所述試劑R1中 的生物緩沖液1進(jìn)行了改進(jìn)，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、 果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸 的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，生物緩沖液1的pH值為7. 2 - 7. 6。
[0009] 優(yōu)選的，各組分在生物緩沖液1中的濃度為：
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種a -羥丁酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，由彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2組成；其中試 劑R1的組分包括：生物緩沖液1、金屬離子絡(luò)合物、a -羥丁酸脫氫酶反應(yīng)底物、表面活性劑 1、防腐劑1 ;試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態(tài)、激活劑、表 面活性劑2、防腐劑2。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自 磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種 或多種的組合；所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸 緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，生物緩沖液1的濃 度為20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5 ;R2試劑中，生物緩沖液2的濃度為20?200mmol/L， PH7. 0-7. 5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，金屬離子絡(luò)合物選自 乙二胺四乙酸二鈉、氨基三乙酸、二亞乙基三胺五乙酸中的一種或多種的組合，濃度為1? 5mmol/L〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，a _羥丁酸脫氫酶反應(yīng) 底物為a -酮丁酸，濃度為2?10mmol/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，所述表面活性劑1為椰 子油脂肪酸二乙醇酰胺，濃度為5?55mmol/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述防腐劑1選自疊氮鈉、硫柳汞、 ProClin300中的一種；所述R2試劑中，所述防腐劑2選自疊氮鈉、硫柳汞、ProClin300中的 一種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R2試劑中，所述煙酰胺腺嘌呤二 核苷酸還原態(tài)的濃度為0. 5?2mmol/L ;所述R2試劑中，所述激活劑為磷脂酰膽堿，濃度為 2 ?20mmol/L〇
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括 下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸 鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，生物緩沖液1的pH值為7. 2 - 7. 6。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1?9任一權(quán)利要求所述的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在 于，具體包括如下步驟： (1) 按照比例分別配置試劑R1、試劑R2,按照需要的a -羥丁酸脫氫酶參考校準(zhǔn)品濃度 將相應(yīng)的a-羥丁酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品分別加入校準(zhǔn)品中，制備得到含有不同濃度a-羥丁酸 脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品的一組校準(zhǔn)品，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2) 將待測(cè)樣本與試劑R1和R2按一定比例混合，使其充分反應(yīng)； (3) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)吸光度變化率A A/min ; (4) 根據(jù)吸光度變化率計(jì)算出樣本中a_羥丁酸脫氫酶的活性。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK104458617SQ201410736308
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】周歡 申請(qǐng)人:重慶中元生物技術(shù)有限公司