專利名稱：含有超順磁晶體的涂覆聚合物顆粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及涂覆磁性聚合物顆粒的制備方法。
背景技術(shù)：
磁性聚合物顆粒在多個醫(yī)療和生物化學(xué)領(lǐng)域中具有通常的用途，例如，作為遞送藥 物產(chǎn)品、用于診斷目的、用于分離和合成目的的運輸載體。為了執(zhí)行這些功能，此類顆 粒依靠它們的磁性。例如，在診斷測定應(yīng)用中，將磁場施用于含有與磁性聚合物顆粒結(jié) 合的分析物的樣品，使得無需使用離心或過濾即可分離所述分析物，以及例如，在治療 應(yīng)用中，對患者施用磁場可以用來將攜帶藥物的磁性聚合物顆粒靶向期望的身體部位。
磁性在本文中是指聚合物顆粒含有超順磁晶體。因此，所述磁性聚合物顆粒是磁性 可置換的，但并非可永久磁化的。許多制備磁性聚合物顆粒的方法是已知的，大量這些 方法包括從預(yù)先形成的磁性氧化鐵例如磁鐵礦制備含磁赤鐵礦或磁鐵礦的聚合物顆粒。 一些所涉及的方法被描述于US-A-4，654,267 (Ugelstad)，其內(nèi)容被并入本文作為參考。
隨著能夠測量非常小的磁性變化的裝置的開發(fā)以及納米技術(shù)的成長，可以預(yù)見，在 將來，磁性顆粒使用者將需要更小的顆粒，用其來進行它們的測定等等。而且，所述磁 性顆粒將需要被操縱，以攜帶能夠容易與標(biāo)記偶聯(lián)的活性基團，以提供生化方法的理想 固相。

發(fā)明內(nèi)容
我們已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過使表面官能化的、磁性聚合物顆粒與聚異氰酸酯/二醇單 體的組合反應(yīng)，以產(chǎn)生"涂覆"磁性聚合物顆粒，可以產(chǎn)生具有特別有用的表面特性的 磁性顆粒。這些顆粒容易與標(biāo)記進一步偶聯(lián)，以提供用于各種領(lǐng)域的固相載體。
因此，從第一方面看，本發(fā)明提供含有超順磁晶體的涂覆聚合物顆粒的制備方法， 所述方法包括使表面官能化的、含有超順磁晶體的、直徑在0.5pm以下的聚合物顆粒與 至少一種聚異氰酸酯如二異氰酸酯和至少一種、優(yōu)選兩種二醇反應(yīng)。
優(yōu)選的二醇是聚乙二醇或是分子式為HO((CH2)mO)nH的二醇(其中n是1到15的 整數(shù)，例如2到10,優(yōu)選2到4，并且m是2到6的整數(shù)，優(yōu)選2到3，最優(yōu)選2)。 在僅使用一種二醇的情況下，優(yōu)選聚乙二醇，例如聚乙二醇300、 400、 500或600。
用在本發(fā)明的方法中的聚合物顆粒可以是任何適宜大小的、任選多孔的聚合物顆粒， 其具有官能化表面，例如在US-A-4,654，267中一般性描述的Ugelstad顆粒。合適的顆粒
還可以從Admtech獲得，例如Carboxyl-Admtech 0212顆粒，其含有羧酸表面涂層。
在聚合物顆粒上的表面官能度優(yōu)選是能夠一一任選伴隨著活化一一與聚異氰酸酯反 應(yīng)的基團，以將所述異氰酸酯共價結(jié)合到所述表面。最優(yōu)選地，所述表面是胺或羧基官 能化的。
所述聚合物顆粒優(yōu)選由乙烯的聚合物例如苯乙烯、丙烯酸酯和/或甲基丙烯酸酯的組 合制備。該高分子材料可以任選地交聯(lián)，例如通過引入交聯(lián)劑，例如諸如共聚單體如二 乙烯基苯(DVB)或乙二醇二甲基丙烯酸酯。包含DVB的顆粒被優(yōu)選。
所需的交聯(lián)劑(例如共聚單體)的適當(dāng)量對于普通技術(shù)人員將是熟知的。優(yōu)選地， 所述聚合物是交聯(lián)的苯乙烯聚合物(例如苯乙烯-二乙烯基苯聚合物，其通過使用含硝基 共聚單體例如硝基苯乙烯和隨后的還原被表面官能化)或通過使用含環(huán)氧基的共聚單體
(例如甲基丙烯酸縮水甘油酯)和隨后的胺化(例如，通過與乙二胺反應(yīng))而官能化的 交聯(lián)的(甲基)丙烯酸酯聚合物。
在本發(fā)明的方法中使用的聚合物顆粒中的超順磁晶體可以具有能夠以超順磁晶體形 式沉積在聚合物顆粒上或者如果所述顆粒是多孔的沉積在其孔內(nèi)的任何材料。磁性氧化 鐵例如磁鐵礦或磁赤鐵礦是優(yōu)選的；然而，如果需要，所述晶體可以具有混合的金屬氧 化物或者其它磁性材料。結(jié)晶磁性材料存在的總量一般在20%以上，優(yōu)選在25%以上， 期望大于或等于30% (按重量計，例如高達85 wt呢或至少50 wt%，例如30 wt免到80 wt%)。在涂覆顆粒的總干重的基礎(chǔ)上，基于Fe (或者在非氧化鐵磁性材料的情況下的 等價金屬)重量，計算百分比。
在所述聚合物顆粒中磁性晶體的較高濃度對于本文中所要求保護的小顆粒是必需 的，以便它們在分離步驟期間可以被磁體成功地吸引。使珠粒容易移向磁體的另一種方 法是使它們的一部分剩磁。
通過運行磁滯曲線，由振動樣品磁強計，可以測量剩磁的程度。通過測量在從例如 -1.5特斯拉達到+ 1.5特斯拉并返回的不同場強下所述顆粒的磁化強度，可以得到該曲線。 如果最大磁化強度被稱為Ms并且橫截Y軸的絕對值(零場強)被稱為Mr，則比率Mr/Ms 將表明所述顆粒的剩磁程度。
Mr/Ms比率低于0.15的顆粒對于大多數(shù)應(yīng)用可以被認(rèn)為是超順磁的。對于從-1.5到 + 1.5特斯拉，時間間隔應(yīng)該是IO分鐘。具有低剩磁值的顆粒通常具有增加的向磁體的曳 力，原因在于聚集，但它們之間的力很小，以至于這并不影響樣品洗滌。
多孔聚合物顆粒可以通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在它們的孔中沉積磁性顆粒。作為進一步的可能 性，多孔聚合物顆?？梢詮南趸揭蚁┖虳VB制備，并且磁性材料被引入。氨基苯乙烯， 尤其是4-氨基苯乙烯用作攜帶氨基的高分子材料的制備中的單體或共聚單體是優(yōu)選的。 該單體或共聚單體的使用消除了聚合后硝化和還原反應(yīng)的必要。而且，通過該方法提供 的涂層的可預(yù)測性質(zhì)(均一性)越多，將被應(yīng)用的可靠涂層越多。
聚合物顆粒可以被形成，其攜帶表面官能化，或者可選地，聚合物材料的官能化可 以在聚合之后發(fā)生，例如通過所形成的硝基基團的硝化和隨后還原成側(cè)鏈胺基；或者直
接胺化，例如通過用氨基乙醇處理。
根據(jù)本發(fā)明的聚合物顆粒將具有500nm以下的尺寸(即直徑)，例如通常在100 nm 到400 nm之間，例如150 nm至U 250 nm。
通常，當(dāng)被修正到2.7pm的平均顆粒直徑時(即，表面積乘以2.7/MD，其中MD 是按微米計的平均直徑)，所使用的顆粒將具有至少15m々g的表面積(通過BET氮吸 附法測量)，并且更優(yōu)選至少30m2/g，例如高達700mVg。以類似比例衡量，顆?？左w 積優(yōu)選為至少0.1 mL/g。
典型地，所述聚合物顆粒在它們被涂覆之前是球形的并且基本上是單分散性的，并 且特別優(yōu)選地，在它們被涂覆后保持球形和基本上單分散性。
基本上單分散性是指，對于眾多顆粒(例如至少100，更優(yōu)選至少1000，例如全部)， 所述顆粒具有20%以下的變異系數(shù)(CV)，例如15%以下，優(yōu)選12%以下，更優(yōu)選11% 以下，還更優(yōu)選10%以下，以及最優(yōu)選不大于約8%，例如2到5%。 CV按百分比確定 如下
100x標(biāo)準(zhǔn)偏差 LV - 平灼值
其中平均值是平均顆粒直徑，而標(biāo)準(zhǔn)偏差ii藉直徑的標(biāo)準(zhǔn)偏差。CV優(yōu)選在主要眾
數(shù)上計算，即通過將單峰分布曲線擬合到檢測的粒度分布而計算。因此，在計算時，在 眾數(shù)大小之下或之上的一些顆粒可以被打折扣，所述計算可以例如基于總顆粒數(shù)(可檢 測顆粒數(shù))的約90%。這樣的CV確定在Coulter LS 130粒度分析器上可進行。
磁性聚合物顆粒與聚異氰酸酯的反應(yīng)產(chǎn)生聚合物涂層。當(dāng)顆粒是多孔時，則所得到 的"涂覆"顆粒具有相對于多孔原材料而言降低的孔隙率。令人驚奇地，我們發(fā)現(xiàn)，超 順磁晶體似乎催化聚合反應(yīng)，使得涂層優(yōu)先在它們的附近形成。
在另一種優(yōu)選的實施方式中，通過一種或多種(例如l、 2或3種)聚異氰酸酯和一 種或多種(例如2、 3或4種)二醇形成涂覆聚合物。優(yōu)選地， 一種聚異氰酸酯應(yīng)當(dāng)被使 用，例如一種二異氰酸酯。可選地，緊密相關(guān)的聚異氰酸酯的混合物可以被使用(例如 Desmodur)。
典型的可被使用的聚異氰酸酯包括亞甲基二異氰酸酯、1，6-己二異氰酸酯、2，4-二異 氰酸酯甲苯(2,4-TDI)(和它們的異構(gòu)體或混合物)、異佛爾酮二異氰酸酯(IPDI)、 4,4'-氧代 雙(異氰酸苯酯)、4，4'-二苯基甲烷二異氰酸酯(MDI)、 MDI和基于MDI的低聚物的混合物 (例如DesmodurVL)、 2,4-二苯基二異氰酸酯、亞甲基雙環(huán)己基二異氰酸酯(H,2MDI)、苯 撐二異氰酸酯(p-PDI)、反式-環(huán)己垸-1,4-二異氰酸酯(CHDI)、 1,6-己烷二異氰酸酯 (D1CH)、 1，5-萘二異氰酸酯(NDI)、對四甲代苯二甲撐二異氰酸酯(p-TMXDI)或間四甲代 苯二甲撐二異氰酸酯(m-TMXDl)。
特別優(yōu)選的異氰酸酯是MDI或基于它的聚異氰酸酯(例如，Desmodur) 。 Desmodur 包含MDI，以及其含有具有CH2-異氰酸苯酯殘基的MDI的低聚物。Desmodur因此是多 種衍生自MDI的聚異氰酸酯的混合物。樣品構(gòu)成可以是
4，4-亞甲基雙(異氰酸苯酯)40-50%
4，4-亞甲基雙(異氰酸苯酯)+異氰酸芐酯20-25%
4,4-亞甲基雙(異氰酸苯酯)+2異氰酸芐酯10%
4,4-亞甲基雙(異氰酸苯酯)+3異氰酸芐酯2%。 (在類似這個的反應(yīng)中，產(chǎn)物還可以含有一些2-異構(gòu)體)。該化合物由Shell以商標(biāo) 名Caradate禾口由Huntsman以商標(biāo)名Hylene禾口 Rubinate出售。
優(yōu)選地，應(yīng)使用兩種二醇。當(dāng)使用兩種二醇時，所述二醇優(yōu)選地以0.5:1到1:0.5的 比例被使用，更優(yōu)選地，0.8:1到l:0.8。優(yōu)選地，沒有一種二醇以超過二醇混合物的90 mol% 的量被使用。
優(yōu)選的二醇包括二甘醇、四甘醇和聚乙二醇例如PEG300、 400或600。優(yōu)選的二醇 組合是二甘醇和四甘醇。
在涉及聚異氰酸酯的涂布反應(yīng)期間，如果在第一階段所述聚異氰酸酯過量(例如相 對于任何二醇)，這是優(yōu)選的。在該涂布過程步驟中僅使用聚異氰酸酯在本發(fā)明的范圍 之內(nèi)。這被認(rèn)為最小化在反應(yīng)期間膠凝發(fā)生的可能性。在初始涂布反應(yīng)中使用大量過量 聚異氰酸酯的情況下，在第二階段中使涂覆顆粒與進一步的二醇(一種或多種)(例如 上面所述的二醇)反應(yīng)則可能是必需的，以與任何未反應(yīng)的異氰酸酯基團反應(yīng)。在初始 涂布反應(yīng)僅使用聚異氰酸酯的情況下，其后所得到的顆粒與至少一種二醇反應(yīng)是需要的。
在這樣的實施方式中，這樣的二醇優(yōu)選是聚乙二醇。PEG二醇的長鏈允許在顆粒涂 覆表面之間形成大小相當(dāng)?shù)倪B接體，并因此使得與親合配體例如鏈霉抗生物素蛋白更容 易地反應(yīng)。
因此，使所述顆粒與聚異氰酸酯隨后是二醇反應(yīng)——即逐步法一一以實現(xiàn)涂布也在 本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
因此，通常，所述涂布反應(yīng)可以通過用聚異氰酸酯和二醇(一種或多種)浸漬多孔 磁性聚合物顆粒實現(xiàn)，例如通過使用這些的溶液(例如在有機溶劑例如甲醇或二甘醇二 甲醚中)或通過混合顆粒在有機溶劑中的分散體和液體二醇/聚異氰酸酯混合物。聲波處 理可被用于改善浸漬，并且所述反應(yīng)可以通過升高溫度例如到50-100'C而被加速。通過 應(yīng)用低壓，所使用的任何溶劑可以被抽提。
通常，磁性聚合物顆粒的用途例如它們用作診斷工具，要求適當(dāng)程度的親電性，以 便它們可以充分參與偶聯(lián)以及在生物介質(zhì)中普遍的含水系統(tǒng)中的其它反應(yīng)。
當(dāng)所述涂層的總體極性是期望的親電性時，含有疏水部分的一些涂層可以被摻入， 以將親電性程度調(diào)整到期望水平。通過這種方式，本發(fā)明允許供應(yīng)具有廣泛極性的有用 的診斷工具和其它工具。
如果需要，所述涂覆磁性聚合物顆粒的表面可以被進一步官能化，例如通過偶聯(lián)藥 物分子、報告標(biāo)記(例如發(fā)色團、熒光團、酶或放射性標(biāo)記)、或配體(例如抗體或抗 體片段、金屬離子配合劑、特異性結(jié)合配對的成員(例如生物素或鏈霉抗生物素蛋白)、 寡肽、寡核苷酸或寡糖)。
此類偶聯(lián)可以是直接或間接的(并因此可以包括或可以不包括偶聯(lián)劑的使用，以在
顆粒和偶聯(lián)到其上的物質(zhì)之間形成連接體)，并且可以是生物可降解的或非生物可降解 的。如果磁性聚合物顆粒將被用于活性化合物的耙向釋放，則生物可降解偶聯(lián)可以是期 望的。因此，在涂布被實現(xiàn)之后，所述涂層的側(cè)鏈基團可以被操縱，以提供合適的官能 度(例如環(huán)氧基、羥基、氨基等官能度)，用于此類物質(zhì)的附著。
官能化的涂覆磁性聚合物顆?？杀唤Y(jié)合于親合配體，該親合配體的性質(zhì)將基于其對 特定分析物的親合性而選擇，所述分析物在樣品中存在或不存在有待確定。親合分子因 此可以包括任何能夠被連接到磁性探針的分子，所述磁性探針也能夠特異識別特定分析 物。親合配體從而包括單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段、核酸、寡核苷酸、蛋白質(zhì)、 寡肽、多糖、糖、肽、編碼肽的核酸分子、抗原、藥物和其它配體。合適的親合配體的 例子在公開的文獻中是可得的并且是熟知的。進一步的結(jié)合對、二級親合配體以及本領(lǐng) 域中常規(guī)的連接基團的使用在本文中不再進一步討論，盡管應(yīng)該理解，如果需要，此類 物質(zhì)與本發(fā)明的顆粒一起使用是可能的。
從進一步的方面看，本發(fā)明提供了本發(fā)明的顆粒在合成、提取或測定中的應(yīng)用，特 別是在核酸檢測中的應(yīng)用。
通過使涂層表面與化合物例如甲基丙烯酸酐反應(yīng)，也可以實現(xiàn)引入可與例如丙烯酸 聚合的乙烯基。例如，已經(jīng)與二醇反應(yīng)過的涂覆顆?？赡軘y帶羥基官能度，其將容易與 甲基丙烯酸酐反應(yīng)，使得將乙烯基引入到聚合物表面。
如上所述，偶聯(lián)到所述顆粒的外部物質(zhì)的性質(zhì)可以根據(jù)其結(jié)合特定目標(biāo)材料的能力 而選擇。核酸檢測通常包括使用核酸探針探測被認(rèn)為含有目標(biāo)核酸的樣品，所述核酸探 針含有特異識別例如與目標(biāo)核酸序列雜交的核酸序列，以便核酸親合配體和目標(biāo)核酸組 合產(chǎn)生雜交層。本發(fā)明的適當(dāng)官能化的顆粒，例如攜帶鏈霉抗生物素蛋白的顆粒，非常 適合核酸檢測。
結(jié)合到鏈霉抗生物素蛋白顆粒的生物素化單鏈寡核苷酸探針可被用于分離序列特異 性DNA。通過將合適量的顆粒與過量的生物素化探針混合，生物素化探針被結(jié)合到所述 顆粒上。然后，顆粒/探針在雜交緩沖液例如SSPE或SSC中，在適于探針和DNA的長 度和序列的條件下與DNA樣品溫育。利用所述顆粒的磁性，將過量和不需要的DNA洗 掉。通過PCR等，可以檢測/定量所捕獲的DNA。
結(jié)合到鏈霉抗生物素蛋白顆粒的生物素化雙鏈DNA片段可被用于分離序列特異性 結(jié)合蛋白質(zhì)。通過將合適量的顆粒與過量的生物素化DNA片段混合，生物素化探針被結(jié) 合到所述顆粒上。然后，顆粒/DNA在雜交緩沖液中，在適于所研究蛋白的條件下與蛋白 樣品溫育。利用所述顆粒的磁性，將過量和不需要的蛋白洗掉。捕獲的蛋白可以從探針 洗脫(通過高鹽、低鹽、熱、低pH等)，用于下游應(yīng)用和檢測。
目標(biāo)材料可以任選是生物或合成來源的材料，例如，它可以是分子或一組分子，包 括例如抗體、氨基酸、蛋白質(zhì)、肽、多肽、酶、酶底物、激素、淋巴因子、代謝物、抗 原、半抗原、凝集素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白、毒素、毒物、環(huán)境污染物、 碳水化合物、寡糖、多糖、糖蛋白、糖脂、核苷酸、寡核苷酸、核酸和衍生核酸、DNA、
RNA、天然或合成藥物、受體、病毒顆粒、細(xì)菌顆粒病毒成分、細(xì)胞、細(xì)胞成分、天然 或合成脂囊泡、聚合物膜、聚合物用品(polymer services)和顆粒以及玻璃和塑料表面。 在本發(fā)明的顆粒被用在免疫測定的情況下，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)在涂布后顆粒的甲苯磺 ?；a(chǎn)生在免疫測定中表現(xiàn)出改善的性能的顆粒。因此，在優(yōu)選的實施方式中，攜帶涂 層的顆粒可以被甲苯磺?；缤ㄟ^在堿存在下所述顆粒與甲苯磺酰氯的反應(yīng)。所得 到的甲苯磺酰化涂覆顆粒是新的并且形成本發(fā)明的又一方面。甲苯磺?；侵讣妆?4-磺 酰基團。
而且，此類甲苯磺?；镔|(zhì)可以容易與親合配體反應(yīng)，例如鏈霉抗生物素蛋白，以 形成進一步的新顆粒。
因此，從進一步的方面看，本發(fā)明提供了涂覆聚合物顆粒，其攜帶有超順磁晶體， 具有從至少一種聚異氰酸酯和至少一種二醇形成的涂層，其隨后被甲苯磺?；?，例如通 過與甲苯磺酰氯反應(yīng)，然后任選與親合配體例如鏈霉抗生物素蛋白反應(yīng)。
而且，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，相比于更大尺寸的顆粒例如3pm顆粒，本文所要求保護的 直徑的顆粒具有大大增加的結(jié)合能力?？梢灶A(yù)見，所要求保護的顆粒的結(jié)合能力比更大 的顆粒高200%以上，這允許在測定步驟中使用相當(dāng)更低的量的顆粒。
因此，本發(fā)明的顆粒在吸附/脫附法中具有應(yīng)用，這類似于在反相色譜法(RPC)或 疏水作用色譜法中的機制。反相色譜法是利用溶質(zhì)分子(例如蛋白質(zhì))和固定化疏水配 體(例如顆粒表面)之間的疏水吸附相互作用的分離技術(shù)。該相互作用通常很強，以至 它可以在低離子強度的溶液中發(fā)生并利用有機溶劑(例如乙腈)破壞。反相色譜法可被 用于分餾復(fù)雜蛋白樣品，以及對蛋白樣品進行脫鹽。通常，使用裝入柱子中的固相進行 RPC。本發(fā)明的顆粒能夠進行該技術(shù)而無需柱子、無需樣品稀釋并可以高通量自動化。
疏水作用色譜法(HIC)是利用溶質(zhì)分子(例如蛋白質(zhì))和固定化疏水配體(例如顆 粒表面)之間的疏水吸附相互作用的分離技術(shù)。該相互作用比PRC所利用的相互作用弱， 并需要高鹽濃度促進。因此，降低鹽濃度可用于破壞這些吸附作用。HIC可用于分餾復(fù) 雜蛋白樣品，以及對蛋白樣品進行脫鹽。通常，使用裝入柱子中的固相進行HIC。本發(fā) 明的顆粒能夠進行該技術(shù)而無需柱子、無需樣品稀釋并可以高通量自動化。
參考下面的實施例，本發(fā)明將進一步被描述。


無
具體實施例方式
實施例1
0.3 um磁性羧酸顆粒的聚氨酯涂層
干含量為按重量計3.1%的6.5克磁性顆粒分散體(Ademtech的0212x)被加入反應(yīng) 容器中并放在磁體上。從所述顆粒除去水相，并用5mL0.01M氫化化鈉洗滌所述顆粒 三次，用5mL0.01 M鹽酸洗滌兩次，再次用0.01 M氫化化鈉洗滌，然后用純水洗滌。 進一步，所述顆粒用甲醇洗滌，并被轉(zhuǎn)移到二甘醇二甲醚。顆粒在二甘醇二甲醚的濃度 被調(diào)整到原始值3.1 wt%。
0.5克二苯基甲垸二異氰酸酯(Desmodurvl， Bayer)被加入，并且反應(yīng)容器被置于具 有加熱塊的旋渦攪拌器(vortex)上。溫度被設(shè)定在80'C下20小時。紅外光譜顯示，所 述顆粒己經(jīng)結(jié)合了氨基甲酸乙酯基團和異氰酸酯基團(C二O伸縮的波數(shù)1717 cm"和 N二C二0伸縮的波數(shù)2278 cm-1)。
來自上述的顆粒分散體被加入0.6克的聚乙二醇300中并加熱到80°C 1小時。用20 mL二甘醇二甲醚洗滌所述顆粒兩次，進一步用20mL甲醇洗滌六次，然后轉(zhuǎn)移到水中 (3x20mL)。紅外光譜顯示，所述聚乙二醇被共價結(jié)合到所述顆粒，依據(jù)在2278 cm—1 處N-C-O伸縮的減少以及在1112 cm—1和1071 cm"處醚基團的增加。
權(quán)利要求
1.含有超順磁晶體的涂覆聚合物顆粒的制備方法，所述方法包括使直徑在0.5μm以下、表面官能化的、含超順磁晶體的聚合物顆粒與至少一種聚異氰酸酯和至少一種二醇反應(yīng)。
2. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中至少兩種二醇被使用。
3. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述二醇選自聚乙二醇或是分子式為 HO((CH上O)nH的二醇(其中n是1到15的整數(shù)，以及ra是2到6的整數(shù))。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述二醇是二甘醇和四甘醇。
5. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述二醇之一是聚乙二醇。
6. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚異氰酸酯是4,4-亞甲基雙(異氰酸苯酯) 或含有具有CH2-異氰酸苯酯殘基的4， 4-亞甲基雙(異氰酸苯酯)的聚異氰酸酯。
7. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述聚異氰酸酯是二異氰酸酯。
8. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述顆粒在第一階段與聚異氰酸酯的混合物和至 少一種二醇反應(yīng)，其中所述聚異氰酸酯的摩爾濃度相對于所述二醇(一種或多種)過量， 并且在第二階段中，隨后與至少一種二醇反應(yīng)。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其中兩種二醇在所述反應(yīng)的所述第一階段中被使用， 并且在所述第二階段中一種或兩種二醇被使用。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中二甘醇和四甘醇在所述反應(yīng)的兩個階段被使用。
11. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述顆粒在第一階段在不存在二醇下與聚異氰 酸酯反應(yīng)，并且在第二階段與至少一種二醇反應(yīng)。
12. 如權(quán)利要求ll所述的方法，其中一種二醇被使用，并且所述二醇是聚乙二醇。
13. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述顆粒是胺官能化的。
14. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述表面官能化聚合物顆粒是經(jīng)硝化和還原的 苯乙烯-二乙烯基苯聚合物顆粒。
15. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述聚合物顆粒的直徑在150到250 nm之間。
16. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述涂覆顆粒隨后被甲苯磺酰化。
17. 如權(quán)利要求l所述的方法，其中在所述涂布反應(yīng)之后，所述顆粒被偶聯(lián)到藥物 分子、報告部分或配體。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述配體是單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片 段、核酸、寡核苷酸、蛋白質(zhì)、寡肽、多糖、糖、肽、編碼肽的核酸分子、抗原或藥物。
19. 如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述配體是鏈霉抗生物素蛋白。
20. —種顆粒，其通過權(quán)利要求l所述的方法可得到。
21. 如權(quán)利要求20所述的顆粒在測定中的用途。
22. 如權(quán)利要求21所述的用途，其中所述測定是核酸檢測或是免疫測定。
23. 如權(quán)利要求21所述的顆粒在疏水作用色譜法或反相色譜法中的用途。
全文摘要
含有超順磁晶體的涂覆聚合物顆粒的制備方法，所述方法包括使直徑在0.5μm以下、表面官能化的、含超順磁晶體的聚合物顆粒與至少一種聚異氰酸酯和至少一種二醇反應(yīng)。
文檔編號H01F1/00GK101107525SQ200680002458
公開日2008年1月16日 申請日期2006年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月17日
發(fā)明者拉爾斯·基拉斯, 湯姆-尼爾斯·尼爾森, 蓋爾·弗納姆, 莫達爾·格雷特, 阿爾維德·特呂格弗·貝格, 露特·施密德 申請人:因維特羅根戴諾公司