均勻，如圖4所示。本發(fā)明一個實施例采用過氧化氫酶。
[0025]本發(fā)明所述發(fā)光劑，包含但不限于吖啶酯。吖啶酯與發(fā)光液作用后，不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)。本發(fā)明的一個實施例采用吖啶酯。發(fā)光基底液包含H2O2溶液和堿性溶液，可合并成堿性H2O2溶液，注入發(fā)光基底液存儲池(10);但當穩(wěn)定性不好時，H2O2溶液和堿性溶液應(yīng)分別注入發(fā)光基底液存儲池A( 16)和發(fā)光基底液存儲池B(17)，通過預(yù)混合通道(18)混合均勻，如圖4所示。
[0026]本發(fā)明采用的標記方法包含化學交聯(lián)或生物分子間特異性作用將抗BNP抗體連接到酶或磁顆粒表面，得到抗體標記的酶或抗體標記的磁顆粒。
[0027]本發(fā)明中所述化學交聯(lián)為:當磁顆?；蛎副砻嬗谢钚曰鶊F，可與抗體或質(zhì)控分子直接反應(yīng)時，不需用化學交聯(lián)劑，反之用化學交聯(lián)劑把抗體修飾到磁顆粒表面或酶上。
[0028]在本發(fā)明的實施例中采用化學交聯(lián)法對磁顆?；蛎高M行抗體修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯(lián)劑將磁顆粒表面的官能團(如羧基、氨基)與抗體表面的官能團(如氨基、羧基、醛基等)連接。
[0029]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的一個實施例中，采用EDC/NHS交聯(lián)法對磁顆粒進行修飾，一般步驟為:將磁顆粒溶液與EDC和NHS混合，然后加入一定量的抗體，以緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)，反應(yīng)充分后加入L-甘氨酸封閉，磁鐵吸附富集純化，從而得到抗體修飾的磁顆粒。
[0030]本發(fā)明中所述生物分子間特異性作用包括生物素-親和素系統(tǒng)和抗原-抗體系統(tǒng)。作為優(yōu)選，在本發(fā)明的另一個實施例中，采用生物素-親和素系統(tǒng)結(jié)合方式對BNP抗體進行磁顆粒修飾，該結(jié)合方式具有放大信號的作用，具體為:以EDC將鏈霉親和素連接到磁顆粒表面，生物素連接到蛋白質(zhì)分子表面，通過親和素-生物素間的相互作用，把蛋白質(zhì)分子連接到磁顆粒表面。
[0031]本發(fā)明的BNP抗體包含單克隆抗體和多克隆抗體。該抗體可與BNP結(jié)合。其中酶或發(fā)光劑標記的抗體與磁顆粒標記的抗體可相同或不同。
[0032]本發(fā)明的酶或發(fā)光劑標記抗體溶液和磁顆粒標記抗體溶液均包含緩沖液、蛋白質(zhì)、表面活性劑和防腐劑，且磁顆粒標記抗體溶液還包含糖類。其中HRP標記的配體，緩沖體系中不能含有NaN3; ALP標記配體，緩沖體系不能是磷酸體系。
[0033]本發(fā)明的微流控芯片如圖2所示，微流控芯片由頂部膠帶(12)、芯片基板(I)和底部膠帶(15)構(gòu)成，其中芯片基板成型材料為聚合物，包含但不限于聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、環(huán)氧樹脂等。如圖1所述，芯片基板包含過濾區(qū)(2)、磁顆粒標記BNP抗體包被區(qū)(3)、標記BNP抗體存儲池(4)、反應(yīng)區(qū)(5)、清洗區(qū)(6)、檢測區(qū)(7)、液體釋放通道(8)、清洗液存儲池
(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)和廢液池(11)。
[0034]本發(fā)明的存儲池為液體密封池，所用密封材料包含玻璃、塑料、橡膠、鋁箔和高阻隔薄膜，其中密封材料可為同種材料組成，也可為多種材料組合而成。在物理擠壓下，存儲池可局部破裂，從而把密封的液體釋放出來。其中酶標配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池可采用相同或不同材料和方法制作。在本發(fā)明的一個實施例中，酶標配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池均采用塑料和彈性橡膠密封而成。本發(fā)明的另一個實施例中，酶標配體存儲池采用塑料和彈性橡膠密封而成，而清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池采用高阻隔薄膜密封而成。
[0035]本發(fā)明的過濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化學試劑使液體與細胞分離，實現(xiàn)血漿與紅細胞分離，血漿流到磁顆粒包被區(qū)，而紅細胞停留在濾血膜上，從而減少紅細胞對試驗結(jié)果的干擾。其中所述生物/化學試劑包含凝血劑等，可使紅細胞間連接，形成凝塊，增大尺寸，更容易被濾血膜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)阻擋。
[0036]本發(fā)明的微流控芯片，當存在發(fā)光基底液存儲池A(16)和發(fā)光基底液存儲池B
(17)，應(yīng)在底板上增加發(fā)光基底液預(yù)混合通道(18)，該預(yù)混合通道可為蛇形通道或上下結(jié)構(gòu)混合通道，如圖4所示。
[0037]本發(fā)明的微流控芯片，當發(fā)光基底液由發(fā)光底物和發(fā)光增強液組成，且不能混合并并長時間保存時，可分別注入水泡中，并在底板上增加發(fā)光底物液和發(fā)光增強液預(yù)混合通道(18)，該預(yù)混合通道可為蛇形通道或上下結(jié)構(gòu)混合通道，如圖4所示。
[0038]本發(fā)明的清洗液，用于清洗磁顆粒，去除非特異性吸附的BNP、酶標記物及其他影響檢測結(jié)果的物質(zhì)。清洗液主要包含緩沖體系、蛋白質(zhì)和表面活性劑，其中緩沖體系包含但不限于硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl和醋酸鹽等。清洗液pH 6.0?10.0，當檢測樣本為強酸或強堿性時，PH范圍可放寬。其中蛋白質(zhì)包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等。其中表面活性包含但不限于可包括吐溫20、吐溫80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。
[0039]作為優(yōu)選，本發(fā)明一個實施例中，清洗液為包含牛血清白蛋白、曲拉通X-100和Procl in300的pH7.0硼酸緩沖液。另一個實施例中，清洗液為牛血清白蛋白、吐溫20、曲拉通X-10(^PProclin30(^^pH7.4 磷酸鹽緩沖液。
[0040]在一個實施例中，標記BNP抗體存儲池(4)封入HRP標記抗體，包被區(qū)包被磁顆粒標記抗體，以酶促化學發(fā)光法檢測BNP。另一個實施例中，標記BNP抗體存儲池(4)封入吖啶酯標記抗體，包被區(qū)包被磁顆粒標記抗體，以直接化學發(fā)光法檢測BNP。
[0041 ]本發(fā)明的微流控芯片為快速檢測，檢測時間應(yīng)小于30分鐘，作為優(yōu)選，實施例中采用15分鐘。
[0042]本發(fā)明的抗體儀器包含擠壓氣栗、存儲池和水泡，磁鐵移動，發(fā)光檢測系統(tǒng)等功能，應(yīng)可包含擠壓裝置、磁鐵及移動裝置、檢測系統(tǒng)、控制分析模塊和軟件系統(tǒng)。
[0043]本發(fā)明所述微流控芯片按照以下方法制備:
[0044]步驟I)酶或發(fā)光劑標記抗BNP抗體，磁顆粒標記抗BNP抗體，這兩種抗體可相同或不同；
[0045]步驟2)將酶或發(fā)光劑標記BNP抗體溶液放入標記BNP抗體存儲池中，密封，將磁顆粒標記BNP抗體溶液放入磁顆粒標記BNP抗體包被區(qū)中，干燥，將清洗液和發(fā)光基底液分別注入清洗液存儲池和發(fā)光基底液存儲池中，密封，組裝成微流控芯片。
[0046]本發(fā)明涉及一種定量檢測全血中腦鈉肽的磁微?；瘜W發(fā)光微流控芯片，其測試流程包括:
[0047]步驟I)將微流控芯片放入配套儀器，把全血樣本滴入加樣口( 13)后，開始測試，樣本經(jīng)過濾區(qū)后，到達包被區(qū)，溶解磁顆粒標記配體，磁鐵加速樣本中分析物與磁顆粒標記配體反應(yīng)，磁鐵收集磁顆粒，標記抗體存儲池釋放溶液，磁鐵將磁顆粒移至反應(yīng)區(qū)，磁鐵攪拌加速反應(yīng)，充分反應(yīng)后收集磁顆粒；
[0048]步驟2)清洗液存儲池釋放溶液，磁顆粒清洗后，被移至檢測區(qū)，發(fā)光基底液存儲池釋放溶液，檢測區(qū)產(chǎn)生化學發(fā)光信號，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強度，進而實現(xiàn)分析物的定量檢測。
[0049]本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于病原體、重大疾病(如腫瘤、心血管疾病等)、違禁藥品、毒品檢測、食品安全等多種BNP的定量檢測。
[0050]本發(fā)明的核心是采用磁微粒化學發(fā)光免疫檢測技術(shù)在微流控芯片實現(xiàn)全血中BNP的快速、高靈敏度、準確定量檢測。
[0051]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學、醫(yī)學分析過程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程。
[0052]本發(fā)明在微流控芯片將檢測過程所需的所有試劑組分(酶標抗體、磁顆粒標記抗體、清洗液、發(fā)光基底液等)均集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并通過巧妙溝道設(shè)計，在配套儀器的操作下，實現(xiàn)微流控芯片的一鍵式檢測(只需按開始鍵就能實現(xiàn)檢測，無需復(fù)雜操作)，實現(xiàn)全血分離、免疫反應(yīng)、