一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體（HBcAb）IgM的試紙及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb)IgM的試紙及制備方法，該試紙包括底板、樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，膠體金標(biāo)記墊吸附有HBcAb特異性抗原，檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人IgM抗體印制的質(zhì)控線。制備時(shí)底座和面板嵌合在一起，面板上檢測(cè)窗與試紙芯檢測(cè)反應(yīng)區(qū)對(duì)應(yīng)，加樣孔與試紙芯樣品墊對(duì)應(yīng)，運(yùn)用免疫膠體金法對(duì)人體血清中的乙肝核心抗體進(jìn)行快速檢測(cè)，以便于對(duì)血清中乙肝核心抗體感染的快速診斷，試紙制備方法簡(jiǎn)單，易操作，性能穩(wěn)定特異性強(qiáng)，靈敏性高，可在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域推廣。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙及其制備 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙肝核心抗體也叫抗-HBC，英文縮寫(xiě)是HBcAb。包括乙肝核心抗體IgM和乙肝核心 抗體IgG jBV感染后，在多數(shù)人血清中能檢出此抗體，是一種敏感的血清學(xué)標(biāo)志，也是乙型 肝炎急性感染的早期標(biāo)志，在血清中存在的時(shí)間很長(zhǎng)，高滴度的乙肝核心抗體也是一種傳 染標(biāo)志。在乙型肝炎診斷和鑒別中，雙份血清抗體滴度比較，恢復(fù)期血清的抗體滴度比急性 期有4倍或4倍以上的增長(zhǎng)，可診斷為HBV感染。乙肝核心抗體在病毒性肝炎分型診斷中也有 重要的意義。
[0003] 乙肝核心抗體(HBcAb)是乙肝病毒核心抗原的對(duì)應(yīng)抗體，它不是保護(hù)性抗體，它的 存在反而是受到乙肝病毒侵害的指標(biāo)之一。它包括IgM、IgA、IgG三種類(lèi)型。IgM是判定急性 乙肝的重要指標(biāo)，是機(jī)體感染乙肝病毒后在血液中最早出現(xiàn)的特異性抗體，抗一 HBclgM型， 叫做"乙型肝炎核心抗體IgM"，常常提示為急性HBV感染，或者在慢性乙肝急性發(fā)作、慢性乙 肝進(jìn)入活動(dòng)期，隨著病程的延長(zhǎng)或者病情的好轉(zhuǎn)，IgM逐步消失，而由IgG取代，因此對(duì)于急 性的乙肝病毒感染者，檢測(cè)其IgM是治療過(guò)程的關(guān)鍵因素。
[0004] 目前，乙肝病毒DNA檢測(cè)是判斷乙肝病毒復(fù)制的常用手段，由于DNA檢測(cè)技術(shù)要求 嚴(yán)格，容易受到干擾，因此，一次結(jié)果不足以說(shuō)明問(wèn)題，需要多次檢測(cè)，檢測(cè)周期長(zhǎng)且不能對(duì) 感染程度進(jìn)行很好的檢測(cè)，高滴度的乙肝核心抗體IgM是急性或近期感染的重要指標(biāo)，在慢 性肝炎活動(dòng)期也可呈陽(yáng)性，標(biāo)志乙肝病毒在復(fù)制，有傳染性，所以快速高效地檢驗(yàn)乙肝核心 抗體(HBcAb) IgM的方法在臨床上有一定的研究意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題就是提供一種快速準(zhǔn)確地檢驗(yàn)人體血清中乙肝核心抗體 (HBcAb) IgM的檢測(cè)試紙及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，該試紙 包括底板、樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，所述膠體金標(biāo)記墊吸附有JfflcAb特 異性抗原;所述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人 IgM抗體印制的質(zhì)控線;所述包被有乙肝核心抗體為乙肝病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
[0007] 進(jìn)一步的，所述的膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原制備方法為：在沸騰的 150mL0.02~0.03 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得直徑為20-30nm 的膠體金溶液，用〇. 2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8~9，置于1~5°C保存，備用；以1:3000的 標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入pH8~9的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30%的 PEG10000至終濃度為0.08%，5°C、1800~3000rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3 °C、15000rpm離心1 h，除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙稀葡 聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原。
[0008] 進(jìn)一步的，所述底板由PVC材料制成;所述樣品墊用玻璃纖維棉制成;所述吸水墊 用吸水濾紙制成;所述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)用硝酸纖維素膜(NC膜)制成;所述膠體金標(biāo)記墊用尼龍 膜制成。
[0009] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙的制備方法為：
[0010] (1)膠體金標(biāo)記墊制備：
[0011] a.在沸騰的150mL0.02~0.03 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉 5mL，獲得直徑為20-30nm的膠體金溶液，用0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8~9,置于1~5°C 保存，備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入pH8~9的膠體金溶液中，標(biāo)記 15min后加入30%的PEG10000至終濃度為0.08%，5°C、1800~3000rpm離心30min，除去未結(jié) 合的膠體金顆粒，3 °C、15000rpm離心lh，除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混 合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原； [00 12] b.將標(biāo)記好膠體金的HBcAb特異性抗原均勻點(diǎn)射到尼龍膜上，冷凍干燥，即制得膠 體金標(biāo)記墊。
[0013] (2)檢測(cè)反應(yīng)區(qū)硝酸纖維素膜制備:將所述包被有乙肝核心抗體的多克隆抗體或 單克隆抗體和鼠抗人IgM抗體分別噴在硝酸纖維素膜的兩端不同區(qū)域，形成檢測(cè)線和質(zhì)控 線，得到含有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜，然后放入干燥室中干燥;所述包被有乙肝核 心抗體的多克隆抗體或單克隆抗體濃度為3mg/m 1;所述鼠抗人I gM抗體濃度為2mg/m 1。 [0014] (3)樣品墊制備:將玻璃纖維膜在溫度為38°C的緩沖液中浸泡1.5小時(shí)，得到樣品 墊，然后放入干燥室中干燥;所述緩沖液是指磷酸鹽緩沖液，先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾 水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液校正pH7.5-8。
[0015] (4)試紙制備:將所述樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊從上到下依 次固定在底板上，裁切得到一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(mcAb)IgM的試紙，然后將試紙 與干燥劑一起放入鋁箱袋密封包裝，5°C貯存。
[0016]本發(fā)明試紙的工作原理為:采用膠體金免疫層析技術(shù)，當(dāng)待檢樣品中含有乙肝核 心抗體(HBcAb) IgM時(shí)，在吸水墊的牽引下由于毛細(xì)血管作用HBcAb IgM抗體先和尼龍膜上 膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原結(jié)合形成復(fù)合物，然后復(fù)合物通過(guò)層析作用向前移動(dòng)，上行 到檢測(cè)線時(shí)，遇到鼠抗人IgM抗體，形成兩個(gè)抗體結(jié)合一個(gè)抗原的金標(biāo)復(fù)合物，因有金顆粒 在此沉積，聚集在檢測(cè)帶上，故檢測(cè)線顯紅色，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。
[0017]本發(fā)明的試紙使用方法:按臨床檢驗(yàn)常規(guī)取血并分離血清，取100-150U1血清，用 吸管滴加到制備的試紙的樣品墊上，8-10分鐘判讀結(jié)果:如樣品中含有(HBcAb)IgM抗體，則 其經(jīng)過(guò)膠體金標(biāo)記墊時(shí)，會(huì)與HBcAb特異性抗原結(jié)合，進(jìn)而被檢測(cè)線上的鼠抗人IgM抗體捕 獲，聚集在檢測(cè)帶上形成紅色的沉淀，即為陽(yáng)性，反之則為陰性。
[0018]本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：由于乙肝核心抗體(HBcAb) IgM是判定急性乙肝的重要 指標(biāo)，是機(jī)體感染乙肝病毒后在血液中最早出現(xiàn)的特異性抗體，通過(guò)膠體金免疫層析法檢 測(cè)人體血清中是否存在(HBcAb)IgM，不僅可以快速直接地判斷出是否感染了乙肝病毒病原 體，而且在慢性肝炎活動(dòng)期也可呈陽(yáng)性，標(biāo)志乙肝病毒在復(fù)制，有傳染性，能夠檢測(cè)治療過(guò) 程中乙肝病毒的感染程度，本方法可以直接快速高效的檢測(cè)乙肝核心抗體(HBcAb)IgM，不 需專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，操作方便，快速，適合臨床推廣和運(yùn)用。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例1: 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，該試紙包括底板、樣 品墊、膠體金標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，所述膠體金標(biāo)記墊吸附有HBcAb特異性抗原;所 述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人IgM抗體印制 的質(zhì)控線;所述包被有乙肝核心抗體為乙肝病毒多克隆抗體。
[0020] 其中，所述的膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原制備方法為:在沸騰的150mL0.02 % 氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得直徑為20nm的膠體金溶液，用 0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8，置于1°C保存，備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病 毒抗原加入PH8的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30 %的PEG10000至終濃度為0.08 %，5 °C、1800rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3 °C、15000rpm離心lh，除去上清液，獲得 初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠 體金標(biāo)記的ffficAb特異性抗原。
[0021] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，所述PVC底板購(gòu)自上海金標(biāo)生 物科技有限公司;所述樣品墊用玻璃纖維棉制成;所述吸水墊用吸水濾紙制成;所述檢測(cè)反 應(yīng)區(qū)用硝酸纖維素膜(NC膜)制成;所述膠體金標(biāo)記墊用尼龍膜制成。
[0022] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙的制備方法為：
[0023] (1)膠體金標(biāo)記墊制備：
[0024] a.在沸騰的150mL0.02 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得 直徑為20的膠體金溶液，用0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8，置于1°C保存，備用；以1:3000 的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入pH8的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30 %的 TOG10000至終濃度為0.08%，5°C、1800rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3°C、 15000rpm離心1 h，除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙稀葡聚糖 S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原；
[0025] b.將標(biāo)記好膠體金的HBcAb特異性抗原均勻點(diǎn)射到尼龍膜上，冷凍干燥，即制得膠 體金標(biāo)記墊。
[0026] (2)檢測(cè)反應(yīng)區(qū)硝酸纖維素膜制備:將所述包被有乙肝核心抗體的多克隆抗體和 鼠抗人IgM抗體分別噴在硝酸纖維素膜的兩端不同區(qū)域，形成檢測(cè)線和質(zhì)控線，得到含有檢 測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜，然后放入干燥室中干燥;所述包被有乙肝核心抗體的多克 隆抗體為3mg/m 1;所述鼠抗人I gM抗體濃度為2mg/m 1。
[0027] (3)樣品墊制備:將玻璃纖維膜在溫度為38°C的緩沖液中浸泡1.5小時(shí)，得到樣品 墊，然后放入干燥室中干燥;所述緩沖液是指磷酸鹽緩沖液，先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾 水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液校正pH7.5。
[0028] (4)試紙制備:將所述樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊從上到下依 次固定在底板上，裁切得到一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(mcAb)IgM的試紙，然后將試紙 與干燥劑一起放入鋁箱袋密封包裝，5°C貯存。
[0029] 實(shí)施例2: -種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，該試紙包括底板、樣 品墊、膠體金標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，所述膠體金標(biāo)記墊吸附有HBcAb特異性抗原;所 述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人IgM抗體印制 的質(zhì)控線;所述包被有乙肝核心抗體為乙肝病毒多克隆抗體。
[0030] 其中，所述的膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原制備方法為:在沸騰的150mL0.025% 氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得直徑為25nm的膠體金溶液，用 0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8.5，置于2.5°C保存，備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙 肝病毒抗原加入PH8.5的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30%的TOG10000至終濃度為 0.08 %，5°C、2400rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3 °C、15000rpm離心lh，除去上 清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純 化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原。
[0031] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，所述PVC底板購(gòu)自上海金標(biāo)生 物科技有限公司;所述樣品墊用玻璃纖維棉制成;所述吸水墊用吸水濾紙制成;所述檢測(cè)反 應(yīng)區(qū)用硝酸纖維素膜(NC膜)制成;所述膠體金標(biāo)記墊用尼龍膜制成。
[0032] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙的制備方法為：
[0033] (1)膠體金標(biāo)記墊制備：
[0034] a.在沸騰的150mL0.025 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得 直徑為25nm的膠體金溶液，用0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至8.5，置于2.5°C保存，備用；以 1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入pH8.5的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入 30 %的PEG10000至終濃度為0.08%，5°C、2400rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3 °C、15000rpm離心1 h，除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙稀葡 聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原；
[0035] b.將標(biāo)記好膠體金的HBcAb特異性抗原均勻點(diǎn)射到尼龍膜上，冷凍干燥，即制得膠 體金標(biāo)記墊。
[0036] (2)檢測(cè)反應(yīng)區(qū)硝酸纖維素膜制備:將所述包被有乙肝核心抗體的多克隆抗體和 鼠抗人IgM抗體分別噴在硝酸纖維素膜的兩端不同區(qū)域，形成檢測(cè)線和質(zhì)控線，得到含有檢 測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜，然后放入干燥室中干燥;所述包被有乙肝核心抗體的多克 隆抗體濃度為3mg/m 1;所述鼠抗人I gM抗體濃度為2mg/m 1。
[0037] (3)樣品墊制備:將玻璃纖維膜在溫度為38°C的緩沖液中浸泡1.5小時(shí)，得到樣品 墊，然后放入干燥室中干燥;所述緩沖液是指磷酸鹽緩沖液，先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾 水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液校正pH7.75。
[0038] (4)試紙制備:將所述樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊從上到下依 次固定在底板上，裁切得到一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(mcAb)IgM的試紙，然后將試紙 與干燥劑一起放入鋁箱袋密封包裝，5°C貯存。
[0039] 實(shí)施例3: -種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，該試紙包括底板、樣 品墊、膠體金標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，所述膠體金標(biāo)記墊吸附有HBcAb特異性抗原;所 述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人IgM抗體印制 的質(zhì)控線;所述包被有乙肝核心抗體為乙肝病毒單克隆抗體。
[0040]其中，所述的膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原制備方法為:在沸騰的150mL0.03 % 氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得直徑為30nm的膠體金溶液，用 0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至9,置于5°C保存，備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病 毒抗原加入pH9的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30 %的PEG10000至終濃度為0.08 %，5 °C、3000rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3°C、15000rpm離心lh，除去上清液，獲得 初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠 體金標(biāo)記的ffficAb特異性抗原。
[00411 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，所述PVC底板購(gòu)自上海金標(biāo)生 物科技有限公司;所述樣品墊用玻璃纖維棉制成;所述吸水墊用吸水濾紙制成;所述檢測(cè)反 應(yīng)區(qū)用硝酸纖維素膜(NC膜)制成;所述膠體金標(biāo)記墊用尼龍膜制成。
[0042] 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙的制備方法為：
[0043] (1)膠體金標(biāo)記墊制備：
[0044] a.在沸騰的150mL0.03 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得 直徑為30nm的膠體金溶液，用0.2mol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值至9，置于5°C保存，備用；以1: 3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入pH9的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30%的 TOG10000至終濃度為0.08%，5°C、3000rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，3°C、 15000rpm離心1 h，除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙稀葡聚糖 S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原；
[0045] b.將標(biāo)記好膠體金的HBcAb特異性抗原均勻點(diǎn)射到尼龍膜上，冷凍干燥，即制得膠 體金標(biāo)記墊。
[0046] (2)檢測(cè)反應(yīng)區(qū)硝酸纖維素膜制備:將所述包被有乙肝核心抗體的單克隆抗體和 鼠抗人IgM抗體分別噴在硝酸纖維素膜的兩端不同區(qū)域，形成檢測(cè)線和質(zhì)控線，得到含有檢 測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜，然后放入干燥室中干燥;所述包被有乙肝核心抗體的單克 隆抗體濃度為3mg/m 1;所述鼠抗人I gM抗體濃度為2mg/m 1。
[0047] (3)樣品墊制備:將玻璃纖維膜在溫度為38°C的緩沖液中浸泡1.5小時(shí)，得到樣品 墊，然后放入干燥室中干燥;所述緩沖液是指磷酸鹽緩沖液，先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾 水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液校正pH8。
[0048] (4)試紙制備:將所述樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊從上到下依 次固定在底板上，裁切得到一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(mcAb)IgM的試紙，然后將試紙 與干燥劑一起放入鋁箱袋密封包裝，5°C貯存。
[0049] 臨床統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)：
[0050]臨床患者乙肝核心抗體(HBcAb) IgM檢測(cè)：收集80例疑似乙肝病毒感染患者血清樣 本、20例乙肝病毒感染確診患者，與傳統(tǒng)常用的乙肝病毒DNA檢測(cè)法比較，本發(fā)明試紙條法 有1例疑似病例IgM抗體未能檢出。其靈敏度為99.0%，特異性為100%。檢測(cè)結(jié)果如表1所 不。
[0051 ]表1 :DNA法與本發(fā)明試紙條檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0053]試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明的檢測(cè)試紙條具有較高的靈敏度和特異性，非常適合臨床 應(yīng)用。
[0054]最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制;盡管 參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可 以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換;而 這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，該試紙包括底板、樣品墊、膠體金 標(biāo)記墊、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)和吸水墊，其特征在于:所述膠體金標(biāo)記墊吸附有HBcAb特異性抗原;所 述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)設(shè)有包被有乙肝核心抗體檢測(cè)線的硝酸纖維素膜，以及鼠抗人IgM抗體印制 的質(zhì)控線;所述包被有乙肝核心抗體為乙肝病毒單克隆抗體或多克隆抗體。2. 如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，其特征在于 所述的膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原制備方法為:在沸騰的150mL0.02~0.03 %氯金酸溶 液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲得膠體金溶液，用碳酸鉀調(diào)節(jié)pH值，低溫保存， 備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病毒抗原加入制備的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后 加入30%的PEG10000至終濃度為0.08%，離心除去未結(jié)合的膠體金顆粒，離心除去上清液， 獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲 得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原。3. 如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，其特征在于 所述底板由PVC材料制成;所述樣品墊用玻璃纖維棉制成;所述吸水墊用吸水濾紙制成;所 述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)用硝酸纖維素膜制成;所述膠體金標(biāo)記墊用尼龍膜制成。4. 如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(H B c A b) I g M的試紙的制備方法 為： (1) 膠體金標(biāo)記墊制備： a. 在沸騰的150mL0.02~0.03 %氯金酸溶液中加入新鮮配制的1.5 %檸檬酸鈉5mL，獲 得膠體金溶液，用碳酸鉀調(diào)節(jié)PH值，低溫保存，備用；以1:3000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的乙肝病 毒抗原加入制備的膠體金溶液中，標(biāo)記15min后加入30%的PEG10000至終濃度為0.08%，離 心除去未結(jié)合的膠體金顆粒，離心除去上清液，獲得初步純化的膠體金標(biāo)記物蛋白混合物， 再用丙烯葡聚糖S-400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得膠體金標(biāo)記的HBcAb特異性抗原； b. 將標(biāo)記好膠體金的HBcAb特異性抗原均勻點(diǎn)射到尼龍膜上，冷凍干燥，即制得膠體金 標(biāo)記墊。 (2) 檢測(cè)反應(yīng)區(qū)硝酸纖維素膜制備:將所述包被有乙肝核心抗體的乙肝病毒多克隆抗 體或單克隆抗體和鼠抗人IgM抗體分別噴在硝酸纖維素膜的兩端不同區(qū)域，形成檢測(cè)線和 質(zhì)控線，得到含有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜，然后放入干燥室中干燥。 (3) 樣品墊制備:將玻璃纖維膜在溫度為38°C的緩沖液中浸泡1.5小時(shí)，得到樣品墊，然 后放入干燥室中干燥。 (4) 試紙制備:將所述樣品墊、膠體金標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊從上到下依次固 定在底板上，裁切得到一種檢測(cè)血清中乙肝核心抗體(HBcAb) IgM的試紙，然后將試紙與干 燥劑一起放入鋁箱袋密封包裝，5 °C貯存。
【文檔編號(hào)】G01N33/576GK105891489SQ201610218809
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月8日
【發(fā)明人】王秀梅
【申請(qǐng)人】王秀梅